22.4%,在低收入國家以及中低收入國家中膿毒癥總體住院病死率為32.6%[1]。具有病理機(jī)制復(fù)雜、高異質(zhì)性等特點(diǎn)[2-3]。近年來，聚焦外周血炎癥因子、種病理生理調(diào)節(jié)過程[4-5]。本文聚焦外泌體新型檢測技術(shù)方法，以及外泌體1外泌體的最新認(rèn)識(shí)被視為“細(xì)胞廢物”。20世紀(jì)90年代，細(xì)胞外囊泡被重新定義為細(xì)胞間信息交粒等[5];其中，外泌體是一種被廣泛研究的細(xì)胞外囊泡。外泌體包含蛋白質(zhì)、cleicacid,RNA)等多種物質(zhì)，在細(xì)胞間信息交流中發(fā)揮重要作用[7]。與疾病發(fā)生發(fā)展緊密相關(guān)，逐步被開發(fā)為重要的生物標(biāo)志物[8]。基于外泌體免疫治療等精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域[9-11]。2外泌體新型檢測方法 2.1流式細(xì)胞術(shù)(flowc常規(guī)流式細(xì)胞不能用于外泌體分析。通過安裝pH響應(yīng)性二酰脂耦聯(lián)聚合物(diacyllipid-conjugatedpolymer,DLP),使外泌體在中性緩制時(shí)，即可使用FCM對外泌體進(jìn)行直接分析[13]。范澤華等[14]通過加入腸創(chuàng)建了腸淋巴液外泌體相關(guān)提取技術(shù)。基于磁珠及特殊抗體的外泌體分析FCM2.2核磁共振波譜法(nuclearmagneticresonancespectroscopy,N體內(nèi)動(dòng)力學(xué)，具有無創(chuàng)、無輻射暴露的特點(diǎn)。Ullah等[15]用擴(kuò)散有序波譜(diffusionorderedspectroscopY,DOSY)核磁共振方法，通過順序超速離心法和體積排阻色譜法(sizeexclusionchromatography性進(jìn)行1HDOSYNMRS分析發(fā)現(xiàn)，其可以檢測出1～500nm外泌體的細(xì)胞外納2.3納米顆粒微流體法：微流體技術(shù)是指在微觀尺寸下控制、操作和檢測 析，具有高通量、快速、穩(wěn)定和微量分析的優(yōu)勢。此外，適配體(Aptamer)一類寡核苷酸序列或短肽，可與相應(yīng)配體進(jìn)行高親和力及強(qiáng)特異性結(jié)合。Zhou等[17]利用微流體系統(tǒng)結(jié)合CD63和PTK7特異性適配體的方法，無需樣本預(yù)處理便可在20min中實(shí)現(xiàn)107～108粒/mL外泌體的快速分離。2.4納米等離子系統(tǒng)法(intravesicularnanoplasmonicsystem,iNPS):利用等離子體芯片捕獲外泌體裂解物中的分子靶標(biāo)，再結(jié)合納米顆粒標(biāo)記檢測[18]。微流體技術(shù)與iNPS結(jié)合，使用低成本陽極氧化鋁薄膜可制備金納帶蛋白、生物標(biāo)志物(CD9、CD81、CD63等)共定位等[12]。Kabe等[20]在明了全自動(dòng)外泌體分析儀。Yokose等[21]聯(lián)合使用凝集素芯片和全自動(dòng)外泌體分析方法發(fā)現(xiàn)，胰腺癌患者血清中存在0-多糖修飾的外泌體含量升高，其是定量比傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked優(yōu)勢，也有局限性(表1),具體取決于特定應(yīng)用所需的外泌體分離規(guī)模、純度檢測技術(shù)通過安裝pH響應(yīng)性二酰脂耦聯(lián)聚合物使單個(gè)外泌體轉(zhuǎn)通過擴(kuò)散有序波譜(DOSY)核磁共振方法，根據(jù)外泌體的粒利用微通道中添加的兩根絕緣柱之間產(chǎn)生不均勻電介電泳力，實(shí)現(xiàn)對外泌體的捕獲以及觀察區(qū)分外泌在微流體系統(tǒng)中使用核酸適配體修飾的微通道，通過選擇CD610?~10°粒/mL然后用金納米顆粒標(biāo)記以進(jìn)行信號(hào)放大3.1免疫炎癥反應(yīng)失調(diào)：膿毒癥的突出病理特征之一是免疫反應(yīng)失調(diào)，主RNA,miRNA),與免疫炎癥反應(yīng)指標(biāo)白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、核轉(zhuǎn)錄因子-kB(nuclearfactor-kB,NF-kB)、白細(xì)胞介素-10(interleukin-10,IL-10)和Toll樣受體信號(hào)通路有關(guān)，也參與樹突狀細(xì)胞(dendriticcell,DC)成熟過程[22]。在另一項(xiàng)探討膿毒癥相關(guān)急性腎損傷(sepsis-inducedacutekidneyinjury,SAKI)的研究中，金翠等[23]發(fā)現(xiàn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體(exosomesderivedfrombonemesenchymal stemcell,BMSC-Exo)對脂多糖誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞活性下降以及細(xì)胞炎癥反應(yīng)均有一定的保護(hù)作用。黃俊鴻等[24]對超速離心法提取的膿毒癥患者以及健血漿外泌體干預(yù)T細(xì)胞后其早期活化指標(biāo)以及T細(xì)胞中程序性死亡受體1(prog以上研究提示膿毒癥發(fā)生發(fā)展中各種免疫細(xì)胞分泌外泌體是介導(dǎo)免疫炎癥反應(yīng)RNA,多與炎癥反應(yīng)以及氧自由基代謝有關(guān)[22]。Janiszewski等[26]研究發(fā)現(xiàn)，血小板來源外泌體中還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(reducednicoNA(circularRNA,circRNA)等，經(jīng)轉(zhuǎn)錄因子E2相關(guān)因子2-血紅素氧合酶1(nuclearfactorE2-relatedfactor2-hemeoxygenase-1,Nrf2-HO-1)、毒癥器官損傷[27-28]。 coagulation,DIC)是膿毒癥的嚴(yán)重并發(fā)癥。膿毒癥相關(guān)DIC患者中性粒細(xì)胞geassociatedmolecularpatterns,DAMP),有促凝作用[29-30]。血小板經(jīng)脂多糖刺激產(chǎn)生外泌體或膿毒性休克患者外泌體含高遷移率族蛋白B1(high以通過自噬途徑促進(jìn)中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)(neap,NET)形成，是膿毒癥及相關(guān)器官損傷的主要因素[31]。外泌體作為信號(hào)3.4多組學(xué)數(shù)據(jù)分析揭示膿毒癥患者血清外泌體析3位健康者和9例膿毒癥患者外周血清外泌體的多組學(xué)數(shù)據(jù)特征發(fā)現(xiàn)，外泌體存在354種蛋白，195種mRNA,82種長鏈非編碼RNA(longnon-codingRNA,lncRNA)和55種miRNA差異性表達(dá)；其功能途徑涉及“細(xì)胞因子風(fēng)暴”、補(bǔ)體SAKI的重要原因[32]。膿毒癥發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，極具異質(zhì)性，多組學(xué)數(shù)據(jù)為外4.1外泌體在膿毒癥診斷、評估中的應(yīng)用：Im等[33]利用ELISA分離膿毒癥患者血漿外泌體，其總體水平與膿毒癥嚴(yán)重程度(膿毒癥：204mg/L,嚴(yán)重膿毒癥：525mg/L,膿毒性休克802mg/L,P<0.01)及序貫器官衰竭評分 (sequentialorganfailureassessment,SOFA)呈正與患者28d、90d病死率增加有關(guān)，可作膿毒癥預(yù)后生物標(biāo)志物。此外，施芬和羅漢清[34]通過對比分析膿毒癥患兒與健康兒童外周靜脈血外泌體中1nc4.2外泌體在膿毒癥治療中的作用：外泌體在膿毒癥干預(yù)和治療方面的應(yīng)徐瑩等[36]通過盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(cecalligationandpuncture,CLP)面對SAKI有一定的保護(hù)作用。Li等[37]發(fā)現(xiàn)，當(dāng)腫瘤患者合并膿毒癥時(shí)，其5總結(jié)與展望Committee.AmericanCollegeofChestPhysicians/SocietyofCrvesicles:packagesdevelopmentofsepsis-inducedcoagulopathy[J].ofexosomebiomarkerforearlAdvancedmicro-/nanotechnologiesforexoswoundhealingusingexosome-mediatedtargetingofNF-kBc-Relofhighperformancemagneticnanobeadstobiologicalsensingingofexosomes:breakingthroughthesizelimitofexo[15]UllahMS,Zhivonitkoicationofextracellularnanoparticlesubsusingdielectrophoretic-enhancedPDMS-basedmicrofluidics[J].fahighlysensitivedeviceforcountingthenumberofdiseextracellularvesicles:aspecificfrompatientswithsepticshockconveymiRNAsrel急性腎損傷的體外研究[J].同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2022,43(2):157-164.DOI:10.12289/j.issn.1008-0392.21396.121430-20230228-00NAD(P)Hoxidaseactivity:anovelvascularredoxpathway[J].s-derivedexosomespreventsaCircRTN4/miR-497-5p/MG53pathway[J].