第2節(jié)微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用第2課時(shí)微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)課時(shí)·訓(xùn)練基礎(chǔ)鞏固1.研究人員通過(guò)對(duì)大腸桿菌進(jìn)行基因改造,使其不僅能分解傳統(tǒng)生物能源技術(shù)中使用的蔗糖,還能分解廣泛存在于植物纖維中的半纖維素,為有效利用半纖維素提供了新途徑。若要將這種大腸桿菌分離出來(lái),應(yīng)將它們接種在()A.不含氮源的培養(yǎng)基上B.含有蛋白胨的固體培養(yǎng)基上C.只含半纖維素而無(wú)其他碳源的選擇培養(yǎng)基上D.不含營(yíng)養(yǎng)要素的培養(yǎng)基上答案:C解析:由題干可知,改造后的大腸桿菌“能分解廣泛存在于植物纖維中的半纖維素”,因此若要將這種大腸桿菌分離出來(lái),應(yīng)將它們接種在只含半纖維素而無(wú)其他碳源的選擇培養(yǎng)基上。2.下列是某同學(xué)分離產(chǎn)脲酶菌的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),不合理的是()A.選擇農(nóng)田或公園土壤作為樣品分離目的菌株B.在選擇培養(yǎng)基中需添加尿素作為唯一氮源C.適當(dāng)稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落D.可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產(chǎn)脲酶菌株答案:D3.測(cè)定土壤中細(xì)菌數(shù)量一般選用1×104、1×105和1×106倍稀釋的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng),而測(cè)定真菌的數(shù)量一般選用1×102、1×103和1×104倍稀釋,其原因是()A.細(xì)菌個(gè)體小,真菌個(gè)體大B.細(xì)菌易稀釋,真菌不易稀釋C.細(xì)菌在土壤中數(shù)量比真菌多D.隨機(jī)的,沒(méi)有原因答案:C解析:土壤中的微生物大約70%~90%是細(xì)菌,真菌的數(shù)量要比細(xì)菌少。樣品的稀釋度越高,在平板上生成的菌落數(shù)目就越少。在實(shí)際操作中,通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng),以保證獲得菌落數(shù)為30~300、適于計(jì)數(shù)的平板,所以細(xì)菌的稀釋倍數(shù)要高于真菌的稀釋倍數(shù)。4.用稀釋涂布平板法來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)時(shí),通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)就能推測(cè)出樣品中的活菌數(shù)。原因是()A.平板上的一個(gè)菌落就是一個(gè)細(xì)菌B.菌落中的細(xì)菌數(shù)是固定的C.此時(shí)的一個(gè)菌落一般來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌D.此方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)一定與活菌的實(shí)際數(shù)目相同答案:C解析:菌落和細(xì)菌不是一個(gè)概念,A項(xiàng)錯(cuò)誤。菌落中的細(xì)菌數(shù)并不固定,其數(shù)目與培養(yǎng)時(shí)間和培養(yǎng)條件有關(guān),B項(xiàng)錯(cuò)誤。當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)單菌落,來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌,C項(xiàng)正確。當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí),平板上觀察到的只是一個(gè)菌落,所以此方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)可能比活菌的實(shí)際數(shù)目少,D項(xiàng)錯(cuò)誤。5.某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為1×106的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上的菌落數(shù)的平均值為275,那么每克樣品中的菌數(shù)是(涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1mL)()A.2.75×108個(gè) B.2.75×109個(gè)C.275個(gè) D.27.5個(gè)答案:B解析:根據(jù)計(jì)算公式“每克樣品中的菌數(shù)=(C÷V)×M”,則題中每克樣品中的菌數(shù)=(275÷0.1)×1×106=2.75×109(個(gè))。6.在進(jìn)行“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)時(shí),對(duì)獲得純化的可以分解尿素的細(xì)菌單菌落影響最大的一項(xiàng)操作是()A.制備浸出液的土壤取自土壤的表層B.涂布前涂布器未在酒精燈外焰上灼燒滅菌C.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中添加尿素作為氮源D.接種操作者的雙手未用酒精棉進(jìn)行消毒答案:C解析:制備浸出液的土壤取自土壤的表層對(duì)獲得純化的可以分解尿素的細(xì)菌單菌落影響不大,A項(xiàng)不符合題意。涂布器未在酒精燈外焰上灼燒滅菌可能會(huì)造成污染,但對(duì)獲得純化的分解尿素的細(xì)菌的單菌落影響不大,B項(xiàng)不符合題意。該培養(yǎng)基必須以尿素為唯一的氮源,不能使用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基或在其中添加尿素作為氮源,該操作對(duì)實(shí)驗(yàn)影響最大,C項(xiàng)符合題意。接種操作者的雙手未用酒精棉進(jìn)行消毒,可能會(huì)造成污染,但對(duì)獲得純化的分解尿素的細(xì)菌的單菌落影響不大,D項(xiàng)不符合題意。7.下列有關(guān)稀釋涂布平板法操作的敘述,錯(cuò)誤的是()A.若稀釋梯度以10倍為單位,當(dāng)用移液管取1mL原始菌液進(jìn)行稀釋時(shí),其余試管內(nèi)的無(wú)菌水應(yīng)為9mLB.每次用滅菌后的移液管取菌液前,要先將菌液混勻C.在涂布過(guò)程中,每次變換涂布的方向和位置時(shí),應(yīng)對(duì)涂布器進(jìn)行灼燒滅菌D.將菌液涂布在培養(yǎng)基表面時(shí),為涂布均勻,應(yīng)及時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿答案:C解析:稀釋梯度以10倍為單位時(shí),如果溶液總量為10mL,需用移液管將1mL原始菌液移入盛有9mL無(wú)菌水的試管中,依次類(lèi)推即可得到所需稀釋倍數(shù)的菌液,A項(xiàng)正確。每次用滅菌后的移液管取菌液前,要先將菌液混勻,B項(xiàng)正確。在涂布前,應(yīng)將沾有少量酒精的涂布器在火焰上灼燒,待酒精燃盡后冷卻8~10s,用涂布器將菌液均勻涂布在培養(yǎng)基的表面,涂布結(jié)束后,應(yīng)對(duì)涂布器進(jìn)行灼燒滅菌,以防污染環(huán)境和感染操作者,C項(xiàng)錯(cuò)誤。涂布時(shí),可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿,使菌液分布均勻,D項(xiàng)正確。8.某化工廠的污水池中含有一種有害且難以降解的有機(jī)化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基,成功篩選出能高效降解化合物A的細(xì)菌(目的菌)。實(shí)驗(yàn)的主要步驟如下圖所示,請(qǐng)回答下列問(wèn)題。(1)培養(yǎng)基中加入化合物A的目的是,這種培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。(2)“目的菌”生長(zhǎng)所需的氮源和碳源是來(lái)自培養(yǎng)基中的。實(shí)驗(yàn)需要振蕩培養(yǎng),由此推測(cè)“目的菌”的代謝類(lèi)型是。

(3)在上述實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中,獲得純凈“目的菌”的關(guān)鍵是。

(4)轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)基時(shí),常采用平板劃線法進(jìn)行接種,此過(guò)程中所用的接種工具是,操作時(shí)采用的滅菌方法是。

(5)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行滅菌處理后才能倒掉,這樣做的目的是。

(6)某同學(xué)計(jì)劃統(tǒng)計(jì)污水池中“目的菌”的總數(shù),他選用1×104、1×105、1×106倍稀釋的稀釋液進(jìn)行平板劃線,每種稀釋液都設(shè)置了3個(gè)培養(yǎng)皿。從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的角度看,還應(yīng)設(shè)置的一組對(duì)照實(shí)驗(yàn)是,此對(duì)照實(shí)驗(yàn)的目的是。

答案:(1)篩選目的菌選擇(2)化合物A異養(yǎng)需氧型(3)防止外來(lái)雜菌污染(4)接種環(huán)灼燒滅菌(5)防止造成環(huán)境污染(6)不接種的空白培養(yǎng)基檢驗(yàn)培養(yǎng)基滅菌是否合格能力提升1.用紙片擴(kuò)散法測(cè)定某病原菌對(duì)各種抗生素敏感性的實(shí)驗(yàn),是在某病原菌均勻分布的平板上,鋪設(shè)含有不同種抗生素的紙片后進(jìn)行培養(yǎng)。下圖所示為培養(yǎng)的結(jié)果,其中抑菌圈是在紙片周?chē)霈F(xiàn)的透明區(qū)域。下列分析正確的是()A.在圖示固體培養(yǎng)基上可用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種病原菌B.未出現(xiàn)抑菌圈可能是病原菌與抗生素接觸后發(fā)生抗性變異C.形成的抑菌圈較小的原因可能是微生物對(duì)藥物較敏感D.不同抗生素在平板上的擴(kuò)散速度不同會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響答案:D解析:題圖所示固體培養(yǎng)基上采用的接種方法應(yīng)是稀釋涂布平板法,A項(xiàng)錯(cuò)誤。病原菌發(fā)生抗性變異應(yīng)在與抗生素接觸之前,B項(xiàng)錯(cuò)誤。微生物對(duì)藥物較敏感形成的抑菌圈應(yīng)較大,C項(xiàng)錯(cuò)誤。紙片所含的藥物吸取平板中的水分溶解后,便不斷向紙片周?chē)鷧^(qū)域擴(kuò)散,不同抗生素在平板上的擴(kuò)散速度不同會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響,D項(xiàng)正確。2.平板劃線法和稀釋涂布平板法是純化微生物的兩種常用方法。下列關(guān)于這兩種方法的描述,正確的是()A.都要將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋B.平板劃線法是將不同稀釋度的菌液通過(guò)接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作C.稀釋涂布平板法是將不同稀釋度的菌液倒入液體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)的操作D.都會(huì)在培養(yǎng)基表面形成單菌落答案:D解析:平板劃線法不需要進(jìn)行梯度稀釋,平板劃線法是將菌液通過(guò)接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作進(jìn)行稀釋,A、B兩項(xiàng)錯(cuò)誤。稀釋涂布平板法需要將不同稀釋度的菌液涂布到固體培養(yǎng)基的表面,C項(xiàng)錯(cuò)誤。3.下列關(guān)于土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)的敘述,正確的是()A.只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素B.篩選分解尿素的細(xì)菌時(shí),應(yīng)以尿素作為培養(yǎng)基中唯一的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)C.統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)目一般用平板劃線法D.在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,若指示劑變藍(lán),則表明篩選到了能分解尿素的細(xì)菌答案:A解析:篩選分解尿素的細(xì)菌時(shí),采用的是以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基,B項(xiàng)錯(cuò)誤。統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)目一般用稀釋涂布平板法,C項(xiàng)錯(cuò)誤。酚紅指示劑變紅,則表明篩選到了能分解尿素的細(xì)菌,D項(xiàng)錯(cuò)誤。4.下圖是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細(xì)菌的過(guò)程。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。(1)圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以為唯一氮源;鑒別培養(yǎng)基還需添加酚紅作指示劑,產(chǎn)脲酶細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)一段時(shí)間后,其菌落周?chē)闹甘緞⒆兂缮?/p>

(2)在3個(gè)細(xì)菌培養(yǎng)基平板上,均接種稀釋倍數(shù)為1×105的土壤樣品溶液0.1mL,培養(yǎng)一段時(shí)間后,平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為156、178和191。該過(guò)程采取的接種方法是,每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)為×108個(gè);與顯微鏡直接計(jì)數(shù)法相比,此計(jì)數(shù)方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)較(填“多”或“少”)。

答案:(1)尿素紅(2)稀釋涂布平板法1.75少解析:(2)該過(guò)程采取的接種方法為稀釋涂布平板法。利用稀釋涂布平板法對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí),應(yīng)選擇菌落數(shù)為30~300的平板,因此平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落平均數(shù)為(156+178+191)÷3=175(個(gè)),每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)為(175÷0.1)×1×105=1.75×108(個(gè))。顯微鏡直接計(jì)數(shù)法能將死菌計(jì)算在內(nèi),而稀釋涂布平板法只能計(jì)數(shù)活菌(只有活菌才能在平板上生長(zhǎng)),故一般顯微鏡直接計(jì)數(shù)法要比稀釋涂布平板法的結(jié)果大。5.回答下列有關(guān)微生物培養(yǎng)與應(yīng)用的問(wèn)題。組分含量KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2gFeCl30.1gX1.0g維生素微量瓊脂15.0g水定容至1000mL(1)上表是篩選異養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基配方。從物理性質(zhì)上看,該培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基,其中成分X除了為目的菌提供能源外,還能提供。制備該培養(yǎng)基的一般操作順序是配制培養(yǎng)基→→,對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的常用方法是。

(2)下圖A、B是微生物培養(yǎng)的兩種接種方法,圖C、D是培養(yǎng)后的效果。某同學(xué)接種培養(yǎng)后獲得圖C所示效果,則其采用的接種方法是[]([]中填“A”或“B”);由圖C所示效果推測(cè)接種時(shí)可能的失誤操作是