實驗一

蛋白質的沉淀反應一、目的二、原理在水溶液中的蛋白質分子由于表面形成水化層和雙電層而成為穩(wěn)定的親水膠體顆粒，在一定的理化因素影響下，蛋白質顆?？梢蚴ル姾珊兔撍恋?。蛋白質的沉淀反應可分為1．加深對蛋白質膠體溶液穩(wěn)定因素的認識。2．了解沉淀蛋白質的幾種方法及其實用意義。3．了解蛋白質變性與沉淀的關系。兩類。（1）可逆的沉淀反應此時蛋白質分子的結構尚未發(fā)生顯著變化，除去引起沉淀的因素后，蛋白質的沉淀仍能溶解于原來的溶劑中，并保持其天然性質而不變性。如大多數(shù)蛋白質的鹽析作用或在低溫下用乙醇（或丙酮）短時間作用于蛋白質。提純蛋白質時，常利用此類反應。（2）不可逆沉淀反應此時蛋白質分子內部結構發(fā)生重大改變，蛋白質常變性而沉淀，不再溶于原來溶劑中。加熱引起的蛋白質沉淀與凝固，蛋白質與重金屬鹽或某些有機酸的反應都屬于此類。蛋白質變性后，有時由于維持溶液穩(wěn)定的條件仍然存在（如電荷），并不析出。因此變性蛋白質并不一定都表現(xiàn)為沉淀，而沉淀的蛋白質也未必都已變性。三、操作

1．蛋白質的鹽析即中性鹽沉淀蛋白質：取1個離心管加入5mL蛋白質溶液和5mL飽和硫酸銨溶液，混勻后靜置10min則球蛋白沉淀析出。2000r/min離心5min，將上清液轉入另一離心管，向沉淀中加少量水，觀察沉淀是否溶解，為什么？向另一離心管的上清液添加硫酸銨粉末，邊加邊攪，直至粉末不再溶解達到飽和為止，此時析出的沉淀為清蛋白。2000r/min離心5min，倒去上清液，向沉淀中加少量水，觀察沉淀是否溶解。

2．重金屬鹽沉淀蛋白質：取1支試管，加入2mL蛋白質溶液，再加入2滴3%硝酸銀溶液，振蕩試管，觀察沉淀的生成.

3．有機酸沉淀蛋白質：取1支試管，加入2mL蛋白質溶液，再加入1mL5%三氯乙酸溶液，振蕩試管，觀察沉淀的生成。

4．有機溶劑沉淀蛋白質：取1支試管，加入2mL蛋白質溶液，再加入2mL95%乙醇?；靹?，觀察沉淀的生成。

5、乙醇引起的變性與沉淀：取3支試管，編號。依下表順序加入試劑：試劑（mL）試管號123蛋白質溶液1.01.01.00.1mol/L氫氧化鈉溶液—1.0—0.1mol/L鹽酸溶液——1.0pH4.7緩沖溶液1.0——95%乙醇2.02.02.0振搖混勻后，觀察各管有何變化。放置片刻，向各管內加水4mL，然后在第2，3號管中各加1滴甲基紅，再分別用0.1mol/L醋酸溶液及0.05mol/L碳酸鈉溶液中和之。觀察各管顏色的變化和沉淀的生成。每管再加0.1mol/L鹽酸溶液數(shù)滴，觀察沉淀的再溶解。解釋各管發(fā)生的全部現(xiàn)象。

四、結果：1.鹽析：球蛋白在半飽和硫酸銨溶液中析出，清蛋白在飽和硫酸銨溶液中析出。(5ml)(5ml)

?管號試劑(mL)123蛋白質溶液1.01.01.00.1mol/LNaOH—1.0—0.1mol/LHCl——1.0

pH4.7緩沖液1.0——

95%乙醇1.01.01.0混勻，觀察變化→放置片刻→各加8mLH2O2,3號管內加1滴甲基紅，再分別用0.1mol/L醋酸和0.05mol/L碳