VEGFshRNA表達(dá)質(zhì)粒抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF表達(dá)及角膜新生血管的研究的開題報告項目名稱：VEGFshRNA表達(dá)質(zhì)粒抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF表達(dá)及角膜新生血管的研究一、研究背景及意義角膜新生血管是一種常見的眼表疾病，嚴(yán)重時可引起角膜混濁、視力下降等嚴(yán)重后果，對患者的生活產(chǎn)生較大負(fù)面影響。目前臨床上的治療方法主要包括手術(shù)切除、激光焊接、冷凍治療等，但這些治療方法的療效并不穩(wěn)定，且存在較高的復(fù)發(fā)率和不良反應(yīng)。因此尋找一種可靠、有效的治療角膜新生血管的手段具有重要意義。VEGF是誘導(dǎo)角膜新生血管形成的重要細(xì)胞因子，它能夠刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移，從而誘導(dǎo)新生血管的形成和擴張。因此，抑制VEGF的表達(dá)和功能是治療角膜新生血管的主要方法之一。目前，已經(jīng)有一些研究證明了利用siRNA或shRNA介導(dǎo)的基因沉默可以有效地抑制VEGF的表達(dá)，從而減少新生血管的形成。因此，本研究擬利用VEGFshRNA表達(dá)質(zhì)粒對血管內(nèi)皮細(xì)胞中VEGF的表達(dá)進(jìn)行抑制，探究其是否能夠有效地抑制角膜新生血管的形成，為角膜新生血管的治療提供新的思路。二、研究目的本研究旨在構(gòu)建一種VEGFshRNA表達(dá)質(zhì)粒，將其轉(zhuǎn)染到血管內(nèi)皮細(xì)胞中，抑制其中VEGF的表達(dá)，探究其對角膜新生血管形成的影響。具體研究內(nèi)容包括以下幾個方面：1.構(gòu)建VEGFshRNA表達(dá)質(zhì)粒，驗證其沉默VEGF的效果；2.將構(gòu)建的VEGFshRNA表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到血管內(nèi)皮細(xì)胞中，觀察其抑制VEGF表達(dá)的效果；3.采用體外模型檢測VEGFshRNA表達(dá)質(zhì)粒對血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移的影響；4.采用體外模型檢測VEGFshRNA表達(dá)質(zhì)粒對角膜新生血管的形成及發(fā)展的影響。三、研究設(shè)計1.構(gòu)建VEGFshRNA表達(dá)質(zhì)粒設(shè)計合適的shRNA序列，并將其克隆入載體中，構(gòu)建VEGFshRNA表達(dá)質(zhì)粒。2.驗證VEGFshRNA表達(dá)質(zhì)粒對VEGF的沉默效果將構(gòu)建的VEGFshRNA表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到血管內(nèi)皮細(xì)胞中，采用Westernblot或?qū)崟r熒光定量PCR檢測VEGF表達(dá)的變化，確定其沉默VEGF的效果。3.采用體外模型檢測VEGFshRNA表達(dá)質(zhì)粒對血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移的影響采用MTT法或細(xì)胞增殖曲線檢測VEGFshRNA表達(dá)質(zhì)粒對血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響；采用劃痕實驗或Transwell遷移實驗檢測其對細(xì)胞遷移的影響。4.采用體外模型檢測VEGFshRNA表達(dá)質(zhì)粒對角膜新生血管形成和發(fā)展的影響采用角膜劃痕實驗或Matrigel管腔實驗評價VEGFshRNA表達(dá)質(zhì)粒對角膜新生血管形成的影響。四、預(yù)期結(jié)果1.成功構(gòu)建VEGFshRNA表達(dá)質(zhì)粒，能夠有效地沉默VEGF的表達(dá)；2.VEGFshRNA表達(dá)質(zhì)粒能夠明顯地抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移；3.VEGFshRNA表達(dá)質(zhì)粒能夠顯著地抑制角膜新生血管的形成和發(fā)展。五、研究意義本研究的意義在于探究利用基因沉默技術(shù)抑制VEGF表達(dá)的方法對角膜新生血管的治療作用。如果能夠驗證VEGFsh