黑龍江省安達(dá)市七中2023學(xué)年下學(xué)期高三生物試題第二次階段檢測(cè)試題考試試卷請(qǐng)考生注意：1．請(qǐng)用2B鉛筆將選擇題答案涂填在答題紙相應(yīng)位置上，請(qǐng)用0．5毫米及以上黑色字跡的鋼筆或簽字筆將主觀題的答案寫(xiě)在答題紙相應(yīng)的答題區(qū)內(nèi)。寫(xiě)在試題卷、草稿紙上均無(wú)效。2．答題前，認(rèn)真閱讀答題紙上的《注意事項(xiàng)》，按規(guī)定答題。一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1．下列判斷細(xì)胞死活的方法，不正確的是A．若細(xì)胞被臺(tái)盼藍(lán)染液染色，則表明該細(xì)胞為活細(xì)胞B．若黑藻細(xì)胞中葉綠體在運(yùn)動(dòng)，則表明該細(xì)胞為活細(xì)胞C．若細(xì)胞中線粒體被健那綠染色，則表明該細(xì)胞為活細(xì)胞D．若洋蔥鱗片葉外表皮細(xì)胞發(fā)生質(zhì)壁分離，則表明該細(xì)胞為活細(xì)胞2．在灌漿期后，麻雀受高粱散發(fā)的香味吸引大量遷飛至農(nóng)田，但并不是所有高粱都受麻雀青睞，有些只有極少籽粒被啄食。研究發(fā)現(xiàn)，不受青睞的高粱通過(guò)基因調(diào)控合成了高含量單寧（澀味）和低濃度香味揮發(fā)物，進(jìn)而減少被麻雀采食。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．高粱流入麻雀的能量占高粱同化量的20%B．高梁的可遺傳變異為進(jìn)化提供了原材料C．在麻雀的選擇下，高粱種群的基因頻率會(huì)發(fā)生定向改變D．高粱和麻雀之間存在共同進(jìn)化3．下圖表示某細(xì)菌細(xì)胞中部分氨基酸的代謝過(guò)程。V至Z代表不同的酶，①至⑥代表不同的氨基酸。每一種氨基酸對(duì)該細(xì)菌都是必需的。野生型的細(xì)菌只需要從環(huán)境中攝取氨基酸①便可存活，而此細(xì)菌的某變異種只有在培養(yǎng)基中同時(shí)提供①③④氨基酸才能生存，該變異種細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)不存在的酶是（）A．X、W B．V、W C．X、Y D．V、Z4．下列關(guān)于遺傳信息表達(dá)過(guò)程的敘述，正確的是（）A．一個(gè)DNA分子只能轉(zhuǎn)錄形成一種類型的信使RNAB．遺傳信息能完整的從堿基序列傳遞到氨基酸序列C．不同種類的細(xì)胞可能同時(shí)合成相同類型的mRNAD．RNA聚合酶結(jié)合起始密碼后解開(kāi)DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)5．下列關(guān)于用顯微鏡觀察細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)，敘述正確的是A．轉(zhuǎn)換物鏡時(shí)應(yīng)該手握物鏡小心緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)B．以洋蔥鱗片葉內(nèi)表皮為材料不能觀察到質(zhì)壁分離C．蘇丹Ⅲ染色后的花生子葉細(xì)胞中可觀察到橘黃色顆粒D．在新鮮黑藻小葉臨時(shí)裝片中可進(jìn)行葉綠體形態(tài)觀察和計(jì)數(shù)6．為減少環(huán)境污染、保護(hù)生態(tài)環(huán)境，必須走可持續(xù)發(fā)展的道路。我國(guó)作為《濕地公約》締約國(guó)，對(duì)濕地生態(tài)系統(tǒng)進(jìn)行保護(hù)、開(kāi)發(fā)和建設(shè)責(zé)無(wú)旁貸。下列有關(guān)敘述正確的是（）A．濕地生態(tài)系統(tǒng)能調(diào)節(jié)氣候、蓄洪防旱，體現(xiàn)了生物多樣性的直接價(jià)值B．人類活動(dòng)可以影響濕地生態(tài)系統(tǒng)演替的速度，但不能改變演替的方向C．少量生活污水流入人工濕地不會(huì)造成明顯影響，這說(shuō)明濕地生態(tài)系統(tǒng)具有恢復(fù)力穩(wěn)定性D．濕地生態(tài)系統(tǒng)中捕食者的存在有利于提高群落的豐富度和增加營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)的復(fù)雜程度7．如圖所示為基因型AaBb（兩對(duì)基因獨(dú)立遺傳）的某種二倍體動(dòng)物的兩個(gè)正處在分裂狀態(tài)的細(xì)胞。下列說(shuō)法正確的是A．兩個(gè)細(xì)胞的分裂方式相同B．兩個(gè)細(xì)胞中染色體組數(shù)和同源染色體對(duì)數(shù)相同C．兩個(gè)細(xì)胞有發(fā)生相同類型的可遺傳變異D．兩個(gè)細(xì)胞中染色體上出現(xiàn)所示的A與a的原因一定相同8．（10分）質(zhì)子泵在泵出H+時(shí)造成膜兩側(cè)的質(zhì)子濃度差為陰離子的跨膜運(yùn)輸提供了驅(qū)動(dòng)力。下圖為某植物根細(xì)胞通過(guò)質(zhì)子泵吸收H2PO4-和NO3-的示意圖，下列說(shuō)法正確的是（）A．運(yùn)輸H2PO4-和NO3-的載體蛋白的空間結(jié)構(gòu)相同B．抑制細(xì)胞呼吸不會(huì)影響H2PO4-和NO3-的跨膜運(yùn)輸C．質(zhì)子泵同時(shí)具有酶的功能和載體蛋白的功能D．圖中離子的運(yùn)輸方式和根細(xì)胞吸收水的方式相同二、非選擇題9．（10分）2020年3月16日，中國(guó)科學(xué)家陳薇院士團(tuán)隊(duì)研制的重組新冠疫苗通過(guò)臨床研究注冊(cè)審評(píng)，獲批進(jìn)入臨床試驗(yàn)。重組新冠疫苗的制備流程如圖?；卮鹣铝袉?wèn)題。（1）步驟②需要___________作為原料。步驟③需要的工具酶是_____________。（2）被用作載體的Ad5應(yīng)具有的特點(diǎn)是________________（答出1點(diǎn)即可）（3）步驟④是___________________。（4）重組疫苗注入志愿者體內(nèi)后，S蛋白基因指導(dǎo)合成的S蛋白作為_(kāi)______________，刺激機(jī)體產(chǎn)生能與之相結(jié)合的抗體，抗體的分泌量可作為檢測(cè)疫苗對(duì)志愿者免疫效果的指標(biāo)。參加臨床試驗(yàn)的志愿者需要滿足的條件之一是_________________（填“有”或“無(wú)”）SARS-CoV-2感染史，理由是_____________________。（5）為探究疫苗的注射劑量對(duì)志愿者產(chǎn)生的免疫效果，需進(jìn)一步試驗(yàn)，請(qǐng)寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)思路______________。10．（14分）雙子葉植物甲含有抗旱基因而具有極強(qiáng)的抗早性，乙抗旱性低。若將該抗旱基因轉(zhuǎn)移至植物乙中，有可能提高后者的抗旱性。利用基因工程技術(shù)將甲的抗旱基因轉(zhuǎn)移至乙的體內(nèi)，可提高植物乙的抗旱性。回答下列問(wèn)題：（1）為獲取抗早基因．可以先從植物甲中提取該基因mRNA然后經(jīng)___________________過(guò)程獲得cDNA?；蚬こ痰暮诵牟襟E是_____________________________。（2）使用PCR技術(shù)擴(kuò)增抗旱基因時(shí)，可選擇圖中A、B、C、D四種單鏈DNA片段中的___________________作為引物，此過(guò)程還需要____________酶，但不需要解旋酶，而是利用____________使DNA解旋。（3）獲得了抗旱基因的植物乙，種植時(shí)一般要與傳統(tǒng)作物間隔足夠遠(yuǎn)的距離，以免___________________。（4）人們擔(dān)心這種行為會(huì)打開(kāi)“潘多拉魔盒”，驅(qū)使一些科研者開(kāi)展人類基因編輯研究，出現(xiàn)“基因完美的定制人”。在這些研究中，外源基因能與受體細(xì)胞DNA成功重組的原因是______________，這種重組DNA技術(shù)若用于對(duì)人類基因進(jìn)行編輯，由于是隨機(jī)的，因此有非常大的風(fēng)險(xiǎn)，甚至導(dǎo)致生命活動(dòng)必需的基因遭到破壞。11．（14分）斑馬魚(yú)的HuC基因在早期胚胎神經(jīng)細(xì)胞中選擇性表達(dá)，研究人員構(gòu)建了HuC基因的表達(dá)載體，并導(dǎo)入到斑馬魚(yú)細(xì)胞中研究其作用，請(qǐng)回答：（1）為獲取HuC基因，研究人員從早期胚胎神經(jīng)細(xì)胞中提取HuC基因的mRNA，通過(guò)_________獲得大量的DNA，進(jìn)而構(gòu)建出HuC基因的______________。（2）DraⅢ，SnaBⅠ等是質(zhì)粒上不同限制酶的切割位點(diǎn)。為獲得HuC基因——綠色熒光蛋白基因的表達(dá)載體，需要對(duì)HuC基因和質(zhì)粒選用圖中的____________酶進(jìn)行切割，這樣做的原因是_________。不選擇NotⅠ酶切割的原因是_____________。（3）用Ca2+處理大腸桿菌，大腸桿菌細(xì)胞即能夠______________。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可以采用在熒光顯微鏡下觀察________________________或者在培養(yǎng)基中添加______________，篩選出導(dǎo)入表達(dá)載體的大腸桿菌。12．為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因相連，導(dǎo)入油菜細(xì)胞并獲得了轉(zhuǎn)基因油菜品種。（1）研究人員依據(jù)基因的已知序列設(shè)計(jì)引物，采用__________技術(shù)從陸地棉基因文庫(kù)中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫(kù)中獲取轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因。在上述引物設(shè)計(jì)時(shí)，分別在引物中加入上圖所示酶的識(shí)別序列，這樣可以用____________________酶處理兩個(gè)基因后，得到____________端（填圖中字母）相連的融合基因。（2）將上述融合基因插入右圖所示Ti質(zhì)粒的T－DNA中，構(gòu)建_______________并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。將獲得的農(nóng)桿菌接種在含______________的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液。（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時(shí)間，此過(guò)程的目的是_________________________，進(jìn)一步篩選后培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因油菜。（4）提取上述轉(zhuǎn)基因油菜的mRNA，在____________酶的作用下獲得cDNA，再依據(jù)融合基因的DNA片段設(shè)計(jì)引物進(jìn)行擴(kuò)增，對(duì)擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)，可判斷融合基因是否________。

參考答案一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1、A【解題分析】

本題涉及到細(xì)胞的有關(guān)內(nèi)容，判斷細(xì)胞死活的方法有很多，活細(xì)胞生物膜具有選擇透過(guò)性，細(xì)胞死亡后就會(huì)失去這一特性，活細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)具有流動(dòng)性，細(xì)胞死亡后，細(xì)胞質(zhì)不再運(yùn)動(dòng)，健那綠是活細(xì)胞染色劑，只能將活細(xì)胞中的線粒體染成藍(lán)綠色，成熟的植物細(xì)胞能夠發(fā)生質(zhì)壁分離和復(fù)原的說(shuō)明細(xì)胞有活性。【題目詳解】A、臺(tái)盼藍(lán)屬于大分子物質(zhì)，不能進(jìn)入細(xì)胞膜，只有細(xì)胞死亡后，才能進(jìn)入細(xì)胞，所以能夠被臺(tái)盼藍(lán)染色的細(xì)胞是死亡的細(xì)胞；A錯(cuò)誤；

B、活細(xì)胞的葉綠體能過(guò)隨著細(xì)胞質(zhì)的運(yùn)動(dòng)而運(yùn)動(dòng)，所以葉綠體能夠運(yùn)動(dòng)的細(xì)胞屬于活細(xì)胞；B正確；

C、健那綠屬于活細(xì)胞線粒體專一性染色劑，能夠?qū)⒒罴?xì)胞中的線粒體染成藍(lán)綠色，細(xì)胞質(zhì)接近于無(wú)色，死亡細(xì)胞的線粒體不能被染上顏色，C正確；

D、成熟的植物細(xì)胞的原生質(zhì)層相當(dāng)于半透膜，所以，活細(xì)胞可以發(fā)生質(zhì)壁分離和復(fù)原現(xiàn)象，死亡的細(xì)胞不能發(fā)生質(zhì)壁分離，D正確。

故選A?！绢}目點(diǎn)撥】本題總結(jié)了幾個(gè)判斷細(xì)胞是否有活性的方法，這幾個(gè)方法就是對(duì)課本試驗(yàn)的總結(jié)，所以關(guān)鍵的是掌握課本有關(guān)試驗(yàn)內(nèi)容，靈活運(yùn)用課本知識(shí)。2、A【解題分析】

現(xiàn)代生物進(jìn)化理論的基本觀點(diǎn)：種群是生物進(jìn)化的基本單位，生物進(jìn)化的實(shí)質(zhì)在于種群基因頻率的改變；突變和基因重組產(chǎn)生生物進(jìn)化的原材料；自然選擇使種群的基因頻率發(fā)生定向的改變并決定生物進(jìn)化的方向；隔離是新物種形成的必要條件。共同進(jìn)化是指不同物種之間以及生物與環(huán)境之間相互影響中不斷進(jìn)化和發(fā)展，即共同進(jìn)化。【題目詳解】A、傳遞效率是指下一營(yíng)養(yǎng)級(jí)的同化量與上一營(yíng)養(yǎng)級(jí)同化量的比值，一般傳遞效率在10%~20%，因此能量傳遞效率發(fā)生在兩個(gè)營(yíng)養(yǎng)級(jí)之間而不是兩種生物之間，A錯(cuò)誤；B、可遺傳變異包括突變和基因重組，突變和基因重組產(chǎn)生生物進(jìn)化的原材料，B正確；C、自然選擇使種群的基因頻率發(fā)生定向的改變，因此在麻雀的選擇下，高粱種群的基因頻率會(huì)發(fā)生定向改變，C正確；D、根據(jù)以上分析可知，高粱和麻雀即不同物種之間在相互影響中不斷進(jìn)化和發(fā)展，存在共同進(jìn)化，D正確。故選A。3、A【解題分析】

1.基因控制性狀包括兩種方式：一是通過(guò)控制酶的合成控制代謝過(guò)程，間接控制生物體的性狀，二是通過(guò)控制蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)直接控制生物的性狀；2、題圖分析，酶V能將氨基酸①轉(zhuǎn)化成氨基酸②，酶W能將氨基酸②轉(zhuǎn)化成氨基酸④，酶Y能將氨基酸④轉(zhuǎn)化成氨基酸⑥，酶X能將氨基酸②轉(zhuǎn)化成氨基酸③，酶Z能將氨基酸④轉(zhuǎn)化成氨基酸⑤?！绢}目詳解】由題意可知“細(xì)菌的變種只有在培養(yǎng)基中提供氨基酸①③④才能生存”說(shuō)明該變種細(xì)菌無(wú)合成氨基酸①③④的酶，必須直接提供氨基酸①③④；培養(yǎng)基中需提供氨基酸③④說(shuō)明培養(yǎng)基中不存在將氨基酸②轉(zhuǎn)化成氨基酸③④的酶X和W，而氨基酸①是培養(yǎng)該細(xì)菌必須要提供的，根據(jù)分析可知該突變菌細(xì)胞內(nèi)不存在的酶是X和W，即A正確。故選A。4、C【解題分析】

轉(zhuǎn)錄、翻譯的比較：轉(zhuǎn)錄翻譯時(shí)間個(gè)體生長(zhǎng)發(fā)育的整個(gè)過(guò)程場(chǎng)所主要在細(xì)胞核細(xì)胞質(zhì)的核糖體模板DNA的一條鏈mRNA原料4種游離的核糖核苷酸20種游離的氨基酸條件酶（RNA聚合酶等）、ATP酶、ATP、tRNA產(chǎn)物一個(gè)單鏈RNA多肽鏈特點(diǎn)邊解旋邊轉(zhuǎn)錄一個(gè)mRNA上結(jié)合多個(gè)核糖體，順次合成多條肽鏈堿基配對(duì)A-UT-AC-GG-CA-UU-AC-GG-C遺傳信息傳遞DNA→mRNAmRNA→蛋白質(zhì)意義表達(dá)遺傳信息，使生物表現(xiàn)出各種性狀【題目詳解】A、一個(gè)DNA上有多個(gè)基因，所以可以轉(zhuǎn)錄形成多個(gè)RNA分子，A錯(cuò)誤；B、由于基因中的啟動(dòng)子、終止子和內(nèi)含子都不編碼氨基酸，因此遺傳信息在從堿基序列到氨基酸序列的傳遞過(guò)程中有所損失，B錯(cuò)誤；C、同一個(gè)體不同種類的細(xì)胞核DNA相同，可以合成相同類型的mRNA，例如與有氧呼吸有關(guān)的mRNA分子C正確；D、RNA聚合酶結(jié)合DNA分子的某一啟動(dòng)部位后，解開(kāi)DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)，D錯(cuò)誤。故選C。5、C【解題分析】

1、葉肉細(xì)胞中的葉綠體，呈綠色、扁平的橢球形或球形，散布于細(xì)胞質(zhì)中，可以在高倍顯微鏡下觀察它的形態(tài)；2、脂肪可用蘇丹Ⅲ染液（或蘇丹Ⅳ染液）鑒定，呈橘黃色（或紅色）；3、發(fā)生質(zhì)壁分離的細(xì)胞為：活的成熟的植物細(xì)胞?！绢}目詳解】A、轉(zhuǎn)換物鏡時(shí)應(yīng)該手握物鏡轉(zhuǎn)換器小心緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)，A錯(cuò)誤；B、以洋蔥鱗片葉內(nèi)表皮為材料也能觀察到質(zhì)壁分離，只需要將視野調(diào)暗，B錯(cuò)誤；C、蘇丹Ⅲ染色后的花生子葉細(xì)胞中可觀察到橘黃色顆粒，C正確；D、在新鮮黑藻小葉裝片中可進(jìn)行葉綠體形態(tài)和分布的觀察，不可以計(jì)數(shù)，D錯(cuò)誤。故選C?！绢}目點(diǎn)撥】本題主要考查顯微鏡的使用及相關(guān)實(shí)驗(yàn)，要求考生理解顯微鏡使用的步驟，理解實(shí)驗(yàn)材料的選擇要求。6、D【解題分析】

1、初生演替：是指一個(gè)從來(lái)沒(méi)有被植物覆蓋的地面，或者是原來(lái)存在過(guò)植被，但是被徹底消滅了的地方發(fā)生的演替；次生演替：原來(lái)有的植被雖然已經(jīng)不存在，但是原來(lái)有的土壤基本保留，甚至還保留有植物的種子和其他繁殖體的地方發(fā)生的演替；人類活動(dòng)往往會(huì)使群落演替按照不同于自然演替的速度和方向進(jìn)行。2、生物多樣性的價(jià)值：包括直接價(jià)值、間接價(jià)值、潛在價(jià)值。（1）直接價(jià)值：是指能為人類提供形式多樣的食物、纖維、燃料和建材等；（2）間接價(jià)值：是指對(duì)生態(tài)平衡、生物圈穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)功能；（3）潛在價(jià)值：指目前人類尚不清楚的價(jià)值?！绢}目詳解】A、濕地生態(tài)系統(tǒng)能調(diào)節(jié)氣候、蓄洪防旱，體現(xiàn)了生物多樣性的間接價(jià)值，A錯(cuò)誤；B、人類活動(dòng)可以影響濕地生態(tài)系統(tǒng)演替的速度和演替的方向，B錯(cuò)誤；C、少量生活污水流入人工濕地不會(huì)造成明顯影響，這說(shuō)明濕地生態(tài)系統(tǒng)具有抵抗力穩(wěn)定性，C錯(cuò)誤；D、濕地生態(tài)系統(tǒng)中捕食者的存在有利于提高群落的豐富度和增加營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)的復(fù)雜程度，D正確。故選D。7、C【解題分析】

分析題圖：圖A細(xì)胞含同源染色體，且著絲點(diǎn)排列在赤道板上，是有絲分裂的中期；圖B細(xì)胞不含同源染色體，并且姐妹染色單體分開(kāi)，是減數(shù)第二次分裂的后期?！绢}目詳解】A、兩個(gè)細(xì)胞所屬的分裂方式不同，分別是有絲分裂和減數(shù)分裂，A錯(cuò)誤；B、兩個(gè)細(xì)胞中染色體組數(shù)都為兩個(gè)，但圖B細(xì)胞中不含同源染色體，B錯(cuò)誤；

C、依據(jù)題目?jī)蓪?duì)基因獨(dú)立遺傳，說(shuō)明兩圖中含A或a的染色體上都有b的變異均來(lái)自于染色體的易位，故兩個(gè)細(xì)胞發(fā)生了相同類型的可遺傳變異，C正確；D、前一細(xì)胞中染色體上出現(xiàn)所示的A與a的原因是復(fù)制時(shí)出現(xiàn)了基因突變，后一細(xì)胞則可能是基因突變也可能是四分體時(shí)期的交叉互換，故兩個(gè)細(xì)胞中染色體上出現(xiàn)所示的A與a的原因不一定相同，D錯(cuò)誤。故選C?！绢}目點(diǎn)撥】本題考查細(xì)胞分裂圖的識(shí)別等知識(shí)點(diǎn)，考查考生的理解能力和識(shí)圖分析能力，解題的關(guān)鍵是正確理解相關(guān)知識(shí)。8、C【解題分析】

由圖可知，質(zhì)子泵在泵出H+時(shí)需要消耗能量，為主動(dòng)運(yùn)輸，而同時(shí)利用膜兩側(cè)的質(zhì)子濃度差為陰離子的跨膜運(yùn)輸提供了驅(qū)動(dòng)力，說(shuō)明質(zhì)子泵吸收H2PO4-和NO3-所需要的能量來(lái)自膜兩側(cè)的質(zhì)子濃度差，為主動(dòng)運(yùn)輸?shù)姆绞健！绢}目詳解】A、運(yùn)輸H2PO4-和NO3-的載體蛋白種類不相同，所以二者的空間結(jié)構(gòu)存在差異，A錯(cuò)誤；B、質(zhì)子泵在泵出H+時(shí)需要消耗ATP，而質(zhì)子泵吸收H2PO4-和NO3-所需要的能量來(lái)自膜兩側(cè)的質(zhì)子濃度差，所以抑制細(xì)胞呼吸會(huì)影響H+運(yùn)輸，使膜兩側(cè)的質(zhì)子濃度差變小，進(jìn)而影響H2PO4-和NO3-的跨膜運(yùn)輸，B錯(cuò)誤；C、質(zhì)子泵能夠水解ATP，具有ATP水解酶的功能，同時(shí)也可以運(yùn)輸H+，具有載體蛋白的功能，C正確；D、題圖中離子的運(yùn)輸方式為主動(dòng)運(yùn)輸，而水的運(yùn)輸方式為自由擴(kuò)散，兩種運(yùn)輸方式不同，D錯(cuò)誤。故選C?！绢}目點(diǎn)撥】本題主要考查物質(zhì)的跨膜運(yùn)輸，意在考查考生能理解題意，判斷不同物質(zhì)的運(yùn)輸方式。二、非選擇題9、脫氧核苷酸Taq酶（或限制酶）能自我復(fù)制（有一個(gè)或多個(gè)切割位點(diǎn)、有標(biāo)記基因位點(diǎn)、對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害）基因表達(dá)載體的構(gòu)建抗原無(wú)抗原無(wú)有SARS-CoV-2感染史的志愿者血清中會(huì)存在一定量的相應(yīng)抗體，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生干擾給不同組志愿者分別注射不同劑量的疫苗，一段時(shí)間后采集血樣檢測(cè)相應(yīng)抗體的水平【解題分析】

二次免疫：記憶細(xì)胞可以在抗原消失后很長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)保持對(duì)這種抗原的記憶，當(dāng)再接觸這種抗原時(shí)，能迅速增殖、分化，快速產(chǎn)生大量的抗體，故二次免疫反應(yīng)快而且強(qiáng)烈。題圖分析，圖中為重組新冠疫苗的制備流程，其中①為獲取新冠病毒RNA的過(guò)程；②為以新冠病毒RNA為模板逆轉(zhuǎn)錄出cDNA的過(guò)程；③表示通過(guò)PCR技術(shù)獲取S蛋白基因的過(guò)程；④為將腺病毒和S蛋白基因重組的過(guò)程；⑤新冠疫苗的實(shí)驗(yàn)并檢測(cè)?！绢}目詳解】（1）步驟②為逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，合成的產(chǎn)物是DNA，因此需要脫氧核苷酸作為原料。步驟③為利用PCR技術(shù)擴(kuò)增獲得S蛋白基因的過(guò)程，該過(guò)程需要的酶是Taq酶（耐高溫的DNA聚合酶），同時(shí)還需要用限制酶對(duì)獲得的S蛋白基因進(jìn)行修飾。（2）Ad5作為載體應(yīng)具有的特點(diǎn)是有多個(gè)限制酶切位點(diǎn)、有標(biāo)記基因、在宿主細(xì)胞中可以存活表達(dá)、大小適中而且對(duì)宿主細(xì)胞無(wú)害等等。（3）步驟④為構(gòu)建目的基因表達(dá)載體的過(guò)程，即重組新冠疫苗的過(guò)程。（4）重組疫苗注入志愿者體內(nèi)后，S蛋白基因指導(dǎo)合成的S蛋白作為抗原，刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫過(guò)程，機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生能與之相結(jié)合的抗體，抗體的分泌量可作為檢測(cè)疫苗對(duì)志愿者免疫效果的指標(biāo)。參加臨床試驗(yàn)的志愿者需要滿足無(wú)SARS-CoV-2感染史，即未感染過(guò)新冠病毒的志愿者，因?yàn)楦腥具^(guò)新冠病毒的人體內(nèi)含有對(duì)新冠病毒的記憶細(xì)胞，若注射疫苗會(huì)出現(xiàn)二次免疫的特征，即體內(nèi)的記憶細(xì)胞會(huì)迅速增殖分化產(chǎn)生大量的漿細(xì)胞，漿細(xì)胞合成并分泌大量的抗體，從而導(dǎo)致無(wú)法檢測(cè)出該疫苗的真正效果。（5）實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑樘骄恳呙绲淖⑸鋭┝繉?duì)志愿者產(chǎn)生的免疫效果，根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康目芍搶?shí)驗(yàn)的自變量為疫苗的劑量，因變量為抗體產(chǎn)生量的變化，因此設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)如下：將同性別且年齡相當(dāng)?shù)闹驹刚唠S機(jī)分成若干組，然后給不同組別的志愿者注射不同劑量梯度的疫苗，一段時(shí)間之后，檢測(cè)志愿者體內(nèi)的抗體產(chǎn)生量，做好記錄并比較、分析得出結(jié)論?！绢}目點(diǎn)撥】熟知關(guān)于疫苗制備的過(guò)程是解答本題的關(guān)鍵！能從圖中找到各個(gè)步驟的含義和操作要點(diǎn)是解答本題的另一關(guān)鍵！10、逆轉(zhuǎn)錄構(gòu)建基因表達(dá)載體B、C耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）高溫目的基因隨花粉傳播，與傳統(tǒng)植物發(fā)生雜交，造成基因污染兩者都有共同的結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成【解題分析】

1、基因工程的操作程序：目的基因的獲??；基因表達(dá)載體的構(gòu)建；將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞；目的基因的檢測(cè)與鑒定。其中基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心步驟。2、PCR技術(shù)又叫多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是體外合成DNA的技術(shù)，通常有三個(gè)基本步驟一一變性、復(fù)性和延伸。PCR過(guò)程需要的引物不是RNA，而是人工合成的DNA單鏈，其長(zhǎng)度通常為20-30個(gè)脫氧核苷酸，通常需要兩種引物，分別與DNA分子的兩條鏈互補(bǔ)。PCR過(guò)程中DNA的解旋不依靠解旋酶，而是將模板DNA加熱至90℃以上。一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使成為單鏈，50℃時(shí)引物與DNA模板鏈之間形成氫鍵，72℃時(shí)使單鏈從引物的3’開(kāi)始延伸。在這個(gè)過(guò)程中需要耐高溫的DNA聚合酶?！绢}目詳解】（1）cDNA文庫(kù)是通過(guò)mRNA經(jīng)過(guò)逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程獲得的，故為獲取抗旱基因，可以先從植物甲中提取該基因mRNA，然后經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程獲得cDNA?；虮磉_(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心步驟。（2）使用PCR技術(shù)擴(kuò)增抗旱基因時(shí)，根據(jù)DNA合成的方向是從5’端到3’端，且引物和模板鏈的方向是相反的，故可選擇圖中的B、C作為引物，此過(guò)程還需要耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶），但不需要解旋酶，而是利用高溫使DNA解旋。（3）基因污染是指轉(zhuǎn)基因植物的花粉與近緣物種進(jìn)行雜交，從而使得近緣物種有了轉(zhuǎn)基因物種的性狀，造成不必要的麻煩。故在大田里栽培轉(zhuǎn)基因植物時(shí)，要求轉(zhuǎn)基因植物與傳統(tǒng)作物之間應(yīng)該間隔足夠遠(yuǎn)的距離，以免目的基因隨花粉傳播，與傳統(tǒng)植物發(fā)生雜交，造成基因污染。（4）外源基因能與受體細(xì)胞DNA成功重組的原因是兩者都有共同的結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成。【題目點(diǎn)撥】熟練掌握基因工程的操作步驟以及相關(guān)的原理是解答本題的關(guān)鍵。11、逆轉(zhuǎn)錄和PCR技術(shù)擴(kuò)增cDNA文庫(kù)EcoRⅠ酶和BamHⅠ可以防止目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化以及目的基因與質(zhì)粒反向連接破壞標(biāo)記基因無(wú)法篩選（且沒(méi)有啟動(dòng)子）吸收周圍環(huán)境中的DNA分子表達(dá)的綠色熒光蛋白菌落卡那霉素【解題分析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因—DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA—分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)—抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！绢}目詳解】（1）從早期胚胎神經(jīng)細(xì)胞中提取HuC基因的mRNA，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程合成目的基因，并通過(guò)PCR技術(shù)在體外擴(kuò)增可獲得大量的目的基因，進(jìn)而構(gòu)建出HuC基因的cDNA文庫(kù)。（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，不能破壞運(yùn)載體上的啟動(dòng)子、復(fù)制原點(diǎn)，以及運(yùn)載體上需要保留標(biāo)記基因，為了防止目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化以及目的基因與質(zhì)粒反向連接，常用不同的限制酶切割質(zhì)粒和目的基因，結(jié)合圖示中各種限制酶的酶切位點(diǎn)可知，為獲得HuC基因——綠色熒光蛋白基因的表達(dá)載體，需要對(duì)HuC基因和質(zhì)粒選用圖中的EcoRⅠ酶和BamHⅠ酶進(jìn)行切割。卡那霉素