生物樣本庫的建立與管理生物標本庫

(biologicalspecimenbank,BSB):是指標準化地收集、保存用于各種研究的正?；虿±順吮?，包括人體器官組織、全血、血漿、血清、生物體液或經(jīng)處理過的生物樣本（DNA、RNA、蛋白等）以及與這些生物樣本相關(guān)的臨床、病理、治療、隨訪、知情同意等資料及其質(zhì)量控制、信息管理與應用系統(tǒng)。

重要性

人體生物樣本為聯(lián)系日益發(fā)現(xiàn)的分子（基因、蛋白等）信息與臨床疾病關(guān)系的橋梁。尤其應用于：鑒定、驗證藥物靶點；研究疾病發(fā)病機制；疾病相關(guān)分子標記物篩選；分子分型與個性化治療等。標準化生物樣品庫是基因組、功能基因組等生命科學研究與生物醫(yī)藥研發(fā)的關(guān)鍵源頭，是眾多重要基因、蛋白等科研成果快速產(chǎn)業(yè)化、應用到臨床（分子分型檢測、診斷與疾病的預測、預防及個性化治療等的重要保證，毫無疑問的也是生命科學與生物醫(yī)藥技術(shù)自主創(chuàng)新體系中至關(guān)重要的環(huán)節(jié)與保證。有調(diào)查顯示，多數(shù)公眾對于利用外科手術(shù)切除組織進行腫瘤發(fā)病機制或分子標志物的研究持肯定態(tài)度，并認為這是對手術(shù)切除組織的最好利用。在一項對住院、門診、急診5000例患者的隨機調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，89.3％的患者同意將其樣本的遺傳信息用于研究，但要求采用匿名形式。美國的Vanderbilt大學醫(yī)學中心2005年啟動了一項旨在將準備丟棄的患者血樣再收集以建立DNA數(shù)據(jù)庫計劃。該計劃估計，未來5年內(nèi)可收到30萬份以上的患者血樣，以進行疾病的基因型與表型相關(guān)性分析。越是大規(guī)模的人群遺傳學研究越是需要大樣本的生物資源，故得到社會公眾的認可很有必要。目前，許多國家的大型醫(yī)療機構(gòu)已建立組織樣本庫與數(shù)據(jù)庫，但因遺傳信息屬個人隱私，應當受到保護，也招致不少擔憂。1998至2002年間就曾有8個國際機構(gòu)提出建立以群體為基礎的遺傳資源庫計劃，主要內(nèi)容是收集與儲存血液及組織等生物樣本，并收集與這些樣本相關(guān)聯(lián)的醫(yī)學與生活方式等信息。該計劃的共同目標是通過此項計劃的實施，闡明某些疾病的遺傳易感性和基因的復雜性，從而達到改善人類健康與醫(yī)學診療水平的目的。但由于倫理學、涉及個人隱私等原因，該計劃在一些國家擱淺。公眾對于腫瘤組織庫建立的認知程度生物樣本庫政策法規(guī)技術(shù)標準

倫理規(guī)范ISO標準實驗室安全臨床實驗室倫理運輸標準操作規(guī)范（SOPs）

質(zhì)量控制標準樣本采集樣本處理樣本質(zhì)量檢驗樣本儲存樣本運輸DNA質(zhì)量鑒定、RNA質(zhì)量鑒定、蛋白質(zhì)質(zhì)量鑒定知情同意書質(zhì)量審查樣本運輸樣本轉(zhuǎn)移協(xié)議倫理委員會倫理審查ISO15189:2003醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力的專用要求CNAS-CL02醫(yī)學實驗室-質(zhì)量和能力的認可準則ISO/IEC17025:2005檢測和校準實驗室能力的通用要求CNAS-CL01檢測和校準實驗室認可準則ISO9001:2008/GBT19001-2008質(zhì)量管理系統(tǒng)要求GB/T1.1-2009標準化工作導則：標準的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則ISO標準實驗室安全GB19489-2008實驗室生物安全通用要求

CNAL/AC30-2005實驗室生物安全認可準則WS/T233-2002微生物和生物醫(yī)學實驗室生物安全通用準則GB50346-2004生物安全實驗室建筑技術(shù)規(guī)范臨床實驗室GB/T20468-2006臨床實驗室定量測定室內(nèi)質(zhì)量控制指南GB/T20469-2006臨床實驗室設計總則GB/T20470-2006臨床實驗室室間質(zhì)量評價要求WS/T102-1998臨床檢驗項目分類與代碼WS/T224-2002真空采血管及其添加劑WS/T225-2002臨床化學檢驗血液標本的收集與處理WS/T227-2002臨床檢驗操作規(guī)程編寫要求WS/T228-2002定量臨床檢驗方法的初步評價WS/T230-2002臨床診斷中聚合酶鏈反應（PCR）技術(shù)應用WS/T249-2005臨床實驗室廢物處理原則WS/T250-2005臨床實驗室質(zhì)量保證的要求WS/T251-2005臨床實驗室安全準則WS/T255-2005臨床檢驗醫(yī)學參考測量實驗室赫爾辛基宣言涉及人類為研究對象的生物醫(yī)學研究了國際倫理方針指南關(guān)于DNA序列申請專利的聲明：專利關(guān)于早期發(fā)布原始序列數(shù)據(jù)有關(guān)專利申請問題的聲明關(guān)于DNA取樣的聲明：控制與獲取世界人類基因組與人權(quán)宣言涉及人體的生物醫(yī)學研究倫理審查辦法（試行）人類基因治療申報臨床試驗指導原則關(guān)于利益共享的聲明關(guān)于基因治療的聲明關(guān)于人類基因組數(shù)據(jù)庫的聲明國際涉及人類的生物醫(yī)學研究倫理準則人類遺傳數(shù)據(jù)國際宣言綱要人體生物醫(yī)學研究國際倫理指南倫理物流術(shù)語液氮生物容器中國民用航空危險品運輸管理規(guī)定危險物品航空安全運輸技術(shù)細則運輸血液樣本采集操作規(guī)程組織樣本采集操作規(guī)程樣本采集生物標本采集和儲存研究成功的關(guān)鍵要求在采集和儲存過程中不能受到“污染”

儲存的生物標本在任何時候進行檢測都可以獲得一致的結(jié)果所有的生物標本都應有詳細的背景材料和鑒別標識DNA提取和純化操作規(guī)程RNA提取和純化操作規(guī)程蛋白質(zhì)提取和保存操作規(guī)程細胞系建立操作規(guī)程血液樣本處理操作規(guī)程樣本處理條碼標簽設定使用規(guī)范樣本儲存不同生物樣本對于低溫儲存的溫度要求腫瘤組織庫建立中一個非常重要的問題是生物樣本對于儲存溫度的要求。多數(shù)科學家認為。低溫有利于長期保存生物大分子的完整性，如經(jīng)高溫加工處理的石蠟包埋組織塊內(nèi)的RNA分子會出現(xiàn)嚴重降解。理論上講，組織儲存溫度越低越好。理想的組織儲存環(huán)境是大型液氮罐，但并非所有醫(yī)療中心均有這樣的設備，因此，目前仍以低溫冰箱儲存為主。由于多數(shù)機構(gòu)手術(shù)取材地點與組織標本庫并不在同一樓內(nèi)，組織標本的轉(zhuǎn)移、運輸也需一定時間，故各單位可酌情配備一些不太昂貴的組織儲存設備。如活檢組織在-20℃環(huán)境中至少可保存6個月：在-40℃的環(huán)境中則可保存3年；若將組織保存在高濃度甘油中，則在-10℃～0的條件下也可保存2年。若將組織保存在高濃度甘油中，再儲存于-80℃的低溫冰箱中，則可長期保存，但這些組織不適用于RNA等研究。此外，組織標本庫建立中提倡采用不間斷性電源設備，以確保標本庫內(nèi)標本在短時斷電情況下不會受到影響。腫瘤組織樣本一般在離體后應盡快收集，并保存于-80℃的深低溫冰箱內(nèi)：血液樣本與其他臨床檢驗項目應一起采集，采集后先置于4℃冰箱內(nèi)保存，盡量在3～5h內(nèi)離心，分離血清、血漿，最長不得超過12h。分離獲得的血清、血漿則需儲存于-40℃的環(huán)境中，血清或血漿分離時一般予2500r／min離心15min。血液的離心沉淀物或提取后的DNA樣本可長期儲存于-145℃下。將組織樣本存放于-196℃的液氮中則可儲存多年，但若置于-80℃下，則其生物大分子活性保持時間會明顯縮短。低溫凍存被公認為是組織與器官長期保存最有效的方法之一。其原理是通過降低細胞的代謝率起到保護組織細胞的作用。但樣本庫內(nèi)的生物樣本是否可被持續(xù)使用還依賴于對儲存樣本的質(zhì)量控制，該項工作主要由病理學家進行。病理學家需對提取的組織先進行病理切片觀察．若其中腫瘤成分超過75％則認為質(zhì)量良好，如不足65％則應從研究中剔除。對樣本得以儲存的病例應進行定期臨床隨訪，以便獲得疾病治療效果、臨床進展及是否生存等重要資料。從有關(guān)單位獲得的知情同意書看，92％的患者同意出院以后接受隨訪。當前發(fā)展起來的分子生物學新技術(shù)大多要求研究樣本中的核酸或蛋白質(zhì)保存完好，故對于組織樣本質(zhì)量要求很高。目前，國內(nèi)外大型腫瘤組織庫以采用一80℃深低溫冰箱儲存為主，但在這樣的低溫環(huán)境下生物大分子活力究竟能保存多久仍無定論。眾多研究顯示，長期凍存對于DNA大分子的穩(wěn)定性影響不大，甚至石蠟包埋組織塊中的DNA也可進行分子生物學分析。RNA分子則易被廣泛存在于細胞內(nèi)、皮膚、唾液、汗液及周圍環(huán)境中的RNA酶所降解。使用液氮保存是保存RNA活性的最理想方法，當溫度降至液氮溫度時，細胞組織中所有的生物化學、生物物理過程均處于停止狀態(tài)但限于空間及經(jīng)費等原因，大型液氮儲藏罐或液氮冰箱尚難以推廣普及。對于組織RNA的質(zhì)量分析主要依據(jù)28S與18S的比值進行，比值如在2左右認為質(zhì)量好，比值小于l則認為RNA已降解。有關(guān)長期低溫凍存對于蛋白質(zhì)分子的影響還缺乏系統(tǒng)性研究報道，需各生物樣本庫在今后的質(zhì)量控制分析研究中不斷積累經(jīng)驗加以闡明。生物樣本長期保存的質(zhì)量控制倫理委員會知情同意書分為兩部分。第一部分知情部分：1．項目的介紹項目名稱、研究者、申辦者、撰寫版本號或日期。聲明受試者參加的項目是一個試驗性研究工作。闡明研究的目的。描述試驗的過程。說明研究中受試者將參與的時間和期限。隨訪的次數(shù)和過程。入選標準/排除標準。2．說明參與本研究可能帶來的益處：受試者本人及社會群體3．應說明研究的保密性，受試者的記錄將被妥善保管，作保密處理，但同時也應告知受試者資料有可能會接受有關(guān)部門(倫理委員會、食品藥品監(jiān)督管理局)的監(jiān)察，但不得對外披露其內(nèi)容。4．明確試驗過程中聯(lián)系醫(yī)生的姓名和聯(lián)系辦法，他將回答受試者所有關(guān)于試驗的問題，并能當受試者出現(xiàn)緊急情況時及時聯(lián)系。5．闡明受試者的權(quán)利（自由參加和退出、知情、同意），參加試驗是自愿的，即使中途退出試驗也不會有權(quán)益上的損失或影響治療。6．研究者或指定的研究人員將對受試者作詳細說明，以使其充分了解以上內(nèi)容，給受試者充分時間考慮并作出是否參加研究的決定。7．該試驗方案經(jīng)倫理委員會批準實施，試驗過程中有任何違反研究方案的情況，受試者可以直接向倫理委員會咨詢。第二部分同意部分：1．我已認真閱讀該知情同意書，研究人員已經(jīng)向我做了詳盡說明并解答了我的關(guān)問題，我已充分知曉以