微生物的生長(zhǎng)生長(zhǎng)測(cè)定生長(zhǎng)是一個(gè)逐步發(fā)生的量變過(guò)程，繁殖是一個(gè)產(chǎn)生新的生命個(gè)體的質(zhì)變過(guò)程。在高等生物里這兩個(gè)過(guò)程可以明顯分開(kāi)，但在低等特別是在單細(xì)胞的生物里，由于細(xì)胞小，這兩個(gè)過(guò)程是緊密聯(lián)系又很難劃分的過(guò)程。生長(zhǎng)和繁殖群體生長(zhǎng)=個(gè)體生長(zhǎng)+個(gè)體繁殖個(gè)體生長(zhǎng)→個(gè)體繁殖→群體生長(zhǎng)在一定時(shí)間和條件下細(xì)胞數(shù)量的增加（微生物群體生長(zhǎng)）微生物生長(zhǎng):在微生物學(xué)中提到的“生長(zhǎng)”，一般均指群體生長(zhǎng)，這一點(diǎn)與研究大生物時(shí)有所不同。微生物生長(zhǎng)量測(cè)定1.測(cè)生長(zhǎng)量直接法2.測(cè)生長(zhǎng)量間接法1.測(cè)生長(zhǎng)量直接法測(cè)體積法：粗放型，在刻度離心管中測(cè)沉降量稱(chēng)干重法：精確型，離心法和過(guò)濾法獲得菌體細(xì)胞，微生物的干重一般為其濕重的10％～20％測(cè)定多細(xì)胞及絲狀真菌生長(zhǎng)情況的有效方法以E.coli為例，一般液體的培養(yǎng)物（culture）中，細(xì)胞濃度通常為2×109個(gè)／mL，100mL培養(yǎng)物約可得10～90mg干重的細(xì)胞；高密度培養(yǎng)（highcell-densityculture，HCDC）中，細(xì)胞產(chǎn)量最高記錄可達(dá)到174g/L。2.測(cè)生長(zhǎng)量間接法

（1）比濁法

用分光光度法對(duì)無(wú)色的微生物懸浮液進(jìn)行測(cè)定，一般選用450～650nm波段。實(shí)驗(yàn)測(cè)量時(shí)應(yīng)控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內(nèi)，否則不準(zhǔn)確。

在一定波長(zhǎng)下，測(cè)定菌懸液的光密度，以光密度（opticaldensity,即O.D.）表示菌量。

若要連續(xù)跟蹤某一培養(yǎng)物的生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)，可用帶有側(cè)臂的三角燒瓶作原位測(cè)定，即不必取樣。（2）生理指標(biāo)法

樣品中微生物數(shù)量多或生長(zhǎng)旺盛，這些指標(biāo)愈明顯，因此可以借助特定的儀器如瓦勃氏呼吸儀、微量量熱計(jì)等設(shè)備來(lái)測(cè)定相應(yīng)的指標(biāo)。

微生物的生理指標(biāo)，如氮、碳、DNA、ATP等物質(zhì)的含量，呼吸強(qiáng)度、耗氧量、酶活性、生物熱等與其群體的規(guī)模成正相關(guān)。常用于對(duì)微生物的快速鑒定與檢測(cè)

一種特定的微生物，每一個(gè)細(xì)胞中的ATP濃度幾乎是一個(gè)常數(shù)，所以測(cè)定這種微生物的ATP含量，即可知其細(xì)胞數(shù)。已知細(xì)胞數(shù)的微生物樣品測(cè)定ATP含量測(cè)定未知細(xì)胞數(shù)的微生物樣品的ATP含量換算出每個(gè)細(xì)胞所含的ATP量即可算出未知樣中細(xì)胞數(shù)ATP濃度的測(cè)定E＋L＋AMP＋H2O熒光素酶E還原型熒光素LH2E-LH2?AMP復(fù)合物ATPppiMg2＋＋＋＋＋光O2生物發(fā)光儀

在這個(gè)反應(yīng)系統(tǒng)中，酶、熒光素和O2都過(guò)量時(shí)，光的強(qiáng)度與ATP的量成正比。可用生物發(fā)光儀測(cè)定光照強(qiáng)度，從而換算出ATP的濃度。

生物發(fā)光儀現(xiàn)用于各種樣品中細(xì)胞數(shù)的測(cè)定。Eg.臨床上測(cè)血液、尿液中的菌數(shù)；工業(yè)上發(fā)酵液中的菌數(shù)；環(huán)境污染狀況的測(cè)定等。二、計(jì)繁殖數(shù)測(cè)定繁殖，一定要一一計(jì)算各個(gè)體的數(shù)目。單細(xì)胞狀態(tài)的細(xì)菌和酵母菌放線菌和霉菌等絲狀生長(zhǎng)的微生物計(jì)算其孢子數(shù)計(jì)算各個(gè)體的數(shù)目（一）計(jì)繁殖數(shù)直接法

1.計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)法

指采用計(jì)數(shù)板（細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血球計(jì)數(shù)板），在光學(xué)顯微鏡下直接觀察微生物細(xì)胞并進(jìn)行計(jì)數(shù)的方法。（計(jì)算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量）計(jì)繁殖數(shù)法缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)細(xì)菌的計(jì)數(shù)；需要相對(duì)高的細(xì)菌濃度；個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察.2.染色后活菌計(jì)數(shù)法

采用特定的染色技術(shù)進(jìn)行活菌染色，然后用光學(xué)顯微鏡計(jì)數(shù)的方法?？煞謩e對(duì)活菌和死菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。Eg.美藍(lán)酵母活細(xì)胞→無(wú)色

死細(xì)胞→藍(lán)色Eg.細(xì)菌經(jīng)丫啶橙染色后，在紫外光顯微鏡下可觀察活細(xì)胞→橙色熒光死細(xì)胞→綠色熒光3.過(guò)濾計(jì)數(shù)法

當(dāng)樣品中菌數(shù)很低時(shí)，可以將一定體積的湖水、海水或飲用水等樣品通過(guò)膜過(guò)濾器。然后將濾膜干燥、染色，并經(jīng)處理使膜透明，再在顯微鏡下計(jì)算膜上（或一定面積中）的細(xì)菌數(shù)。4.涂片染色法應(yīng)用：可同時(shí)計(jì)數(shù)不同微生物的菌數(shù)，適于土壤、牛奶中細(xì)菌計(jì)數(shù)。方法：用鏡臺(tái)測(cè)微尺計(jì)算出視野面積；取0.1ml菌液涂于1cm2面積上，計(jì)數(shù)后代入公式：

每ml原菌液含菌數(shù)=視野中平均菌數(shù)×(涂布面積/視野面積)×100×稀釋倍數(shù)（二）計(jì)繁殖數(shù)間接法

是一種活菌計(jì)數(shù)法，這是一種依據(jù)活菌在液體培養(yǎng)基中會(huì)使其變混或在固體培養(yǎng)基上（內(nèi)）形成菌落的原理而設(shè)計(jì)。最常用的是平板菌落計(jì)數(shù)法平板菌落計(jì)數(shù)法

可用澆注平板（pourplate）或涂布平板（spreadplate）等方法進(jìn)行。采用培養(yǎng)平板計(jì)數(shù)法要求操作熟練、準(zhǔn)確，否則難以得到正確的結(jié)果。最常用的一種方法。常用來(lái)測(cè)定牛奶、食品、水及其它材料中的含菌數(shù)。有些細(xì)菌如無(wú)法在固體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)或其他原因，可用液體稀釋法，借助統(tǒng)計(jì)學(xué)來(lái)判斷其活菌數(shù)。樣品充分混勻每支移液管及涂布棒只能接觸一個(gè)稀釋度的菌液同一稀釋度三個(gè)以上重復(fù),取平均值每個(gè)平板上的菌落數(shù)目合適，便于準(zhǔn)