2QB/TXXXXX—XXXXN-乙酰神經(jīng)氨酸本文件規(guī)定了N-乙酰神經(jīng)氨酸的原輔料、感官、理化、污染物限量、微生物限量和真菌毒素限量等要求，描述了相應的試驗方法，規(guī)定了檢驗規(guī)則和標志、包裝、運輸、貯存的內(nèi)容，并給出了分子式、相對分子質(zhì)量及結(jié)構式的信息。本文件適用于發(fā)酵法生產(chǎn)的N-乙酰神經(jīng)氨酸的生產(chǎn)、檢驗和銷售。2規(guī)范性引用文件下列文件的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期的對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T191包裝儲運圖示標志GB/T601化學試劑標準滴定溶液的制備GB/T602化學試劑雜質(zhì)測定用標準溶液的制備GB/T603化學試劑試驗方法中所用制劑及制品的制備GB4789.2食品安全國家標準食品微生物學檢驗菌落總數(shù)測定GB4789.3—2016食品安全國家標準食品微生物學檢驗大腸菌群計數(shù)GB4789.4食品安全國家標準食品微生物學檢驗沙門氏菌檢驗GB4789.10食品安全國家標準食品微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗GB4789.15食品安全國家標準食品微生物學檢驗霉菌和酵母計數(shù)GB5009.3—2016食品安全國家標準食品中水分的測定GB5009.4食品安全國家標準食品中灰分的測定GB5009.11食品安全國家標準食品中總砷及無機砷的測定GB5009.12食品安全國家標準食品中鉛的測定GB5009.17食品安全國家標準食品中總汞及有機汞的測定GB5009.22食品安全國家標準食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1N-乙酰神經(jīng)氨酸N-acetylneuraminicacid；N-acetyl-D-neuraminicacid；NANA以葡萄糖和玉米漿等為主要原料，經(jīng)微生物發(fā)酵、過濾、滅菌、水解、提純等工藝制成的一種酸性氨基糖。4分子式、相對分子質(zhì)量及結(jié)構式3QB/TXXXXX—XXXX4.1分子式C11H19NO94.2相對分子質(zhì)量309.27（按2021年國際相對原子質(zhì)量表）。4.3結(jié)構式5要求5.1原輔料要求生產(chǎn)菌種符合國家許可公告，發(fā)酵用營養(yǎng)物質(zhì)和提取純化用的其他原輔料符合國家相關規(guī)定。5.2感官要求應符合表1的規(guī)定。表1感官要求項目色澤狀態(tài)氣味雜質(zhì)5.3理化指標應符合表2的規(guī)定。表2理化指標≥≤≤5.4污染物限量應符合表3的規(guī)定。表3污染物限量單位：毫克每千克項目≤≤≤5.5微生物限量4QB/TXXXXX—XXXX應符合表4的規(guī)定。表4微生物限量項目≤≤≤≤5.6真菌毒素限量應符合表5的規(guī)定。表5真菌毒素限量單位：微克每千克項目≤56試驗方法6.1一般要求本方法中所用的水，在未注明其他要求時，應符合GB/T6682中水的規(guī)格，所用試劑，在未注明其他規(guī)格時，均指分析純。分析中所用標準滴定溶液、雜質(zhì)測定用標準溶液、制劑及制品，在沒有注明其他要求時，均按GB/T601、GB/T602和GB/T603的規(guī)定制備。6.2感官要求取適量樣品，置于清潔、干燥的白瓷盤中，在自然光線下，觀察其色澤和狀態(tài)，并嗅其氣味。6.3N-乙酰神經(jīng)氨酸含量（以干基計）6.3.1試劑及材料6.3.1.1硫酸：色譜純。6.3.1.2N-乙酰神經(jīng)氨酸標準品（C11H19NO9，CAS號：131-48-6）：純度不小于98%。6.3.2溶液配制6.3.2.1流動相：量取硫酸0.15mL于燒杯中，緩緩注入約800mL水，轉(zhuǎn)移至1000mL容量瓶中，以水定容并混勻，配制成流動相。6.3.2.2標準儲備溶液（10.0mg/mL）：稱取適量的N-乙酰神經(jīng)氨酸標準品（應按實際純度折算，精確至0.1mg），加流動相配制成10.0mg/mL的標準儲備溶液。4℃條件下避光保存，保存期1個月。6.3.2.3標準工作溶液：分別移取0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL和1.0mL的標準儲備溶液，置于10mL容量瓶中，加流動相定容并搖勻，使其濃度分別為0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL和1.0mg/mL。6.3.3儀器及設備6.3.3.1高效液相色譜儀：配有柱恒溫系統(tǒng)。6.3.3.2流動相真空抽濾脫氣裝置及0.22μm或0.45μm微孔濾膜。6.3.3.3電子天平：感量0.1mg。5QB/TXXXXX—XXXX6.3.3.4移液器。6.3.4參考色譜條件16.3.4.1檢測器：紫外光檢測器。6.3.4.2色譜柱：HPX-87H陽離子交換色譜柱（300mm×7.8mm，粒徑9μm）或者具有同等性能的其他類型色譜柱。6.3.4.3柱溫：60℃。6.3.4.4進樣量：10μL。6.3.4.5流速：0.5mL/min。6.3.4.6檢測波長：210nm。6.3.5參考色譜條件26.3.5.1檢測器：紫外光檢測器。6.3.5.2色譜柱：AQ-C18色譜柱（250mm×4.6mm，粒徑5μm）或者具有同等性能的其他類型色譜柱。6.3.5.3柱溫：30℃。6.3.5.4進樣量：10μL。6.3.5.5流速：1.0mL/min。6.3.5.6檢測波長：210nm。6.3.6分析步驟6.3.6.1標準曲線的繪制將標準工作溶液分別進樣后，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線。6.3.6.2樣品處理稱取樣品25.0mg（精確至0.1mg），加入50mL容量瓶中并用流動相定容至刻度，搖勻，用0.22μm或0.45μm微孔膜過濾，濾液備用。6.3.6.3樣品測定將待測樣液進樣后，根據(jù)標準品的保留時間，對待測液中N-乙酰神經(jīng)氨酸進行定性，根據(jù)樣品的峰面積，以外標法計算N-乙酰神經(jīng)氨酸含量。N-乙酰神經(jīng)氨酸標準品及樣品的參考色譜圖見附錄A。6.3.7結(jié)果計算樣品中N-乙酰神經(jīng)氨酸含量（以干基計）按式（1）計算：-3··············································（1）-3-2式中：X——樣品溶液中N-乙酰神經(jīng)氨酸的含量，單位為克每百克（g/100g）；c——由標準曲線查得樣品溶液中N-乙酰神經(jīng)氨酸的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）；V——樣品溶液定容體積，單位為毫升（mL）；10-3——毫克與克的換算系數(shù)；6QB/TXXXXX—XXXXm——樣品質(zhì)量，單位為毫克（mg）；w——樣品中水分含量，6.5中實際測量值，單位為克每百克（g/100g）；10-2——克與百克的換算系數(shù)。計算結(jié)果表示到小數(shù)點后一位。6.3.8精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不應超過其算術平均值的1%。6.4pH6.4.1儀器酸度計：精度0.01，備有玻璃電極和甘汞電極（或復合電極）。6.4.2分析步驟按儀器使用說明書調(diào)試和校正酸度計。用新煮沸冷卻的中性蒸餾水配制2%（w/w）的N-乙酰神經(jīng)氨酸液待測液。然后，用水沖洗電極探頭，用濾紙輕輕吸干，將電極插入待測樣液中，調(diào)節(jié)溫度調(diào)節(jié)器，使儀器指示溫度與溶液溫度相同，穩(wěn)定后讀數(shù)。6.4.3結(jié)果表示所得結(jié)果表示到小數(shù)點后一位。6.4.4精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不應超過0.1。6.5水分按GB5009.3—2016中“第二法減壓干燥法”測定。6.6總灰分按GB5009.4中規(guī)定的方法測定。6.7鉛（Pb）按GB5009.12中規(guī)定的方法測定。6.8總砷（以As計）按GB5009.11中規(guī)定的方法測定。6.9總汞（以Hg計）按GB5009.17中規(guī)定的方法測定。6.10菌落總數(shù)按GB4789.2中規(guī)定的方法測定。6.11霉菌和酵母按GB4789.15中規(guī)定的方法測定。6.12大腸菌群按GB4789.3—2016中“MPN計數(shù)法”測定。6.13金黃色葡萄球菌7QB/TXXXXX—XXXX按GB4789.10中規(guī)定的方法測定。6.14沙門氏菌按GB4789.4中規(guī)定的方法測定。6.15黃曲霉毒素B1按GB5009.22中規(guī)定的方法測定。7檢驗規(guī)則7.1組批同原料、同配方、同工藝、同一生產(chǎn)線連續(xù)生產(chǎn)的，質(zhì)量均一的產(chǎn)品為一批。7.2抽樣每批產(chǎn)品的檢驗按表6抽取樣本。表6產(chǎn)品抽樣表2141>500617.2.1取樣方法取樣時，用清潔、干燥的取樣工具插入包裝袋的三分之二。每袋取樣100g，將抽取的樣品迅速混勻，用四分法縮分，然后分裝于兩個潔凈、干燥的取樣袋中，密封。貼上標簽，一份用于檢測，一份留存?zhèn)洳椤?.3出廠檢驗7.3.1產(chǎn)品出廠前，應按本文件規(guī)定逐批進行檢驗。檢驗符合本文件要求后方可出廠。7.3.2出廠檢驗項目為感官、N-乙酰神經(jīng)氨酸含量、pH、水分、總灰分。7.4型式檢驗型式檢驗項目為本文件要求中規(guī)定的全部項目，一般情況下，型式檢驗每半年進行一次。有下列情況之一時，亦應進行型式檢驗：a)原輔材料有較大變化時；b)更改關鍵工藝或設備時；c)新試制的產(chǎn)品或正常生產(chǎn)的產(chǎn)品停產(chǎn)三個月以后，重新恢復生產(chǎn)時；d)出廠檢驗與上次型式檢驗結(jié)果有較大差異時；e)國家監(jiān)督機構按有關規(guī)定需要抽檢時。7.5判定規(guī)則7.5.1抽取樣品經(jīng)檢驗，檢驗項目全部符合要求，判定該批產(chǎn)品符合本文件。7.5.2檢驗項目如有一項至兩項不符合要求，應重新自同批產(chǎn)品中抽取兩倍量樣品進行復驗，以復驗結(jié)果為準。若仍有一項不符合要求，判定該批產(chǎn)品不符合本文件。檢驗結(jié)果如有三項及以上指標不符合要求，判定該批產(chǎn)品不符合本文件。8QB/TXXXXX—XXXX8標志、包裝、運輸、貯存8.1標志包裝儲運圖示標志應符合GB/T191的要求。8.2包裝包裝容器應整潔、衛(wèi)生、無破損，并符合相關規(guī)定。8.3運輸8.3.1運輸工具應清潔。8.3.2不應與有毒、有害、有腐蝕性、有堿性和含有異味的物品混裝、混運，宜避免受潮、受壓、曝曬。裝卸時，應輕拿輕放，不應直接鉤扎包裝。8.4貯存8.4.1應貯存在室溫下通風、干燥、清潔的倉庫內(nèi)，嚴防曝曬雨淋，避免火種。8.4.2不應與有毒、有害、有腐蝕性、有堿性和含有異味的物品放在一起。1QB/TXXXXX—XXXX（資料性）高