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生物化學(xué)實驗?zāi)暇┺r(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)系1實驗一分光光度計線性分辨范圍測定2一、實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)分光光度計的工作原理掌握比色測定的基本操作掌握標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作及最佳濃度范圍的確定3二、實驗原理當(dāng)光線通過透明溶液介質(zhì)時，其輻射的波長有一部分被吸收，一部分透過、因此光線射出溶液之后，部分光波減少，這種光波的吸收和透過可用于某些物質(zhì)的定性定量分析。Lambert-Beer定律的適用范圍4從上式可以看出，一束單色光通過溶液后，光波被部分吸收，其吸收多少與溶液濃度和溶液厚度（光徑）成正比對于同一臺分光光度計而言，入射光光強(qiáng)不變；對于某一待側(cè)物而言，摩爾消光系數(shù)為常數(shù)，當(dāng)光徑也保持不變時，吸光度與溶液濃度在一定范圍內(nèi)成正比相對比較的概念5三、實驗材料及設(shè)備1、儀器UV9100分光光度計2、器材普通試管：25mL×9移液管：2mL×1燒杯：250mL×1洗耳球、滴管：各2洗瓶、試管架、移液管架：各16四、試劑的配制硫氰化鐵（Fe(SCN)3）溶液稱取8.95gKSCN和5.00gFeCl3·6H2O

，蒸餾水溶解后定容至2L藥品取用時務(wù)必規(guī)范操作！德國女科學(xué)家違規(guī)稀釋濃硫酸導(dǎo)致毀容7五、操作步驟1、教師現(xiàn)場演示如何使用分光光度計2、取9支試管，按下表所示操作8六、結(jié)果處理1、由0~8號管的數(shù)據(jù)，以硫氰化鐵含量為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪制曲線自學(xué)使用軟件繪制2、根據(jù)曲線分析分光光度計線性分辨范圍9七、思考題1、在用分光光度計做比色測定時，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度范圍應(yīng)怎樣選定？待測樣品溶液的濃度應(yīng)稀釋在什么范圍？請自行討

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