微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)【合格考全員做】(學(xué)業(yè)水平一、二)1．下列關(guān)于培養(yǎng)基的說法，正確的是()A．任何培養(yǎng)基都必須含有碳源、氮源、礦質(zhì)元素、水B．培養(yǎng)基只有兩類：液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基C．固體培養(yǎng)基中加入少量水即可制成液體培養(yǎng)基D．配制培養(yǎng)基時要注意各種組分的濃度和比例2．下列關(guān)于微生物的營養(yǎng)的說法，正確的是()A．同一種物質(zhì)不可能既作碳源又作氮源B．凡是碳源都能提供能量C．除水以外的無機物僅提供無機鹽D．無機氮源也可能提供能量3．自養(yǎng)微生物與異養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基的主要差別是()A．碳源B．氮源C．無機鹽D．特殊營養(yǎng)物質(zhì)4．下表為某培養(yǎng)基的配方，有關(guān)敘述正確的是()成分牛肉膏葡萄糖K2HPO4瓊脂蒸餾水含量10g10g2g適量定容至1000mLA.能在此培養(yǎng)基上生長的只有大腸桿菌B．該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)合適的pH后就可以接種使用C．該培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖，屬于氮源的物質(zhì)是牛肉膏D．從物理性質(zhì)看該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基5．下列操作與消毒或滅菌無關(guān)的是()A．接種前用酒精燈火焰灼燒接種環(huán)B．接種前用酒精擦拭雙手C．將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)D．在酒精燈的火焰旁完成接種6．培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種針、實驗操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌或消毒方法依次是()①化學(xué)藥物消毒②灼燒滅菌③干熱滅菌④紫外線消毒⑤高壓蒸汽滅菌⑥巴氏消毒A．⑤③②①④⑥B．①②③④⑤⑥C．⑥②③④①⑤D．③④②①⑥⑤7．下列有關(guān)倒平板操作的敘述，錯誤的是()A．將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上B．使打開的錐形瓶瓶口迅速通過火焰C．將培養(yǎng)皿打開，培養(yǎng)皿蓋倒放在桌面上D．等待培養(yǎng)基冷卻凝固后需要倒過來放置8．將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基都放入37℃恒溫箱的目的是()A．對比觀察培養(yǎng)基有沒有被微生物利用B．對比分析培養(yǎng)基是否被雜菌污染C．沒必要放入未接種的培養(yǎng)基D．為了下次接種時再使用9．下列關(guān)于平板劃線操作的敘述，錯誤的是()A．每次劃線前都要灼燒接種環(huán)B．灼燒接種環(huán)后，要立即用接種環(huán)接種，防止雜菌污染接種環(huán)C．要在酒精燈火焰旁進(jìn)行D．接種前，要將菌種試管口通過火焰10．某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況而進(jìn)行了實驗。實驗包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察、計數(shù)。請回答與此實驗相關(guān)的問題：(1)培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉分別為細(xì)菌的培養(yǎng)提供了________和________。除此之外，培養(yǎng)基還必須含有的基本成分是________和________。(2)對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，應(yīng)該采用的方法是________________。(3)為了盡快觀察到細(xì)菌培養(yǎng)的實驗結(jié)果，應(yīng)將接種了湖水樣品的平板置于____________中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設(shè)定在37℃。要使該實驗所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時在另一平板上接種________作為對照進(jìn)行實驗。(4)培養(yǎng)20小時后，觀察到平板上有形態(tài)和顏色不同的菌落，這說明湖水樣品中有________種細(xì)菌。一般來說，菌落總數(shù)越多，湖水遭受細(xì)菌污染的程度越________?！镜燃壙歼x學(xué)做】(學(xué)業(yè)水平三、四)11．下列關(guān)于制備固體培養(yǎng)基時倒平板的敘述，正確的是()A．倒好的培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿要進(jìn)行干熱滅菌B．應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上C．為防止微生物侵入培養(yǎng)基，要在酒精燈火焰旁進(jìn)行操作D．倒好培養(yǎng)基后，立即將平板倒過來放置，不需要冷凝12．下圖是微生物平板劃線示意圖。劃線的順序為1→2→3→4→5。下列操作方法正確的是()A．操作前要將接種環(huán)放在火焰邊灼燒滅菌B．劃線操作應(yīng)在火焰上進(jìn)行C．在5區(qū)域中才可以得到所需菌落D．在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)滅菌13．(多選)下列有關(guān)平板劃線法的操作，正確的是()A．使用已滅菌的接種環(huán)、培養(yǎng)皿，操作過程中不再滅菌B．打開含菌種的試管需通過火焰滅菌，取出菌種后需馬上塞上棉塞C．不能將最后一次的劃線與第一次的劃線相連D．最后將平板倒置，放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)14．(多選)如圖為酵母菌純培養(yǎng)過程中的部分操作步驟，下列說法正確的是()A．①步驟使用的培養(yǎng)基已經(jīng)滅菌并調(diào)節(jié)過pHB．②步驟接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落C．④中每次劃線前后都需要對接種環(huán)進(jìn)行灼燒處理D．①②③步驟操作時都需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行15．在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個細(xì)胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是一個純化的細(xì)菌菌落。實驗基本步驟如下：eq\x(配制培養(yǎng)基)→eq\x(滅菌、倒平板)→eq\x(培養(yǎng))→eq\x(觀察)請回答下列有關(guān)問題：(1)配制培養(yǎng)基時，各成分含量確定的原則是______________________________________。不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分裝前，要進(jìn)行的是________________。(2)倒平板的適宜溫度是50℃左右，原因是____________________________。待平板冷凝后，要將平板倒置，這樣既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可防止____________________________________。(3)純化菌株時，若使用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種，應(yīng)選擇的涂布工具是圖中的________；若使用平板劃線法進(jìn)行接種，應(yīng)選擇的接種工具是圖中的________。ABCD(4)劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤有________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(5)若用大腸桿菌進(jìn)行實驗，使用過的培養(yǎng)基及培養(yǎng)物必須經(jīng)過________處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴散?！舅仞B(yǎng)養(yǎng)成練】16．炭疽桿菌能引起人畜患炭疽病。炭疽桿菌呈竹節(jié)狀排列，菌落呈卷發(fā)狀。對炭疽病疑似患者，可根據(jù)噬菌體的寄主專一性，通過實驗進(jìn)行確診。①細(xì)菌培養(yǎng)：采集疑似患者的樣本，分離培養(yǎng)，獲得可疑菌落。②細(xì)菌鑒定：實驗流程圖如下所示。(1)對配制的液體培養(yǎng)基要采用______________________(方法)進(jìn)行滅菌。培養(yǎng)基配制和滅菌時，滅菌與調(diào)節(jié)pH的先后順序是____________________________。(2)挑選可疑菌落制片后，用____________觀察，可看到呈竹節(jié)狀排列的桿菌。(3)接種可疑菌后，35℃培養(yǎng)24h，液體培養(yǎng)基變渾濁，原因是________________。圖中的對照組試管中應(yīng)加入____________。兩組試管同時培養(yǎng)6h后，進(jìn)行比較，若實驗組液體培養(yǎng)基的渾濁度________(填“提高”“降低”或“不變”)，則可明確疑似患者被炭疽桿菌感染。此實驗依據(jù)的原理是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。課后分層檢測案2微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)1．解析：不同微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需求不同，如自養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基不需要加碳源，自生固氮菌的培養(yǎng)基不需要加氮源；按不同的分類標(biāo)準(zhǔn)，培養(yǎng)基種類也不同，如培養(yǎng)基按物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基兩大類，按培養(yǎng)基用途可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基；固體培養(yǎng)基是在液體培養(yǎng)基里加入瓊脂等凝固劑配制而成的；配制培養(yǎng)基時要注意各種組分的濃度和比例。答案：D2．解析：對一些微生物來說，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源；CO2是光能自養(yǎng)細(xì)菌的碳源，但不能提供能量；CO2和N2都是無機物，也是微生物的碳源和氮源；硝化細(xì)菌所利用的氮源是氨，氨為無機氮源，同時氨也為硝化細(xì)菌提供用以化能合成作用的能源。答案：D3．解析：自養(yǎng)微生物利用的碳源是二氧化碳、碳酸鹽等無機碳，異養(yǎng)微生物利用的碳源是含碳有機物，所以培養(yǎng)兩種微生物的培養(yǎng)基的主要差別是碳源。答案：A4．解析：在此培養(yǎng)基上能生長多種微生物，不僅僅只有大腸桿菌，A錯誤；該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)合適的pH后要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，B錯誤；該培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖，屬于氮源的物質(zhì)是牛肉膏，C正確；從物理性質(zhì)看該培養(yǎng)基含有瓊脂，屬于固體培養(yǎng)基，D錯誤。答案：C5．解析：接種用具、器皿、空氣中都存在大量微生物，必須進(jìn)行嚴(yán)格地消毒或滅菌。A、B、D三項都是實驗操作過程中涉及的消毒或滅菌的措施。將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)與滅菌無關(guān)。答案：C6．解析：培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌法滅菌；培養(yǎng)皿能耐高溫且需要保持干燥，可用干熱滅菌法滅菌；接種針可用灼燒滅菌法滅菌，以達(dá)到迅速徹底的滅菌效果；實驗操作者的雙手可用化學(xué)藥物如酒精進(jìn)行消毒；空氣可用紫外線消毒法；為了不破壞牛奶的營養(yǎng)成分可采用巴氏消毒法。答案：A7．解析：整個倒平板過程要防止外來雜菌的入侵，因此滅過菌的培養(yǎng)皿應(yīng)放在火焰旁，打開的錐形瓶瓶口應(yīng)迅速通過火焰，培養(yǎng)皿應(yīng)打開一條稍大于瓶口的縫隙，而不能將培養(yǎng)皿蓋完全打開，等待培養(yǎng)基冷卻凝固后需要倒過來放置。答案：C8．解析：對未接種的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，起到對照作用，可用來確定培養(yǎng)基是否被雜菌污染。答案：B9．解析：灼燒接種環(huán)后，將接種環(huán)伸入管內(nèi)，讓環(huán)端先接觸培養(yǎng)基上未長菌的部位，使其冷卻，然后輕輕挑取少量菌體，再進(jìn)行接種。灼燒接種環(huán)后，不可立即用接種環(huán)接種，以免接種環(huán)溫度過高，將菌種殺死。答案：B10．解析：用于培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基中，一般含有微生物所需要的碳源、氮源、水和無機鹽等成分，碳源、氮源一般分別由糖類和蛋白質(zhì)類物質(zhì)所提供。對培養(yǎng)基常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。在檢測湖水中細(xì)菌的污染情況時，應(yīng)設(shè)置對照實驗，才能得出可靠的結(jié)果。答案：(1)氮源碳源無機鹽水(2)高壓蒸汽滅菌(3)恒溫培養(yǎng)箱無菌水(4)多高11．解析：應(yīng)該在倒平板之前將培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，將培養(yǎng)皿進(jìn)行干熱滅菌，A錯誤；倒平板時，用左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(10～20mL)倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋，B錯誤；為防止微生物侵入培養(yǎng)基，要在酒精燈火焰旁進(jìn)行操作，C正確；倒好培養(yǎng)基后，等培養(yǎng)基冷凝后再將平板倒過來放置，D錯誤。答案：C12．解析：在每次劃線前后都要對接種環(huán)進(jìn)行滅菌，接種環(huán)的滅菌方法應(yīng)是在火焰上灼燒，接種時劃線操作是在火焰旁進(jìn)行的。在5個區(qū)域中，只要有單個活細(xì)菌，通過培養(yǎng)即可獲得所需菌落。答案：D13．解析：平板劃線過程中，接種環(huán)在每次劃線之前和之后均需灼燒滅菌，A錯誤；打開含菌種的試管需通過火焰滅菌，取出菌種后還需通過火焰滅菌，再塞上棉塞，B錯誤；最后一次的劃線用于篩選出單個菌落，不能與第一次的劃線相連，C正確；劃線操作結(jié)束后，將平板倒置，放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，D正確。答案：CD14．解析：①步驟為倒平板，使用的培養(yǎng)基已經(jīng)滅菌并調(diào)節(jié)過pH，A正確；②步驟為接種，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)冷卻后再挑取菌落，以防高溫殺死酵母菌，B錯誤；④中每次劃線前后對接種環(huán)進(jìn)行灼燒處理，是為了殺死接種環(huán)上殘留的菌種，使劃線時接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單菌落，C正確；①②③步驟操作時都需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，防止雜菌污染，D正確。答案：ACD15．解析：(1)培養(yǎng)基中各成分含量要根據(jù)微生物的生長需要來確定。微生物生長需要一定的pH，所以培養(yǎng)基裝瓶前需要調(diào)節(jié)pH。(3)由圖可知，A為接種環(huán)，B為涂布器，C為膠頭滴管，D為接種針，故稀釋涂布平板法應(yīng)選擇的涂布工具是B，平板劃線法應(yīng)選擇的接種工具是A。(4)由題意分析可知，造成此現(xiàn)象的原因可能有兩個：一是接種環(huán)灼燒后未冷卻，菌種接觸到高溫的接種環(huán)而死亡；二是劃第二劃線區(qū)域第一條線時未從第一區(qū)域末端開始。(5)有的大腸桿菌會釋放一種強烈的毒素，因此，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴散。答案：(1)所培養(yǎng)微生物對各營養(yǎng)成分的需要量調(diào)節(jié)pH(2)溫度過高會燙手，過低培養(yǎng)基又會凝固皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染(3)BA(4)①接種環(huán)灼燒后未冷卻；②劃線未從第一區(qū)域末端開始(5)滅菌16．解析：(1)培養(yǎng)基一般采用高壓蒸汽滅菌。在配制培養(yǎng)基時，需要先調(diào)節(jié)pH，后滅菌。(2)菌落可以通過肉眼觀察，