實(shí)驗(yàn)一反射時(shí)的測定及反射弧的分析[目的]1．學(xué)習(xí)測定反射時(shí)的方法。2．了解反射弧的組成。通過實(shí)驗(yàn)證明任何一個(gè)反射，只有當(dāng)實(shí)現(xiàn)該反射的反射弧存在，并保證其完整的情況下才能出現(xiàn)。[原理]機(jī)體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)參與之下，對刺激所發(fā)生的反應(yīng)叫做反射；反射弧是反射的解剖學(xué)基礎(chǔ)(反射弧一般包括感受器、傳入神經(jīng)、中樞、傳出神經(jīng)、效應(yīng)器等五個(gè)部分)。要引起反射，首要條件是反射弧必須完整。反射弧的任何一部分受到破壞，反射即不出現(xiàn)。[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物]蛙或蟾蜍[器材及藥品]蛙類常用手術(shù)器械、支柱臺(tái)、蛙嘴夾、蛙板、蛙腿夾、小燒杯、大燒杯、培養(yǎng)皿玻璃(2個(gè))、小濾紙片、棉花、秒表、紗布、0.5％及1％硫酸溶液、水。[方法與步驟]一、脊蟾蜍的反射1．制備脊蛙（或脊蟾蜍）：利用毀髓針從枕骨大孔處搗毀腦，保留脊髓制備脊蛙，用蛙嘴夾夾住蛙的下頜，掛在支柱臺(tái)上2.屈曲反射正常反射活動(dòng)的觀察及反射時(shí)的測定：用培養(yǎng)皿盛0.5％硫酸溶液，將蛙右后肢的最長趾浸入0.5%硫酸溶液中2～3mm(浸入時(shí)間最長不超過10s)，立即記下時(shí)間（以秒計(jì)算）。當(dāng)出現(xiàn)屈腿反射時(shí)，則停止計(jì)時(shí)，此為屈腿反射時(shí)（即從浸入時(shí)起至后肢發(fā)生屈曲時(shí)所需要的時(shí)間）。立即用清水沖洗受刺激的皮膚，并用紗布擦干。重復(fù)三次，求出平均值作為右后肢最長趾的反射時(shí)。用同樣方法測定左后肢最長趾的反射時(shí)。3.搔扒反射用浸有1%硫酸的濾紙片刺激脊蟾蜍一側(cè)胸腹部或背部皮膚，引起同側(cè)或雙側(cè)后肢運(yùn)動(dòng)，扒掉濾紙片。二、反射弧1、反射弧模式圖2、屈曲反射的反射弧最長趾感受器→傳入神經(jīng)纖維→脊髓→傳出神經(jīng)纖維→下肢屈肌3、搔扒反射的反射弧腹部感受器→傳入神經(jīng)纖維→脊髓→傳出神經(jīng)纖維→下肢肌三、反射弧完整才能發(fā)生反射1、破壞感受器手術(shù)剪自右后肢最長趾基部環(huán)切皮膚，然后再用手術(shù)鑷剝凈長趾上的皮膚。用硫酸刺激去皮的長趾，記錄結(jié)果。2、麻醉傳入和傳出神經(jīng)纖維沿右后肢的股二頭肌溝剪開皮膚，分離出坐骨神經(jīng)。在神經(jīng)下穿細(xì)棉線后，在細(xì)棉條上滴幾滴2％普魯卡因溶液，每隔2min重復(fù)刺激(記錄加藥時(shí)間)。當(dāng)屈反射剛剛不能出現(xiàn)時(shí)(記錄時(shí)間)，大約五分鐘后，用浸有1%硫酸的濾紙片刺激脊蟾蜍一側(cè)胸腹部皮膚，觀察搔扒反射。然后15分鐘后，再用濾紙片刺激胸腹部皮膚，觀察搔扒反射。3、破壞效應(yīng)器將蟾蜍一側(cè)皮膚從根部環(huán)切，剝離后浸入含20%的甘油任氏液中，大約經(jīng)過三十分鐘后，該側(cè)肢體不能發(fā)生搔扒反射4.破壞脊髓中樞用細(xì)探針插入髓管內(nèi)，上下抽動(dòng)破壞中樞——脊髓，蛙四肢松弛。重復(fù)實(shí)驗(yàn)，記錄結(jié)果。四、小結(jié)1、反射是機(jī)體通過神經(jīng)系統(tǒng)對內(nèi)外環(huán)境的刺激所發(fā)生的反應(yīng)2、反射弧是反射的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，由感受器、傳入神經(jīng)纖維、傳出神經(jīng)纖維、效應(yīng)器組成。3、反射的完成依賴反射弧的完整性。[討論]1.說明屈腿反射的具體過程。2.以實(shí)驗(yàn)結(jié)果為根據(jù)，以嚴(yán)密的邏輯推理方式說明反射弧的幾個(gè)組成部分。[注意事項(xiàng)]每次實(shí)驗(yàn)時(shí)，要使皮膚接觸硫酸面積不變，以保持相同的刺激強(qiáng)度刺激后要立即洗去硫酸，以免損傷皮膚。實(shí)驗(yàn)二坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本制備蟾蜍（或蛙）的腓腸肌標(biāo)本、常用手術(shù)器械、BL—420E、張力傳感器、刺激電極、支架、雙凹夾、肌槽、不銹鋼盤、滴管、任氏液、棉線。[方法與步驟]1、破壞腦脊髓：

（1）取蟾蜍一只，用自來水沖洗干凈。左手握住蟾蜍，用食指按其頭部使之略向前屈，拇指按住其背部，其余三指則握住蟾蜍的四肢和腹部（2）用右手持金屬探針，在頭顱后緣，自枕骨大孔與脊椎管之間刺入椎管，先左右擺動(dòng)，離斷脊髓；再向前插入顱腔，向左右擺動(dòng)數(shù)次，搗毀全部腦組織，如探針確已插入顱腔，則向各方向擺動(dòng)時(shí)，即有觸及顱骨的感覺。（3）將探針撤回至枕骨大孔，但不拔出皮膚，直接向后插入脊椎管，直達(dá)骶部，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)探針，以破壞脊髓。如探針確已在脊椎管中，則不能左右擺動(dòng)，探針不得穿透脊椎管，以免損傷內(nèi)臟。最后拔出探針，用小棉球堵塞創(chuàng)口以止血。

腦脊髓破壞完全后，蟾蜍將失去一切反射活動(dòng)，全身肌肉軟癱。如動(dòng)物仍有反射動(dòng)作，表示破壞不徹底，必須重新破壞。

2、去皮和制作下肢標(biāo)本：（1）左手握住蟾蜍的脊柱，用粗剪刀在前肢腋窩處，將脊柱橫斷，并沿脊柱兩側(cè)避開坐骨神經(jīng)剪開腹壁，此時(shí)頭、軀干上部及內(nèi)臟全部下垂，剪除頭、全部軀干及內(nèi)臟組織，剪去肛周皮膚，留下脊柱和后肢（2）用圓頭鑷子夾住脊柱邊緣，注意不要碰到坐骨神經(jīng)，捏住皮膚邊緣，逐步向下牽拉剝離皮膚。將全部皮膚剝除后，標(biāo)本放于盛有任氏液的小燒杯中。隨即洗凈蛙板、剪刀和雙手上的污物及毒汁。

（3）用粗剪刀沿脊柱和骨盆的中線，將標(biāo)本縱剖為兩半，注意勿損傷坐骨神經(jīng)。一半置于蛙板上，以制備標(biāo)本；另一半置于盛有任氏液的玻璃平皿中備用。3、制備神經(jīng)－腓腸肌標(biāo)本：

（1）把下肢的背面朝上，辨認(rèn)蟾蜍大腿的三頭肌、二頭肌和半膜肌，以及小腿的腓腸肌。

（2）用玻璃鉤針和鑷子仔細(xì)把二頭肌和半膜肌分開，便可看到一條粗大的神經(jīng)，此即坐骨神經(jīng)。用玻璃鉤針把神經(jīng)挑起，剪去通往大腿肌肉的神經(jīng)分支，順著神經(jīng)走行方向，轉(zhuǎn)向腹腔面沿脊柱逐漸把神經(jīng)主干全部分出，直到所連的椎骨為止。用粗剪刀剪除多余的肌肉和脊椎骨，僅留下與坐骨神經(jīng)相連的一小塊脊椎骨，用鑷子夾住這塊脊椎骨，輕輕提起坐骨神經(jīng)，用手術(shù)剪剪去殘余的分支，并將坐骨神經(jīng)一直分離到膝關(guān)節(jié)附近。

（3）分離腓腸肌的跟腱，用線結(jié)扎跟腱，在結(jié)扎處以下將跟腱剪斷。持線提起腓腸肌，用粗剪刀剪去小腿骨和其上的肌肉，再將大腿肌肉剪去，只留長約1～2cm的股骨，并將其上肌肉刮干凈，以便在肌動(dòng)器上固定此標(biāo)本。4、檢驗(yàn)標(biāo)本：用鋅銅弓的兩端輕輕接觸神經(jīng)，若肌肉產(chǎn)生收縮，則表示此標(biāo)本的機(jī)能狀態(tài)良好。5、實(shí)驗(yàn)儀器用品的準(zhǔn)備。打開計(jì)算機(jī)采集系統(tǒng)，連接張力傳感器與刺激輸出。將標(biāo)本的骨頭固定在肌槽的骨頭固定孔內(nèi)，腓腸肌肌腱上的扎線與張力傳感器應(yīng)變梁相連，雙針形刺激電極密切接觸近膝關(guān)節(jié)處的腓腸肌，電極接頭與刺激輸出線相通，調(diào)節(jié)好扎線的張力，不可過松或過緊，以使肌肉自然拉平為宜（保證肌肉一旦收縮，即可牽動(dòng)張力傳感器的應(yīng)變梁）。6、計(jì)算機(jī)采集系統(tǒng)的準(zhǔn)備開通與張力傳感器相連的通道，選擇張力信號輸入，然后啟動(dòng)波形顯示圖標(biāo)，此時(shí)顯示通道中出現(xiàn)掃描線。調(diào)節(jié)刺激裝置的設(shè)置，將延時(shí)、波寬及刺激強(qiáng)度調(diào)至最小，選擇單刺激方式刺激。啟動(dòng)刺激圖標(biāo)，調(diào)節(jié)掃描基線接近刺激標(biāo)記先后即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。7、實(shí)驗(yàn)觀察（1）啟動(dòng)刺激圖標(biāo)，觀察肌肉收縮反應(yīng)。如果肌肉無收縮反應(yīng)，則適當(dāng)增加刺激強(qiáng)度，其他刺激參數(shù)保持不變。間隔少許時(shí)間，同法進(jìn)行第二次刺激，直到出現(xiàn)肌肉的最小收縮。測量收縮幅度并記下刺激強(qiáng)度，此時(shí)的刺激強(qiáng)度為閾強(qiáng)度。（2）同法逐漸增加刺激強(qiáng)度，觀察刺激強(qiáng)度與肌肉收縮反應(yīng)的關(guān)系。（3）當(dāng)刺激強(qiáng)度達(dá)到某一數(shù)值后，肌肉收縮幅度不再隨刺激強(qiáng)度的增加而升高。記錄3—4次同等高度的收縮曲線和刺激強(qiáng)度。實(shí)驗(yàn)四神經(jīng)干復(fù)合動(dòng)作電位的記錄觀察【目的要求】1.學(xué)習(xí)電生理實(shí)驗(yàn)方法。2.觀察蛙坐骨神經(jīng)干復(fù)合動(dòng)作電位的波形，并了解其產(chǎn)生的基本原理。3、學(xué)習(xí)測定不應(yīng)期的方法，及學(xué)習(xí)測定神經(jīng)沖動(dòng)傳導(dǎo)速度的方法?！净驹怼可窠?jīng)干在受到有效刺激后，可以產(chǎn)生動(dòng)作電位，標(biāo)志著神經(jīng)發(fā)生興奮。如果在神經(jīng)干另一端引導(dǎo)傳來的興奮沖動(dòng)，可以引導(dǎo)出雙相的動(dòng)作電位，如果在兩個(gè)引導(dǎo)電極之間將神經(jīng)麻醉或損壞，則引導(dǎo)出的動(dòng)作電位即為單相動(dòng)作電位。神經(jīng)細(xì)胞的動(dòng)作電位是以“全或無"方式產(chǎn)生的。坐骨神經(jīng)干是以由很多不同類型的神經(jīng)纖維組成的，所以，神經(jīng)干的動(dòng)作電位是復(fù)合動(dòng)作電位。復(fù)合動(dòng)作電位的幅值在一定刺激強(qiáng)度下是隨刺激強(qiáng)度的變化而變化的。神經(jīng)在一次興奮的過程中，其興奮性也發(fā)生一個(gè)周期性的變化，而后才恢復(fù)正常。興奮性的周期變化，依次包括絕對不應(yīng)期、相對不應(yīng)期、超常期和低常期4個(gè)時(shí)期。根據(jù)兩次刺激間隔的設(shè)置，可以觀察出興奮的周期。神經(jīng)干受到有效刺激發(fā)生興奮后，產(chǎn)生的動(dòng)作電位將以一定的速度沿神經(jīng)傳導(dǎo)。測定神經(jīng)纖維興奮的傳導(dǎo)速度v時(shí)，在遠(yuǎn)離刺激點(diǎn)的不同距離處分別用兩組引導(dǎo)電極引導(dǎo)動(dòng)作電位，測出兩引導(dǎo)點(diǎn)之間的距離m和分別引導(dǎo)出的動(dòng)作電位的時(shí)相差s，根據(jù)v=m/s即可計(jì)算出其傳導(dǎo)速度。

【動(dòng)物與器材】蟾蜍或蛙、常用手術(shù)器械、計(jì)算機(jī)采集系統(tǒng)、神經(jīng)屏蔽盒、任氏液?！痉椒ㄅc步驟】1.

制備蛙或蟾蜍坐骨神經(jīng)干標(biāo)本。2.將蛙的坐骨神經(jīng)干標(biāo)本置于屏蔽盒內(nèi)的電極上，神經(jīng)干的中樞端置于刺激電極一側(cè)，從末梢端引導(dǎo)動(dòng)作電位。3.

動(dòng)作電位的觀察與記錄(1)

神經(jīng)干興奮閾值的測定刺激強(qiáng)度從0.1V開始，逐漸增加刺激強(qiáng)度，當(dāng)剛剛出現(xiàn)動(dòng)作電位時(shí)的刺激強(qiáng)度，即為神經(jīng)干的興奮閾值。(2)

雙相動(dòng)作電位在刺激閾值的基礎(chǔ)上逐漸加大刺激強(qiáng)度，可見動(dòng)作電位的圖形為雙相，而且其幅值隨刺激強(qiáng)度增大而加大。當(dāng)刺激增加到一定強(qiáng)度時(shí)，可見動(dòng)作電位的幅值不再增大。(3)

動(dòng)作電位參數(shù)的測量用鼠標(biāo)點(diǎn)擊“快捷工具欄”的“觀察”，移動(dòng)鼠標(biāo)，測出動(dòng)作電位的一系列參數(shù)。(4)

單相動(dòng)作電位在兩個(gè)引導(dǎo)點(diǎn)擊之間損傷神經(jīng)干標(biāo)本，可使原來的雙相動(dòng)作電位的下相小時(shí)，變?yōu)閱蜗啵蛔⒁馍舷鄤?dòng)作電位的圖形有什么變化。4、神經(jīng)干不應(yīng)期的測定用鼠標(biāo)點(diǎn)擊“開始”“刺激”，最初可見到相距30ms（首間隔）的兩個(gè)動(dòng)作電位圖形，而且兩個(gè)圖形的幅值是同樣大小的。此后用鼠標(biāo)再次點(diǎn)擊“刺激”，每刺激一次，第二個(gè)刺激即按照“間隔”所設(shè)定的時(shí)間向第一個(gè)刺激靠近一次，從而使第二個(gè)動(dòng)作電位圖形向第一個(gè)動(dòng)作電位相應(yīng)靠近。當(dāng)發(fā)現(xiàn)第二個(gè)動(dòng)作電位的圖形幅值開始比第一個(gè)減小時(shí)，說明第二個(gè)刺激落入到第一次刺激的相對不應(yīng)期。第二個(gè)刺激越是靠近第一個(gè)刺激，其動(dòng)作電位的幅值就越小。當(dāng)?shù)诙€(gè)刺激距離第一個(gè)刺激大約為1.5～2ms左右時(shí)，第二個(gè)動(dòng)作電位則完全消失，表明第二個(gè)刺激落入到第一次興奮后的絕對不應(yīng)期。

5、神經(jīng)沖動(dòng)傳導(dǎo)速度的測定實(shí)驗(yàn)測得搭在兩組引導(dǎo)電極之間的神經(jīng)干長度m，兩個(gè)動(dòng)作電位起始點(diǎn)的時(shí)間間隔s，由公式v=m/s計(jì)算得實(shí)驗(yàn)用的蛙坐骨神經(jīng)干標(biāo)本的興奮傳導(dǎo)速度【注意事項(xiàng)】a)

實(shí)驗(yàn)過程中注意保持標(biāo)本的活性良好，經(jīng)常用任氏液濕潤之。b)

如果在顯示窗上發(fā)現(xiàn)動(dòng)作電位圖形倒置，將引導(dǎo)電極位置交換即可。C)在引導(dǎo)動(dòng)作電位的實(shí)驗(yàn)中常常會(huì)記錄到刺激偽跡。刺激偽跡是由外加的刺激和電緊張電位產(chǎn)生的，會(huì)隨著刺激強(qiáng)度的變化而不斷變化，而且刺激偽跡是雙相的，通過這些特點(diǎn)可以將刺激偽跡與動(dòng)作電位的曲線分辨開來。實(shí)驗(yàn)五脊神經(jīng)背根和腹根機(jī)能的驗(yàn)證【目的要求】.1．學(xué)習(xí)暴露脊髓和分離脊神經(jīng)背、腹根的方法。2．了解背根和腹根的不同機(jī)能?！净驹怼?脊神經(jīng)的背根是由傳入神經(jīng)纖維組成，具有傳入機(jī)能；腹根由傳出神經(jīng)纖維組成，具有傳出機(jī)能。若切斷背根，則相應(yīng)部位的刺激不能傳入中樞；若切斷腹根，不能傳出沖動(dòng)，則效應(yīng)器也不再發(fā)生反應(yīng)。材料器具大蟾蜍；中式尖頭剪刀，鑷子，解剖刀，玻璃鉤針，探針，干電池，金屬細(xì)導(dǎo)線（銅絲），黑線，白線，蛙板（20×15厘米），大頭針；兩棲動(dòng)物生理鹽水（0.65%氯化鈉溶液）。步驟1.將蟾蜍或蛙毀腦后腹位固定于蛙板上。沿背部中線剪開皮膚，向前開口至耳后腺水平，向后開口至尾桿骨中段。用剪刀小心剪去脊椎兩側(cè)的縱行肌肉及椎間肌肉，暴露椎骨。2.用金冠剪橫向剪斷環(huán)椎，然后將彎頭金冠剪小心伸入椎管，自后至前，逐節(jié)剪斷兩側(cè)椎弓，移去骨片，暴露全部脊髓（勿損傷脊髓）。3.用眼科鑷輕輕挑開脊髓表面的銀灰色或黑色脊膜，再用任氏液沖洗馬尾部，小心識別第7—10對脊神經(jīng)背根和腹根。用玻璃解剖針分離一側(cè)第9對脊神經(jīng)的背、腹根（背根近椎間孔處有淡黃色、半個(gè)小米粒大腹根穿兩條紅色絲線備用。放松兩后肢即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察。①提起白絲線，用較弱的單脈沖刺激背根