楊梅化學(xué)成分研究

楊梅（李子）iieb。etzecc。該植物為多年生喬木，種植在多邊木林中。分布于江蘇省、浙江省、江西省、福建省、湖南省、廣東省、廣東省和臺(tái)灣省、日本和朝鮮。楊梅樹(shù)皮味苦、性溫,具有散瘀止血、止痛之功效,民間用于治療跌打損傷、骨折、痢疾、胃和十二指腸潰瘍、牙痛等。楊梅樹(shù)皮的化學(xué)成分已有報(bào)道,至今已從楊梅樹(shù)皮中分離得到黃酮類、單寧類、三萜類和二芳基庚烷類等化合物。作者利用反復(fù)硅膠吸附柱色譜,從楊梅樹(shù)皮中分離得到8個(gè)化合物。通過(guò)理化性質(zhì)及NMR、MS等波譜手段進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定。1高效液相色譜法測(cè)定柱色譜試劑ARX-300核磁共振儀(TMS為內(nèi)標(biāo),瑞士Bruker公司),MP-S3顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀(溫度未校正,日本Yanaco公司),LC-MS質(zhì)譜儀(美國(guó)Thermofinnigan公司)。薄層用硅膠GF254和柱色譜用硅膠(50～71μm,青島海洋化工廠),HPD400大孔樹(shù)脂(河北滄州寶恩化工有限公司),羥丙基葡聚糖凝膠LH-20(瑞士Pharmacia公司)。柱色譜所用的試劑(分析純,市售),氘代試劑(美國(guó)CIL產(chǎn)品,北京漢威士波譜公司分裝),常規(guī)試劑(天津康科德化工有限公司)。楊梅樹(shù)皮購(gòu)自寧波立華植物提取有限公司,由沈陽(yáng)藥科大學(xué)中藥學(xué)院路金才副教授鑒定為楊梅(Myricaruba(Lour.)Sieb.etZucc.)的樹(shù)皮。2化合物的分離取干燥楊梅樹(shù)皮6kg,用體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇溶液回流提取3次,合并提取液,減壓濃縮得浸膏640g;將浸膏混懸于適量的水中,分別用乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行萃取。乙酸乙酯部分(64g)經(jīng)硅膠柱色譜分離,用三氯甲烷-甲醇梯度洗脫,所得流分進(jìn)行反復(fù)硅膠柱色譜分離,結(jié)合羥丙基葡聚糖凝膠柱色譜分離和重結(jié)晶得到化合物1、3、5～8。正丁醇部分(240g)經(jīng)硅膠柱色譜分離,用三氯甲烷-甲醇梯度洗脫,所得流分進(jìn)行反復(fù)硅膠柱色譜分離,結(jié)合羥丙基葡聚糖凝膠柱色譜分離和重結(jié)晶得到化合物2、4。3化合物3的理化性質(zhì)和波譜表3化合物1:白色針狀結(jié)晶(CHCl3-MeOH),mp207.0～208.0℃。溴甲酚氯反應(yīng)陽(yáng)性,提示結(jié)構(gòu)中含有羧基;三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽(yáng)性,提示結(jié)構(gòu)中存在酚羥基。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:9.24(1H,s,4-OH)、7.20(2H,s,H-2,6)、3.80(6H,s,3,5-OCH3)。13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ:167.3(C=O)、147.5(C-3,5)、140.3(C-4)、120.5(C-1)、106.9(C-2,6)、56.1(3,5-OCH3)。化合物1的波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)波譜數(shù)據(jù)基本一致,故確定化合物1為丁香酸(syringicacid)。化合物2:白色針晶(MeOH),mp152.0～153.0℃。1H-NMR(600MHz,C5D5N)譜中:δ0.81(3H,t,H-4)、1.35(2H,m,H-3)、1.54(2H,m,H-2)、3.70(2H,m,H-1)為正丁基脂肪鏈上質(zhì)子信號(hào);δ4.08、4.00(各1H,d,J=12.0Hz,H-1′)為果糖端基質(zhì)子信號(hào);δ4.88(1H,d,J=9.6Hz,H-3′),4.52(1H,dd,J=9.8、3.6Hz,H-4′),4.35(1H,brs,H-5′),4.19、4.34(各1H,d,H-6′)為果糖上其他質(zhì)子信號(hào)。13C-NMR(150MHz,C5D5N)譜中:δ4.2(C-4)、19.9(C-3)、32.7(C-2)、60.7(C-1)為正丁基碳信號(hào),δ64.3(C-1′)、101.1(C-2′)、70.6(C-3′)、72.4(C-4′)、71.4(C-5′)、65.0(C-6′)為β-D-吡喃果糖碳信號(hào)。將化合物2進(jìn)行酸水解,薄層法檢出有果糖,推測(cè)該化合物為正丁基-β-D-吡喃果糖苷。經(jīng)與文獻(xiàn)對(duì)照,數(shù)據(jù)基本一致,故確定化合物2為正丁基-β-D-吡喃果糖苷(n-butyl-β-D-fructopyranoside)?；衔?:無(wú)色針狀結(jié)晶(MeOH),mp159.0～160.0℃。溴甲酚氯反應(yīng)陽(yáng)性,提示結(jié)構(gòu)中含有羧基;三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽(yáng)性,提示結(jié)構(gòu)中存在酚羥基。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)譜中:δ7.77(1H,dd,J=1.4、7.8Hz,H-6)、7.43(1H,dt,J=1.4、9.0Hz,H-4)、6.88(1H,t,J=8.3Hz,H-5)、6.84(1H,d,J=7.5Hz,H-3)為鄰取代苯環(huán)上6,4,3,5位氫質(zhì)子信號(hào)。經(jīng)與水楊酸標(biāo)準(zhǔn)品共薄層對(duì)照,Rf值相同,混合測(cè)定熔點(diǎn)不下降。綜合以上理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù),并與文獻(xiàn)對(duì)照,確定化合物3為水楊酸(salicylicacid)。化合物4:白色粉末(MeOH),mp244.0～254.0℃。三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽(yáng)性,提示結(jié)構(gòu)中有酚羥基;鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽(yáng)性,提示為黃酮類化合物。1H-NMR(600MHz,C5D5N)譜中:δ11.89、10.81、8.89、8.21為黃酮苯環(huán)上的酚羥基信號(hào);δ6.40(2H,s)為B環(huán)2′,6′位氫質(zhì)子信號(hào);δ5.90(1H,d,J=1.6Hz)和δ5.86(1H,d,J=1.6Hz)為A環(huán)6,8位氫質(zhì)子信號(hào);將其核磁數(shù)據(jù)與化合物6(楊梅素)對(duì)照,發(fā)現(xiàn)高場(chǎng)區(qū)多了1組氫信號(hào):δ4.90(1H,d,J=10.4Hz)和δ4.41(1H,d,J=10.4Hz),提示為C環(huán)2,3位氫質(zhì)子信號(hào)。根據(jù)偶合常數(shù)確定H-2和H-3構(gòu)成了反式二直立鍵系統(tǒng),其余信號(hào)基本一致,表明該化合物為二氫黃酮類化合物。綜合以上理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù),并與文獻(xiàn)對(duì)照,確定化合物4為白蘞素(ampelopsin)?；衔?:無(wú)色針狀結(jié)晶(MeOH),mp234.0～236.0℃。三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽(yáng)性,溴甲酚氯反應(yīng)陽(yáng)性,提示結(jié)構(gòu)中存在酚羥基和羧基。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ6.91(2H,s,H-2,6)。綜合以上理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù),并與文獻(xiàn)對(duì)照,確定化合物5為沒(méi)食子酸(gallicacid)?；衔?:棕黃色針晶(MeOH),mp323.0～325.0℃。三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽(yáng)性,提示結(jié)構(gòu)中有酚羥基存在;鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽(yáng)性,提示為黃酮類化合物。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)譜中:δ12.50、9.19為黃酮苯環(huán)上的酚羥基質(zhì)子信號(hào),δ7.25(2H,s)為黃酮B環(huán)2′,6′位的氫質(zhì)子信號(hào),δ6.37(1H,d,J=1.8Hz)和δ6.18(1H,d,J=1.8Hz)為黃酮A環(huán)6,8位的氫質(zhì)子信號(hào)。因此推測(cè)該化合物可能為3,5,7,3′,4′,5′-六羥基黃酮。經(jīng)與對(duì)照品楊梅素共薄層,在3種溶劑系統(tǒng)下其Rf值和斑點(diǎn)顏色均一致,混合測(cè)定熔點(diǎn)不下降。綜合以上理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù),并與文獻(xiàn)對(duì)照,確定化合物6為楊梅素(myricetin)?；衔?:黃色顆粒狀結(jié)晶(MeOH),mp182.0～184.0℃。三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽(yáng)性,提示結(jié)構(gòu)中有酚羥基;鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽(yáng)性,Molish反應(yīng)陽(yáng)性,提示該化合物可能為黃酮苷類化合物。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)譜中:δ12.67、9.23為黃酮苯環(huán)上的酚羥基質(zhì)子信號(hào),δ6.88(2H,s)為黃酮B環(huán)2′,6′位氫質(zhì)子信號(hào),δ6.36(1H,d,J=1.8Hz)和δ6.19(1H,d,J=1.8Hz)為黃酮A環(huán)6,8位的氫質(zhì)子信號(hào),δ5.19(1H,brs)為糖的端基氫質(zhì)子信號(hào),δ0.83(3H,d,J=6.3Hz)為鼠李糖6位甲基質(zhì)子信號(hào)。將化合物7進(jìn)行酸水解,薄層檢出鼠李糖。將化合物7的波譜數(shù)據(jù)與化合物6(楊梅素)相比,除多了1組糖信號(hào)外,其余數(shù)據(jù)基本一致,表明化合物7與化合物6(楊梅素)具有相同的A、B結(jié)構(gòu),因此推測(cè)成苷位置在3位,即5,7,3′,4′,5′-五羥基黃酮-3-O-鼠李糖苷。經(jīng)與對(duì)照品楊梅苷共薄層,在3種溶劑系統(tǒng)下其Rf值和斑點(diǎn)顏色均一致,混合測(cè)定熔點(diǎn)不下降。綜合以上理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù),并與文獻(xiàn)對(duì)照,確定化合物7為楊梅苷(myricitrin)?；衔?:紅色無(wú)定形粉末(MeOH),mp208.0～210.0℃。三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽(yáng)性,提示結(jié)構(gòu)中存在酚羥基。1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)譜中:δ5.91(1H,brs)和δ5.81(1H,brs)為黃酮A環(huán)6,8位氫質(zhì)子信號(hào),δ6.38(2H,s)為黃酮B環(huán)2′,6′位氫質(zhì)子信號(hào),δ4.94(1H,brs)和δ5.34(1H,brs)為黃酮C環(huán)2,3位氫質(zhì)子信號(hào),δ2.91(1H,brs)和δ2.63(1H,brs)為黃酮C環(huán)4位上的亞甲基氫質(zhì)子信號(hào)。以上數(shù)據(jù)提示化合物8具有黃烷類化合物的結(jié)構(gòu)母核。δ6.80(2H,s)為沒(méi)食子?；臍滟|(zhì)子信號(hào),將化合物8的核磁數(shù)據(jù)與化合物1(白蘞素)的對(duì)照,發(fā)現(xiàn)低場(chǎng)區(qū)的氫信號(hào)基本一致,提示化合物8與化合物1(白蘞素)具有相同的A、B環(huán)結(jié)構(gòu);而其3位氫信號(hào)較化合物1(白蘞素)向低場(chǎng)位移了0.93個(gè)化學(xué)位移單位,提示沒(méi)食子?；B于3位上。綜合以上理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù),并與文獻(xiàn)對(duì)照,確定化合物8為兒茶素沒(méi)食子酸酯((-)-epigallocatechin-3-gallate)。4不同種類的抗氧化藥從楊梅樹(shù)皮中分離得到8個(gè)化合物,分別為丁香酸(syringicacid,