雌激素對抑郁癥大鼠行為學(xué)及肱核內(nèi)去甲腎上腺素的影響

發(fā)育女性最重要的生物學(xué)特征之一是內(nèi)源性雌激素的周期性變化。雌激素水平的增高和降低在妊娠期和產(chǎn)后更加明顯。有研究表明,雌激素水平的降低與經(jīng)前期綜合征、產(chǎn)后抑郁和絕經(jīng)后抑郁均密切相關(guān)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi),雌激素與神經(jīng)遞質(zhì)的相互作用可能在女性情感性疾病的發(fā)生中發(fā)揮著重要的作用。雌激素的受體廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi),雌激素可通過與其受體的結(jié)合進(jìn)而影響神經(jīng)遞質(zhì)功能。丘腦上部的韁核(habenularnucleus)也是情緒的反應(yīng)中樞,其與應(yīng)激發(fā)生密切相關(guān)。已有研究發(fā)現(xiàn)韁核內(nèi)有高密度的雌激素受體表達(dá),但韁核在女性抑郁癥發(fā)病中的作用國內(nèi)外尚未見報道。本實驗首先觀察了雌激素對去卵巢抑郁大鼠行為學(xué)的影響,應(yīng)用高效液相法檢測雌激素干預(yù)后去卵巢抑郁大鼠韁核內(nèi)去甲腎上腺素(NE)含量的變化,以期從一個新的角度探討雌激素在抑郁癥發(fā)病中的作用。1慢性應(yīng)激試驗1.1實驗動物及分組健康Wistar大鼠40只,雌性,體重180~200g,由吉林大學(xué)實驗動物中心提供。應(yīng)用敞箱試驗對動物進(jìn)行初篩,從中選出行為學(xué)評分相近的大鼠30只,隨機(jī)分為假手術(shù)抑郁癥模型組(Sham)、去卵巢抑郁癥模型組(OVX,)和去卵巢抑郁癥雌二醇干預(yù)組(OV/ER),每組10只。1.2動物模型制備①卵巢摘除:大鼠經(jīng)3%戊巴比妥腹腔注射麻醉后,剪開背部毛發(fā),在鼠腰椎處做1cm長縱行切口,分離皮下,旁開1cm,進(jìn)入腹腔,可見黃色卵巢,結(jié)扎輸卵管,剪除卵巢,回納輸卵管。假手術(shù)組僅剪除等卵巢體積大小的脂肪,其余操作相同。術(shù)后連續(xù)7d腹腔內(nèi)注射青霉素(20萬U·d-1)。②慢性應(yīng)激(CMS)致抑郁過程:術(shù)后恢復(fù)2周后開始對大鼠進(jìn)行慢性應(yīng)激致抑郁過程。慢性應(yīng)激過程參考Roth報道的方法并稍加改進(jìn),每天隨機(jī)給予大鼠以下8種刺激中的任何一種,連續(xù)21d:電擊足底(電流強(qiáng)度1.0mA,持續(xù)時間10s,間隔時間1min,30次),禁食(40h),冰水游泳(4℃,5min),禁水(24h),熱刺激(45℃,5min),晝夜顛倒(24h),無刺激(24h)和夾尾(1min)。整個刺激過程盡量減少大鼠疼痛和不舒適讓刺激達(dá)到最大的不可預(yù)知性。③17β-雌二醇干預(yù):從慢性應(yīng)激第3天開始,OV/ER組每日1次灌胃給予17β-雌二醇(100μg·kg-1,Sigma公司,美國),直至處死大鼠的前1d。1.3行為學(xué)觀察方法①敞箱試驗(openfieldtest,OFT):100cm×100cm×50cm的敞箱被劃分為等大的25個方格,周圍圍以不透明材料。大鼠被置于敞箱的中央格內(nèi),檢測其5min內(nèi)的垂直運(yùn)動次數(shù)(兩前爪騰空或攀墻壁為1次垂直運(yùn)動)、水平運(yùn)動格數(shù)和中央格停留不動時間。②強(qiáng)迫游泳試驗(forcedswimmingtest,FST):將大鼠置于水深約18cm的容器(40cm×40cm×50cm)中,觀察其在水中5min內(nèi)的不動行為時間和上竄行為時間。在正式游泳的前1d進(jìn)行15min的預(yù)游泳,使大鼠適應(yīng)實驗的環(huán)境。1.4韁核內(nèi)NE的測定行為觀察結(jié)束后,將大鼠斷頭處死,剝離全腦,在冰上迅速分離出韁核,-70℃冰箱保存。將韁核組織勻漿后,3000r·min-1、4℃離心15min,取上清液0.5mL,并加入磺基水楊酸10mg,搖勻靜止數(shù)分鐘。1500r·min-1、4℃離心20min,取10μL濾過膜濾過的上清液,應(yīng)用高效液相色譜法加電化學(xué)檢測韁核內(nèi)NE的含量(單位ng·g-1)。1.5統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,數(shù)據(jù)用xˉ±sxˉ±s表示,OFT行為變化、FST行為變化及韁核內(nèi)NE含量組間比較采用單因素方差分析。2結(jié)果2.1大鼠的不動時間和運(yùn)動水平,sham組和ovx組大鼠OFT試驗行為學(xué)觀察,在慢性應(yīng)激過程中隨應(yīng)激刺激時間的延長,Sham組和OVX組大鼠的水平運(yùn)動和垂直運(yùn)動水平逐漸降低,不動時間逐漸延長;而OV/ER則無明顯變化,與OVX組比較差異有顯著性(P<0.05),見表1。2.2大鼠不動時間和上竄時間的比較慢性應(yīng)激結(jié)束后,觀察大鼠在水中游泳時間,與OVX組比較,OV/ER組大鼠不動時間明顯縮短(P<0.05),上竄時間明顯增加(P<0.05),見表2。2.3不同促進(jìn)劑對不同高度的文化遺產(chǎn)中ni含量的比較慢性應(yīng)激結(jié)束后,用高效液相色譜法測定大鼠韁核內(nèi)NE含量,OV/ER組韁核內(nèi)NE含量[(923.68±35.99)ng·g-1]明顯高于OVX組[(717.46±30.93)ng·g-1],兩組比較差異有顯著性(P<0.05),但與Sham組韁核內(nèi)NE含量[(738.67±34.37)ng·g-1]比較差異無顯著性(P>0.05)。3間抑郁癥狀的治療作用雌激素對于情緒的調(diào)節(jié)具有重要的影響,雌激素水平的降低與產(chǎn)后抑郁和絕經(jīng)后抑郁密切相關(guān),因此,研究雌激素在女性抑郁癥發(fā)病中的作用及其機(jī)制對于女性健康顯得尤為重要。在本實驗中,應(yīng)用OFT和FST觀察雌激素對去卵巢抑郁癥大鼠行為的影響,結(jié)果顯示,雌激素干預(yù)可以明顯地改善去卵巢抑郁癥大鼠的抑郁癥狀,說明雌激素對去卵巢抑郁癥大鼠的確有治療作用。韁核是邊緣前腦和腦干之間的一個重要樞紐,其在抑郁癥發(fā)生過程中的作用也日益引起重視。國外有研究表明,抑郁動物韁核的代謝增高。以往本課題組的研究也提示韁核參與了抑郁癥的發(fā)生過程,如韁核損毀可以改善抑郁癥大鼠的抑郁行為變化。在本實驗中,應(yīng)用高效液相色譜法檢測雌激素干預(yù)后去卵巢抑郁大鼠韁核內(nèi)NE含量的變化,因為多數(shù)學(xué)者認(rèn)為抑郁癥的發(fā)生是中樞多種神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)紊亂所致,而NE能系統(tǒng)活動的失調(diào)可能決定了抑郁癥的最終發(fā)病。本研究結(jié)果顯示,與OVX組比較,OV/ER組韁核內(nèi)NE水平明顯增高,