5、病原性球菌檢驗(yàn)技能訓(xùn)練2．熟練革蘭染色技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化操作3．掌握常見病原性球菌的鑒定要點(diǎn)1、學(xué)會(huì)病原性球菌的形態(tài)學(xué)鑒定。4.養(yǎng)成認(rèn)真、細(xì)致、精益求精的工作作風(fēng)實(shí)訓(xùn)物品：菌種：金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎鏈球菌試劑：革蘭染液一套、載玻片、3%H2O2、抗凝人血漿培養(yǎng)基：MH瓊脂平板、血平板、甘露醇發(fā)酵管實(shí)訓(xùn)內(nèi)容一、細(xì)菌分離培養(yǎng)二、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎鏈球菌菌落觀察。三、細(xì)菌形態(tài)學(xué)鑒定——染色鏡檢。四、細(xì)菌生化鑒定菌種培養(yǎng)基培養(yǎng)接種技術(shù)金黃色葡萄球菌血平板35℃需氧培養(yǎng)18-20小時(shí)

分區(qū)劃線接種技術(shù)表皮葡萄球菌血平板35℃需氧培養(yǎng)18-20小時(shí)肺炎鏈球菌血平板35℃5-10%CO2培養(yǎng)18-20小時(shí)一、細(xì)菌分離培養(yǎng)二、細(xì)菌菌落觀察觀察項(xiàng)目：大小、形態(tài)、邊緣、表面（光滑、粗糙、粘液型）、透明度、顏色、溶血性試驗(yàn)菌種BA上菌落特征金黃色葡萄球菌1-2mm圓形凸起邊緣整齊不透明的金黃色光滑型菌落，有β溶血環(huán)表皮葡萄球菌1-2mm圓形凸起邊緣整齊不透明的白色光滑型菌落，無溶血現(xiàn)象肺炎鏈球菌1-2mm表面扁平、邊緣整齊、不透明的灰白色光滑型菌落，有α溶血環(huán)三、革蘭染色鏡檢1、操作：每個(gè)同學(xué)對一個(gè)菌種進(jìn)行革蘭染色鏡檢，2人次/菌種/組2、記錄結(jié)果：形態(tài)、排列、顏色、染色性、特殊結(jié)構(gòu)菌種/觀察項(xiàng)目金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌肺炎鏈球菌形態(tài)球形球形球形排列葡萄串狀葡萄串狀呈雙排列顏色紫色紫色紫色染色性G+G+G+1、觸酶試驗(yàn)：玻片法（金、表、肺鏈）2、血漿凝固酶試驗(yàn)：玻片法（金、表）3、新生霉素藥敏

：MH培養(yǎng)基—密集劃線接種：表葡

4、膽汁溶菌試驗(yàn)

：肺鏈：菌落法—單菌落+10%去氧膽酸鈉---15分鐘后觀察5、optochin藥敏

：血平板---密集劃線接種：肺鏈6、甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)：液體培養(yǎng)基接種法（金、表）四、生化鑒定--（一）實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目生化試驗(yàn)金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌肺炎鏈球菌觸酶試驗(yàn)??????血漿凝固酶試驗(yàn)????膽汁溶菌試驗(yàn)??新生霉素藥敏試驗(yàn)??奧普托欣藥敏試驗(yàn)??甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)????生化試驗(yàn)金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌肺炎鏈球菌觸酶試驗(yàn)++-血漿凝固酶試驗(yàn)+-膽汁溶菌試驗(yàn)+四、生化鑒定-（二）生化試驗(yàn)結(jié)果方法：背面量取抑菌環(huán)，讀整數(shù)mm直徑≤16mm耐藥

>16mm敏感新生霉素敏感試驗(yàn)

結(jié)果：表皮葡萄球菌：敏感（S）方法：背面量取抑菌環(huán)，讀整數(shù)mm抑菌環(huán)直徑>14mm：S奧普托欣敏感試驗(yàn)

結(jié)果：肺炎鏈球菌：敏感（S）甘露醇發(fā)酵實(shí)驗(yàn)金黃色葡萄球菌+表皮葡萄球菌-金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌菌落BA：金黃色、β溶血的光滑型菌落BA：白色光滑型菌落，無溶血現(xiàn)象鏡下G+、球形、葡萄串狀G+、球形、葡萄串狀觸酶++血漿凝固酶+-新生霉素敏感試驗(yàn)SS甘露醇發(fā)酵+-鑒