第二節(jié)動物細胞工程二動物細胞融合技術(shù)與單克隆抗體1.什么是動物細胞融合技術(shù)？2.單克隆抗體是如何制備的？在臨床上有哪些應(yīng)用？問題情境1.視頻中了解到針對新冠肺炎真正的特效藥是什么？2.這種特效藥有著怎樣的特點呢？舊知回顧【思考】（1）什么細胞能產(chǎn)生抗體？（2）能產(chǎn)生抗體的細胞能否大量增殖？（3）什么細胞具有無限增殖的能力？（4）能否培養(yǎng)出一種能分泌抗體且增殖能力強的細胞？漿細胞漿細胞沒有增殖能力腫瘤細胞動物細胞融合技術(shù)動物細胞融合技術(shù)實例1：自然條件受精作用1970年人工條件下的人-鼠細胞融合實驗實例2：人工誘導(dǎo)實例3：多核細胞患肺結(jié)核病人的病理組織中觀察到多核細胞動物細胞融合技術(shù)使兩個或多個動物細胞結(jié)合形成一個細胞的技術(shù)。形成具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息的雜交細胞

細胞膜具有一定的流動性1.概念：4.結(jié)果：2.原理：3.誘導(dǎo)方式物理法：電融合法化學(xué)法：聚乙二醇（PEG)生物法：滅活病毒誘導(dǎo)法與植物原生質(zhì)體融合的方法相同——動物細胞融合特有動物細胞融合技術(shù)病毒顆粒滅活的病毒顆粒粘附于細胞表面細胞膜融合細胞核融合形成雜交細胞在病毒的作用下細胞膜打開滅活病毒誘導(dǎo)細胞融合的原理【拓展】滅活：指用物理或化學(xué)手段使病毒失去感染能力（不感染細胞），但是并不破壞病毒的抗原結(jié)構(gòu)（誘導(dǎo)細胞融合）。動物細胞融合技術(shù)5.過程：動物細胞融合動物細胞培養(yǎng)細胞膜的流動性細胞增殖雜種細胞經(jīng)第一次有絲分裂兩個核才融合細胞融合完成的標志:細胞核融合成一個核動物細胞融合技術(shù)6.意義：7.應(yīng)用：突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能。至今，種間、屬間、科間，甚至動物和植物之間的細胞融合都已獲得成功。研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。為制造單克隆抗體開辟了新途徑。動物細胞融合技術(shù)植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較動物細胞融合過程植物體細胞雜交過程去壁融合植物組織培養(yǎng)原理融合前處理誘導(dǎo)融合的方法意義和用途單克隆抗體及其應(yīng)用任務(wù)：嘗試構(gòu)建制備新冠病毒單克隆抗體的流程問題1：如何獲得能產(chǎn)生新冠病毒抗體的B淋巴細胞？注射特定抗原（新冠病毒）抗原不純抗體不純?nèi)毕荩寒a(chǎn)量低、純度低，

且抗體的特異性差、靈敏度低。不能無限增殖產(chǎn)生大量抗體動物體內(nèi)抗原刺激漿細胞抗體篩選單一B細胞增殖分化單克隆抗體及其應(yīng)用解決方案1975年，米爾斯坦和科勒設(shè)計了一個極富創(chuàng)造性的試驗方案：米爾斯坦【英國】科勒【德國】可大量增殖的融合細胞可大量增殖的骨髓瘤細胞B淋巴細胞單克隆抗體(由克隆細胞產(chǎn)生的單一抗體）單克隆抗體一個B淋巴細胞細胞群抗體克隆單克隆抗體及其應(yīng)用注射特定抗原免疫小鼠培養(yǎng)小鼠骨髓瘤細胞B淋巴細胞骨髓瘤細胞多種細胞多種雜交瘤細胞能分泌所需抗體的雜交瘤細胞選擇培養(yǎng)基篩選克隆化培養(yǎng)專一抗體檢測注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖體外培養(yǎng)單克隆抗體融合單克隆抗體及其應(yīng)用目的是獲得能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞

從脾臟中獲取B淋巴細胞幾種細胞類型？單克隆抗體及其應(yīng)用骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合選擇培養(yǎng)基雜交瘤細胞B淋巴細胞骨髓瘤細胞（A）合成DNAD途徑S途徑D途徑氨基喋呤A、B、AA、BB、AB1、AB2、AB3既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生抗體單克隆抗體及其應(yīng)用怎樣篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細胞？克隆化培養(yǎng)抗體檢測第二次篩選(抗原-抗體雜交技術(shù))能分泌所需抗體的雜交瘤細胞陽性細胞雜交瘤細胞(多種)多孔細胞培養(yǎng)板陽性孔單克隆抗體及其應(yīng)用體外培養(yǎng)體內(nèi)或體外培養(yǎng)能分泌所需抗體的雜交瘤細胞注射到小鼠腔易于控制培養(yǎng)條件（如無需提供無菌環(huán)境等），操作簡單，成本較低規(guī)模小，產(chǎn)量少可大規(guī)模培養(yǎng)，大量生產(chǎn)需要人為控制培養(yǎng)條件，成本相對較高單克隆抗體及其應(yīng)用單克隆抗體篩選二雜交細胞雜交瘤細胞體外或體內(nèi)培養(yǎng)篩選一骨髓瘤細胞

誘導(dǎo)融合分泌特異抗體的雜交瘤細胞雜交瘤細胞群提取已免疫的B淋巴細胞動物細胞融合技術(shù)動物細胞培養(yǎng)技術(shù)既能大量繁殖又能產(chǎn)生專一抗體特異性強靈敏度高可大量制備注射抗原單克隆抗體及其應(yīng)用（1）作為診斷試劑——最廣泛應(yīng)用準確、高效、簡易、快速（如利用同位素標記的單克隆抗體，可定位診斷腫瘤、心血管畸形等）單克隆抗體及其應(yīng)用（2）運載藥物生物導(dǎo)彈=單克隆抗體+藥物，治療腫瘤）(“生物導(dǎo)彈”—單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭)優(yōu)點：位置準確、療效高、副作用小單克隆抗體及其應(yīng)用（3）直接用于治療疾病實例：利妥昔單抗(美羅華)是一種針對CD20抗原