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細(xì)菌的分類(lèi)及鑒定細(xì)菌的生物化學(xué)試驗(yàn)原理:由于細(xì)菌各自的酶系統(tǒng)不同,新陳代謝的產(chǎn)物也有所不同,而這些產(chǎn)物又各具有不同的生物化學(xué)特性。為此,可利用生物化學(xué)的方法來(lái)鑒別細(xì)菌的類(lèi)別,這種試驗(yàn)稱(chēng)為細(xì)菌的生化反應(yīng)試驗(yàn)常用檢查方法碳水化合物代謝試驗(yàn)氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)碳源利用試驗(yàn)呼吸酶類(lèi)試驗(yàn)抑菌試驗(yàn)碳水化合物代謝試驗(yàn)糖(醇、苷)類(lèi)發(fā)酵試驗(yàn)原理由于細(xì)菌含有發(fā)酵不同糖類(lèi)的酶,故分解糖的能力不同,終末產(chǎn)物亦不全都。應(yīng)用鑒定細(xì)菌最主要的試驗(yàn),格外對(duì)腸桿菌科細(xì)菌的鑒定尤為重要。氧化一發(fā)酵試驗(yàn)(O/F試驗(yàn))原理氧化型:僅在有氧環(huán)境中分解葡萄糖發(fā)酵型:在有氧或無(wú)氧環(huán)境中都能分解葡萄糖產(chǎn)堿型:在有氧或無(wú)氧環(huán)境中都不能分解葡萄糖結(jié)果:兩支培育基均無(wú)變化為產(chǎn)堿型;兩支培育基均產(chǎn)酸為發(fā)酵型;若不加石蠟的培育基產(chǎn)酸為氧化型。應(yīng)用:腸桿菌科細(xì)菌(發(fā)酵型)非發(fā)酵菌(產(chǎn)堿型/氧化型)葡萄球菌(發(fā)酵型)微球菌(氧化型)β-半乳糖苷酶試驗(yàn)原理:有的細(xì)菌可產(chǎn)生β-半乳糖苷酶,能分解鄰-硝基酚β-D-半乳糖苷(ONPG),而生成黃色的鄰-硝基酚,在很低濃度下也可檢出。結(jié)果:菌懸液呈現(xiàn)黃色為陽(yáng)性反應(yīng),一般在20~30min內(nèi)顯色。應(yīng)用:飛快及遲緩分解乳糖的細(xì)菌ONPG試驗(yàn)為陽(yáng)性,而不發(fā)酵乳糖的細(xì)菌為陰性。本試驗(yàn)主要用于遲緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定。七葉苷水解試驗(yàn)原理:七葉苷七葉素黑色化合物培育基:七葉苷培育基、膽汁七葉苷培育基。細(xì)菌枸櫞酸鐵結(jié)果:培育基變?yōu)楹谏珵殛?yáng)性,不變色者為陰性。應(yīng)用:D群鏈球菌(+)其它鏈球菌(-)甲基紅試驗(yàn)原理:葡萄糖丙酮酸混合酸(pH)
醇酮醛(pH)紅色反應(yīng)(+)橘黃色(-)細(xì)菌甲基紅試劑培育基:葡萄糖蛋白胨水培育基。應(yīng)用:大腸埃希菌(+)產(chǎn)氣腸桿菌(-)腸桿菌科中沙門(mén)菌屬、志賀菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬等為陽(yáng)性,而腸桿菌屬則為陰性。V-P試驗(yàn)
原理:葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇二乙酰紅色化合物(+)培育基:葡萄糖蛋白胨水培育基細(xì)菌OH-O胍基結(jié)果:在數(shù)分鐘內(nèi)消滅紅色為陽(yáng)性;如無(wú)紅色消滅且于35℃4h后仍如故者即為陰性。應(yīng)用:常與甲基紅試驗(yàn)一起使用,由于前者陽(yáng)性的細(xì)菌,后者通常為陰性。產(chǎn)氣腸桿菌(+)大腸埃希菌(-)蛋白質(zhì)和氨基酸代謝試驗(yàn)吲哚試驗(yàn)原理色氨酸吲哚玫瑰吲哚(紅色)應(yīng)用腸道桿菌的鑒定。大腸埃希菌(+)沙門(mén)菌屬(-)對(duì)二甲基氨基苯甲醛硫化氫試驗(yàn)原理含硫氨基酸硫化氫硫化鉛/硫化亞鐵(黑色)應(yīng)用腸桿菌科菌屬間的鑒定。
細(xì)菌醋酸鉛/硫酸亞鐵尿素(脲)酶試驗(yàn)原理:無(wú)色尿素氨紅色應(yīng)用:腸桿菌科中變形桿菌屬的鑒定。細(xì)菌苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)原理
苯丙氨酸苯丙酮酸10%氯化鐵綠色化合物應(yīng)用:腸桿菌科的鑒定變形桿菌屬、摩根菌屬、普羅威登斯菌屬(+)氨基酸脫羧酶試驗(yàn)原理:氨基酸特異性脫羧酶胺+CO2指示劑變色應(yīng)用:腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。如肺炎克雷伯菌賴(lài)氨酸為陽(yáng)性,鳥(niǎo)氨酸為陰性。明膠液化試驗(yàn)原理:明膠明膠酶氨基酸失去凝固力應(yīng)用:腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。如沙雷菌、一般變形桿菌、陰溝腸桿菌等。碳源利用試驗(yàn)枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)原理枸櫞酸鹽碳酸鹽+氨(pH)溴麝香草酚藍(lán)綠色深藍(lán)色應(yīng)用:腸桿菌科細(xì)菌的鑒定埃希菌屬、志賀菌屬、愛(ài)德華菌屬(-)呼吸酶類(lèi)試驗(yàn)細(xì)胞色素氧化酶試驗(yàn)原理鹽酸二甲基對(duì)苯二銨醌類(lèi)化合物(深紫色)應(yīng)用奈瑟菌屬、假單胞菌屬(+)腸桿菌科(-)細(xì)菌Cyt氧化酶過(guò)氧化氫酶(觸酶)試驗(yàn)原理某些細(xì)菌分泌過(guò)氧化氫酶,使過(guò)氧化氫生成水和初生態(tài)氧,繼而形成氧分子消滅氣泡。應(yīng)用金黃色葡萄球菌、奈瑟菌屬(+)鏈球菌屬(-)(血漿)凝固酶試驗(yàn)原理金葡血漿凝固酶應(yīng)
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