微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的基本操作1.器具的滅菌2.培養(yǎng)基的配制3.培養(yǎng)基的滅菌4.倒平板5.微生物接種6.恒溫箱中培養(yǎng)7.菌種的保存1微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的基本操作1.器具的滅菌1培養(yǎng)基配制原理

微生物的生長(zhǎng)繁殖時(shí)需要各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，一般包括水、無(wú)機(jī)鹽、碳源和氮源，有的還需要少量特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（生長(zhǎng)因子）根據(jù)微生物的種類(lèi)和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌x擇不同的原料配制不同培養(yǎng)基。本課題使用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，它是一種應(yīng)用最廣泛和最普遍的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，也稱(chēng)普通培養(yǎng)基。它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl，其中牛肉膏為細(xì)菌提供碳源和能源，磷酸鹽；蛋白胨主要提供氮源；而NaCl提供無(wú)機(jī)鹽。在配制固體培養(yǎng)基時(shí)還要加入瓊脂作凝固劑。在培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)要用稀酸或稀堿將pH調(diào)至中性或微堿性，以利于細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖。2培養(yǎng)基配制原理微生物的生長(zhǎng)繁殖時(shí)需要各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)精品資料3精品資料3你怎么稱(chēng)呼老師？如果老師最后沒(méi)有總結(jié)一節(jié)課的重點(diǎn)的難點(diǎn)，你是否會(huì)認(rèn)為老師的教學(xué)方法需要改進(jìn)？你所經(jīng)歷的課堂，是講座式還是討論式？教師的教鞭“不怕太陽(yáng)曬，也不怕那風(fēng)雨狂，只怕先生罵我笨，沒(méi)有學(xué)問(wèn)無(wú)顏見(jiàn)爹娘……”“太陽(yáng)當(dāng)空照，花兒對(duì)我笑，小鳥(niǎo)說(shuō)早早早……”44四、實(shí)驗(yàn)操作(一)制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(用于培養(yǎng)細(xì)菌)5四、實(shí)驗(yàn)操作(一)制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(用于培養(yǎng)細(xì)菌)51．計(jì)算、稱(chēng)量2．溶化3．調(diào)pH：pH7．64．過(guò)濾：這一步可以省去。5．分裝：分裝過(guò)程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過(guò)三角燒瓶容積的一半為宜。6．加塞7．包扎操作步驟61．計(jì)算、稱(chēng)量操作步驟68．滅菌:將50ml培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌15～30min。將培養(yǎng)皿用舊報(bào)紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170℃下滅菌2h。78．滅菌:7倒平板技術(shù)1.將滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手撥出棉塞。12348倒平板技術(shù)1.將滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有倒平板技術(shù)2.右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過(guò)火焰。12349倒平板技術(shù)2.右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過(guò)火焰。12349倒平板技術(shù)12343.用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10~

20mL)倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。10倒平板技術(shù)12343.用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大倒平板技術(shù)12344.等待平板冷卻凝固，大約需5~10min。然后，將平板倒過(guò)來(lái)放置，使皿蓋在下，皿底在上。11倒平板技術(shù)12344.等待平板冷卻凝固，大約需5~10min

9．倒平板:待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí)，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見(jiàn)課本）2d后觀(guān)察平板，無(wú)雜菌污染才可用來(lái)接種.10．無(wú)菌檢查：將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培養(yǎng)24—48小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。129．倒平板:12平板劃線(xiàn)的操作方法13平板劃線(xiàn)的操作方法131414151516161717181819192020212122222323一旦劃破，會(huì)造成劃線(xiàn)不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無(wú)法形成規(guī)矩的菌落，菌落會(huì)沿著劃破處生長(zhǎng)，會(huì)形成一個(gè)條狀的菌落。24一旦劃破，會(huì)造成劃線(xiàn)不均勻，難以達(dá)到分離單菌一旦劃破，會(huì)造成劃線(xiàn)不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無(wú)法形成規(guī)矩的菌落，菌落會(huì)沿著劃破處生長(zhǎng)，會(huì)形成一個(gè)條狀的菌落。25一旦劃破，會(huì)造成劃線(xiàn)不均勻，難以達(dá)到分離單菌26262727注意：

1、移液管需要經(jīng)過(guò)滅菌。操作時(shí)，試管口和移液管離火焰1~2cm處.28注意：28微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的恒溫培養(yǎng)29微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的恒溫培養(yǎng)29微生物的恒溫培養(yǎng)30微生物的恒溫培養(yǎng)30斜面制備培養(yǎng)基配制分裝滅菌擺放斜面31斜面制備培養(yǎng)基配制31接種的注意點(diǎn)：（1）用接種環(huán)取菌種之前、每次劃線(xiàn)之前和劃線(xiàn)結(jié)束都要進(jìn)行灼燒滅菌，灼燒后要在酒精燈附近冷卻后再操作；（2）劃線(xiàn)時(shí)不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基，如果采用分段劃線(xiàn)法操作從第二次操作應(yīng)總在上一次劃線(xiàn)末端開(kāi)始，首尾區(qū)不能相連；（3）操作必須始終在酒精燈火焰旁進(jìn)行。32接種的注意點(diǎn)：（1）用接