髓過氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)又稱過氧化物酶，是一種重要的含鐵溶酶體，存在于髓系細胞(重要是中性粒細胞和單核細胞)的嗜苯胺藍顆粒中，是髓細胞的特異性標志，隨著對MPO研究的進一步，人們發(fā)現(xiàn)MPO基因多態(tài)性造成個體對某些疾病易感性的差別，與人類多個疾病的發(fā)生、發(fā)展親密有關，因此越來越受到國內(nèi)外學者的重視。髓過氧化物酶MPO研究1.MPO的構造髓過氧化物酶(MPO)是由中性粒細胞、單核細胞和某些組織的巨噬細胞分泌的含血紅素輔基的血紅素蛋白酶，是血紅素過氧化物酶超家族組員之一。MPO是I相代謝酶。每個酶分子有兩個鐵素基團，順磁共振波譜表明血紅素中的鐵是在甲?；t素部分。MPO的合成是粒細胞進入循環(huán)之前在骨髓內(nèi)合成并貯存于嗜天青顆粒內(nèi)，外界刺激可造成中性粒細胞聚集，釋放髓過氧化物酶(MPO)。在成熟的粒細胞中，MPO是含量最豐富的糖蛋白，約占外周血多形核中性粒細胞(PMNs)內(nèi)總蛋白質(zhì)含量的5%，血液中95%的MPO來源于PMNs。MPO的相對分子質(zhì)量為150×103，是由2個亞單位聚合而成的二聚體，每個亞單位又由一條重鏈(α鏈,相對分子質(zhì)量約60×103)和一條輕鏈(β鏈,相對分子質(zhì)量約15×103)所構成。2個亞單位在α鏈處由1個二硫鍵相連。重鏈含有亞鐵卟啉基團，闡明MPO是鐵依賴性的。MPO以3種亞形存在于髓系細胞中，分別為MPOⅠ、Ⅱ、Ⅲ。3種亞型重要是重鏈有差別，輕鏈的差別較小，造成它們在相對分子質(zhì)量及疏水性等方面不同，3種亞型在功效上的差別還不明確，有待進一步研究。2.MPO基因及其多態(tài)性人髓過氧化物酶基因位于染色體17q23?q24，含有12個外顯子和11個內(nèi)含子，長約14638bp，調(diào)控其基因體現(xiàn)的是生長因子。MPO的mRNA在早幼粒細胞的體現(xiàn)水平最高，另首先是原始粒細胞、幼稚和原始單核細胞；當細胞分化到成熟時期，MPO基因體現(xiàn)水平快速下降?，F(xiàn)已知MPO基因首先體現(xiàn)的是一條相對分子質(zhì)量為89×103的前體蛋白(precursorprotein)，通過翻譯后加工，切割成α和β兩種亞基，再聚合為成熟的MPO分子，加上糖鏈，最后形成有功效的MPO。MPO在基因體現(xiàn)過程中存在的缺點，造成MPO基因DNA序列發(fā)生變化，影響其活力。MPO基因的多態(tài)性影響其基因的轉(zhuǎn)錄和體現(xiàn)，對機體的疾病易感性有一定的影響。Chevrier等發(fā)現(xiàn)了外顯子11處和啟動子區(qū)域的V53F、A332V、I642L和IVS11?2A→C4個新的基因多態(tài)性位點，它們的作用與功效需要進一步研究。Piedrafita等研究發(fā)現(xiàn)與疾病有關的位點有5個：463G/A，R569W，Y173C，M251T和外顯子9的堿基缺失?，F(xiàn)在研究最多的是MPO基因啟動子區(qū)第463位核苷酸G/A的突變，該位點位于SP1轉(zhuǎn)錄因子識別結合的順式作用元件中，內(nèi)含4個Alu重復序列。G/A的突變造成位于Alu反映元件的SP1轉(zhuǎn)錄因子結合位點消失，從而使MPO轉(zhuǎn)錄水平明顯下降。也有報道發(fā)現(xiàn)外顯子10的密碼子569存在C被T替代，使CGG→TGG，造成遺傳性MPO缺點性疾病。尚有研究報道在MPO基因129位點存在G被A取代，使MPO基因的體現(xiàn)水平明顯減少。另外，據(jù)有關文獻報道，MPO基因463A等位基因與某些癌癥的風險減少有關。3.MPO的生物學作用MPO是中性粒細胞的功效標志和激活標志，其水平及活性變化代表著嗜中性多形核白細胞(PMN)的功效和活性狀態(tài)。純化的人MPO活性為25～35IU/mg，水溶性好，底物H2O2濃度>0.8mmol時酶受克制，酶反映最佳pH為4.5～5.5，當pH≥10，或≤2時酶失活。MPO的重要功效是在吞噬細胞內(nèi)殺滅微生物，運用過氧化氫和氯離子產(chǎn)生次氯酸鹽，并形成含有氧化能力的自由基。構成MPO–H2O2–鹵素系統(tǒng)。許多研究發(fā)現(xiàn)，MPO不僅能殺滅吞噬于細胞內(nèi)的微生物，并且可釋放到細胞外，破壞多個靶物質(zhì)，如腫瘤細胞、血小板、NK細胞、原蟲、毒素等，對機體產(chǎn)生和調(diào)節(jié)炎癥反映等多方面發(fā)揮作用。然而，在特定條件下，MPO催化反映生成過量的氧化劑(HOCl、3–氯化酪氨酸、酪氨?；?、硝基酪氨酸等)，超出局部抗氧化劑的防御反映時，就會造成氧化應激和氧化性組織損傷。MPO還參加調(diào)節(jié)炎癥反映的許多過程，MPO缺點的中性粒細胞因過量的注入炎癥部位而發(fā)生氧化反映，大量的超氧化物和氧化物形成，造成炎癥部位組織細胞損傷。另外尚有學者發(fā)現(xiàn)MPO能與DNA牢固結合形成復合物，有效保護DNA避免其在氧化過程中受損，從而確保髓系細胞的正常分化成熟及功效。編輯本段髓過氧化物酶(MPO)與有關疾病1.MPO與心血管疾病1.1MPO與冠狀動脈疾病。冠心病是心血管系統(tǒng)中最常見的疾病，而動脈粥樣硬化(AS)又是形成冠心病的重要病理基礎。AS發(fā)病過程中普通出現(xiàn)氧化低密度脂蛋白，進而巨噬細胞吞噬脂質(zhì)變成泡沫細胞，泡沫細胞的形成在AS的發(fā)生機制中起核心作用。研究發(fā)現(xiàn)MPO有增進AS病變形成的作用，MPO通過產(chǎn)生自由基和多個反映性物質(zhì)，增進斑塊形成和不穩(wěn)定性增加，加速AS進展，進而引發(fā)多個并發(fā)癥如急性冠脈綜合征(ACS)。研究發(fā)現(xiàn)，MPO缺點的個體罹患心血管疾病的危險性明顯下降。MPO水平的升高不僅與患冠狀動脈疾病易感性有關，還能夠預測早期患心肌梗死的危險性。1.2MPO與急性冠脈綜合征(ACS).MPO增進ACS病變形成，并影響粥樣斑塊的穩(wěn)定性，通過增大氧化應激而引發(fā)ACS?，F(xiàn)在的研究表明，MPO是預測ACS患者發(fā)生不良心血管事件的一種新的預測因子，特別是在肌鈣蛋白T(TnT)水平較低的患者，MPO能夠識別那些將來發(fā)生心血管事件危險性較高的患者。2.MPO與腫瘤2.1MPO與肺癌在肺部受微生物侵襲、職業(yè)暴露以及吸煙時，MPO會隨中性粒細胞的聚集釋放到炎癥部位。MPO可代謝激活多個與肺癌有關的環(huán)境致癌物，能將前致癌物如多環(huán)芳烴類的苯并芘(BaP)轉(zhuǎn)化成含有高度反映性和致癌性的活性產(chǎn)物二醇環(huán)氧化苯并芘(BPDE)，BPDE能與DNA形成加合物并造成姐妹染色體交換，從而造成肺癌。2.2MPO與白血病白血病是累及造血干細胞的造血系統(tǒng)惡性腫瘤，其病因尚不完全清晰。3.MPO與地方性砷中毒3.1近年來，隨著分子生物學領域的不停發(fā)展，發(fā)現(xiàn)MPO在砷中毒所致皮膚病變的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。MPO現(xiàn)在被研究者認為可能是砷中毒新發(fā)現(xiàn)的一種易感標志物，將在慢性砷中毒的早期診療和危險評定中含有重要的意義，但國內(nèi)就這方面的研究還沒有涉及到，國外對其進一步的影響機制的研究也不是諸多，因此還很難在現(xiàn)有的研究基礎上建立起砷中毒易感性與MPO及其多態(tài)性的明確關系，還需要進一步的研究證明。4.MPO與其它疾病4.1MPO在現(xiàn)階段的研究也擬定了它在疾病早期診療與危險評定中含有重要的意義。MPO通過不同的途徑可造成某些疾病，同時其基因多態(tài)性也會減少機體對某些疾病的易感受性，從而對機體產(chǎn)生保護作用，但其作用機制仍不清晰，隨著分子生物學領域的不停發(fā)展，MPO的作用機制研究將不停進一步，可能會發(fā)現(xiàn)其它某些與疾病易感性有關的多態(tài)性位點，從而使人們更清晰的認識其有關疾病的發(fā)生、發(fā)展，方便對這些人群采用有效的防止和治療方法髓過氧化物酶

myeloperoxidase過氧化物酶含血紅素輔基,重要存在于過氧化酶體,運用H2O2以氧化酚類及胺類化合物。...動物的肝、腎中只有微弱的活性，在牛乳中已分離出過氧化物酶，在白細胞中含有髓性過氧化物酶，這就是膿含有過氧化物酶活性的因素。紅細胞也含過氧化物酶，極少量...更多解釋>>

與"髓過氧化物酶"有關的文獻前10條\o"更多\“髓過氧化物酶\”有關文獻"更多文獻>>1.髓過氧化物酶在急性冠狀動脈綜合征患者近期預后判斷中的作用目的探討血漿髓過氧化物酶水平對急性冠狀動脈綜合征患者近期心臟事件的預測作用。辦法采用酶聯(lián)免疫吸附法分別測定急性冠狀動脈綜合征組、穩(wěn)定型心絞痛組和非冠心病組患者的血漿髓過氧化物酶濃...詳情>>中國動脈硬化雜志

08期

內(nèi)科學;血漿髓過氧化物酶;急性冠狀動脈綜合征;中性粒細胞;酶聯(lián)免疫吸附法;冠狀動脈造影;預后;下載下載2.非糖尿病維持性血液透析患者髓過氧化物酶與頸動脈硬化的有關性目的探討非糖尿病維持性血液透析患者髓過氧化物酶與頸動脈硬化有關指標的關系。辦法酶聯(lián)免疫吸附法測定非糖尿病維持性血液透析患者同一次透析前后血漿髓過氧化物酶和血清彈性蛋白酶水平變化,...詳情>>中國動脈硬化雜志

11期

維持性血液透析;髓過氧化物酶;頸動脈粥樣硬化;下載下載3.巨噬細胞髓過氧化物酶與低密度脂蛋白氧化關系的研究目的從低密度脂蛋白(LDL)誘導巨噬細胞髓過氧化物酶活性升高的角度探討體內(nèi)LDL氧化的可能機制,為動脈粥樣硬化(AS)的抗氧化治療提供新的思路。辦法以體外培養(yǎng)的大鼠...詳情>>免疫學雜志

01期

巨噬細胞;髓過氧化物酶;低密度脂蛋白;牛磺酸;下載下載4.探討頸動脈粥樣斑塊超聲造影顯像特性及血漿髓過氧化物酶水平與腦梗死的關系目的探討頸動脈斑塊實時超聲造影的顯像特性及血漿髓過氧化物酶水平對腦梗死事件的預測作用。辦法對73例頸動脈硬化患者的89處斑塊進行超聲造影檢查,觀察斑塊的顯像特點。將他們分為斑塊造...詳情>>中國超聲醫(yī)學雜志

08期

超聲檢查;造影劑;頸動脈硬化;血漿髓過氧化物酶;腦梗死;下載下載5.光化學法誘導小鼠局灶性腦梗死腫瘤壞死因子α體現(xiàn)及髓過氧化物酶活性的變化目的:分析光化學法誘導小鼠局灶性腦梗死模型腦組織腫瘤壞死因子α體現(xiàn)和髓過氧化物酶活性的變化規(guī)律及其有關性。辦法:實驗于-07/-07在泰山醫(yī)學院腦微循環(huán)實驗室完畢...詳情>>中國臨床康復

40期

腦梗塞;光化學;腫瘤壞死因子;過氧化物酶;下載下載6.冠狀動脈病變與2型糖尿病及髓過氧化物酶關系的探討目的:探討冠狀動脈病變與2型糖尿病和髓過氧化酶的關系。辦法:對9月至9月在我院就診的210例胸痛臨床懷疑患冠心病的患者進行冠狀動脈造影,將其中冠狀動脈狹窄不不大于...詳情>>瀘州醫(yī)學院學報

04期

冠狀動脈疾病;2型糖尿病;髓過氧化物酶;冠狀血管造影術;下載下載7.唾液過氧化物酶正過氧化物酶含有多個生理功效,無論在細胞代謝調(diào)節(jié)還是在防御方面催化許多重要反映,是重要的細胞氧化還原體系.1944年Dempsey首先在甲狀腺中發(fā)現(xiàn)甲狀腺過氧化物酶(TPO)....詳情>>生命的化學(中國生物化學會通訊)

1987年06期

下載下載8.胱抑素C與髓過氧化物酶在冠心病嚴重程度評定中的應用目的研究分析冠心病病變程度與白細胞計數(shù)、超敏C反映蛋白(CRP)、纖維蛋白原(FG)、髓過氧化物酶、胱抑素C、肌酐(Scr)、腎小球濾過率(eGFR)之間的關系。辦法收集121例...詳情>>檢查醫(yī)學與臨床

07期

急性冠脈綜合癥;穩(wěn)定性心絞痛;胱抑素C;超敏CRP;纖維蛋白原;髓過氧化物酶;下載下載9.聯(lián)合測定免疫球蛋白M和髓過氧化物酶對新生兒細菌感染的早期診療意義目的探討血清免疫球蛋白(immunoglobin,Ig)M和髓過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)聯(lián)合測定對新生兒細菌感染的早期診療意義。辦法隨機選擇7...詳情>>中華婦幼臨床醫(yī)學雜志

06期

免疫球蛋白M;髓過氧化物酶;細菌感染;新生兒;下載下載10.髓過氧化物酶基因G-463A多態(tài)性與肺癌易感性關系的meta分析背景與目的有關髓過氧化物酶基因G-463A多態(tài)性與肺癌易感性關系已有廣泛研究,但研究成果不一致。本研究運用meta分析的辦法探討髓過氧化物酶基因G-463A多態(tài)性與肺癌易感性的相...詳情>>中國肺癌雜志

02期

肺腫瘤;髓過氧化物酶;多態(tài)性;meta分析;人髓過氧化物酶(MPO)ELISA檢測試劑盒本試劑僅供研究使用

實驗原理：MPO試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知MPO濃度的原則品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將MPO物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再通過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中MPO的活性濃度呈比例關系。

試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成分（2-8℃96孔配備48孔配備配制96/48份酶標板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型原則品：400ng/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按闡明書進行稀稀空白對照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型原則品稀釋緩沖液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素標記的MPO抗體1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型親和鏈酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗滌緩沖液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按闡明書進行稀釋底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型終止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型

自備材料1．

蒸餾水。2．

加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。3．

振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性1．

避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。2．

實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3．

不要用嘴吸取試劑盒里的任何成分。

操作注意事項1．

試劑應按標簽闡明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的原則品應丟棄，不可保存。2．

實驗中不用的板條應立刻放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。3．

不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4．

使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。5．

使用干凈的塑料容器配備洗滌液。使用前充足混勻試劑盒里的多個成分及樣品。6．

洗滌酶標板時應充足拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反映孔中吸水。7．

底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完畢后應立刻讀取OD值。8．

加入試劑的次序應一致，以確保全部反映板孔溫育的時間同樣。9．

按照闡明書中標明的時間、加液的量及次序進行溫育操作。

樣品收集、解決及保存辦法1、

血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞快速小心地分離。2、

血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、

細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、

保存------如果樣品不立刻使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免重復冷凍。盡量的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37

試劑的準備1．

原則品：原則品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將原則品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：400ng/ml（6號原則品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。200ng/ml（5號原則品）100ul的原倍原則品加入100ul的原則品稀釋液100ng/ml（4號原則品）100ul的5號原則品加入100ul的原則品稀釋液50ng/ml（3號原則品）100ul的4號原則品加入100ul的原則品稀釋液25ng/ml（2號原則品）100ul的3號原則品加入100ul的原則品稀釋液12.5ng/ml（1號原則品）100ul的2號原則品加入100ul的原則品稀釋液0ng/ml（空白對照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

2．

洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作環(huán)節(jié)1．

使用前，將全部試劑充足混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。2．

根據(jù)待測樣品數(shù)量加上原則品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個原則品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。3．

加入稀釋好后的原則品50ul于反映孔、加入待測樣品50ul于反映孔內(nèi)。立刻加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃4．

甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。5．

每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃6．

甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。7．

每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃8．

取出酶標板，快速加入50ul終止液，加入終止液后應立刻測定成果。9．

在450nm波優(yōu)點測定各孔的OD值。

性能1.敏捷度：最小的檢測濃度不大于1號原則品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度有關系數(shù)R值為0.990。2.特異性：不與人其它細胞因子反映。3.重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均不大于10%。4.局限性：6號原則品以上的成果為非線性的，根據(jù)此原則曲線無法得到精確的成果。

成果判斷與分析1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），對應的MPO原則品濃度為橫坐標（X），做得對應的曲線，樣品的MPO含量可根據(jù)其OD值由原則曲線換算出對應的濃度。

3、檢測值范疇：0-400ng/ml

4、敏感度：1.0ng/ml品型號：96T/48T產(chǎn)品名稱：人髓過氧化物酶(MPO)ELISA闡明書產(chǎn)品報價：產(chǎn)品特點：人髓過氧化物酶(MPO)ELISA價格公道、品質(zhì)確保，售后服務完整，并提供免費代檢測服務！本試劑盒用于測定人血清，血漿及有關液體樣本中髓過氧化物酶(MPO)的活性。

96T/48T人髓過氧化物酶(MPO)ELISA闡明書的具體資料：人髓過氧化物酶(MPO)ELISA闡明書目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及有關液體樣本中髓過氧化物酶(MPO)的活性。注意事項：1．

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。2．

濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響成果。3．

各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其精確性，以避免實驗誤差。一次加樣時間最佳控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．

請每次測定的同時做原則曲線，最佳做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值不不大于原則品孔第一孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5．

封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．

底物請避光保存。7．

嚴格按照闡明書的操作進行，實驗成果鑒定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8．

全部樣品，洗滌液和多個廢棄物都應按傳染物解決。9．

本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文闡明書有異，以英文闡明書為準。實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人髓過氧化物酶(MPO)水平。用純化的人髓過氧化物酶(MPO)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入髓過氧化物酶(MPO)，再與HRP標記的羊抗人抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，通過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最后的黃色。顏色的深淺和樣品中的髓過氧化物酶(MPO)呈正有關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過原則曲線計算樣品中人髓過氧化物酶(MPO)的濃度。試劑盒構成：試劑盒構成48孔配備96孔配備保存闡明書1份1份

封板膜2片(48)2片(96)

密封袋1個1個

酶標包被板1×481×962-8℃原則品：900U/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃原則品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃酶標試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃

樣本解決及規(guī)定：1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(-3000轉(zhuǎn)/分)。認真收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。2.血漿：應根據(jù)標本的規(guī)定選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(-3000轉(zhuǎn)/分)。認真收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應當再次離心。3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(-3000轉(zhuǎn)/分)。認真收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參考實施。4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成分時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(-3000轉(zhuǎn)/分)。認真收集上清。檢測細胞內(nèi)的成分時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達成100萬/ml左右。通過重復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成分。離心20分鐘左右(-3000轉(zhuǎn)/分)。認真收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。5.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮快速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標本勻漿充足。離心20分鐘左右(-3000轉(zhuǎn)/6.標本采集后盡早進行提取，提取按有關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能立刻進行實驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免重復凍融7.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3克制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作環(huán)節(jié)1.

原則品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設原則品孔10孔，在第一、第二孔中分別加原則品100μl，然后在第一、第二孔中加原則品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加原則品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加原則品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加原則品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加原則品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為600U/L，400U/L，200U/L，100U/L，50U/L)。2.

加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其它各步操作相似)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品最后稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.

溫育：用封板膜封板后置37℃溫育304.

配液：將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。5.

洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。6.

加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。7.

溫育：操作同3。8.

洗滌：操作同5。9.

顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.

終止：每孔加終止液50μl，終止反映(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.

測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。計算：以原則物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出原則曲線，根據(jù)樣品的OD值由原則曲線查出對應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用原則物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。試劑盒性能：1.樣品線性回歸與預期濃度有關系數(shù)R值為0.92以上。2.批內(nèi)與批間應分別不大于9%和15%保存條件及使用期：1.試劑盒保存：2-8℃2．使用期：6個月人髓過氧化物酶（MPO）酶聯(lián)免疫分析

試劑盒使用闡明書

本試劑盒僅供研究使用

檢測范疇：7.8ng/ml-500ng/ml

最低檢測限：1.95ng/ml

特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的人MPO，且與其它有關蛋白無交叉反映。

使用期：6個月

預期應用：ELISA法定量測定人血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清或其它有關生物液體中MPO含量。

闡明

1．試劑盒保存：-20℃（較長時間不用時）；2-8℃（頻繁使用時）。

2．濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。

3．中、英文闡明書可能會有不一致之處，請以英文闡明書為準。

4．剛啟動的酶聯(lián)板孔中可能會含有少量水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗成果造成任何影響。

實驗原理

用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗MPO抗體的微孔中依次加入標本或原則品、生物素化的抗MPO抗體、HRP標記的親和素，通過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最后的黃色。顏色的深淺和樣品中的MPO呈正有關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

試劑盒構成及試劑配制

1.酶聯(lián)板（Assayplate）：一塊（96孔）。

2.原則品（Standard）：2瓶（凍干品）。

3.樣品稀釋液（SampleDiluent）：1×20ml/瓶。

4.生物素標記抗體稀釋液（Biotin-antibodyDiluent）：1×10ml/瓶。

5.辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液（HRP-avidinDiluent）：1×10ml/瓶。

6.生物素標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7.辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8.底物溶液（TMBSubstrate）：1×10ml/瓶。

9.濃洗滌液（WashBuffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10.終止液（StopSolution）：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。

需要