4T/XXXXXXX—XXXX兩面針5種成分含量測(cè)定高效液相色譜一測(cè)多評(píng)法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了一測(cè)多評(píng)法測(cè)定兩面針中木蘭花堿、橙皮苷、鹽酸血根堿、氯化兩面針堿、白屈菜紅堿等5種化學(xué)成分的含量的原理、試劑、儀器、色譜條件、測(cè)定步驟、結(jié)果計(jì)算和精密度。本文件適用于兩面針?biāo)幉闹心咎m花堿、橙皮苷、鹽酸血根堿、氯化兩面針堿、白屈菜紅堿含量的測(cè)2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。3術(shù)語和定義下列術(shù)語和文件適用于本文件。3.1一測(cè)多評(píng)法Quantitativeanalysisofmulti-componentsbysingle-marker通過中藥有效成分間存在的內(nèi)在函數(shù)關(guān)系和比例關(guān)系,通過測(cè)定中藥中某個(gè)代表性成分的含量，依據(jù)相對(duì)校正因子可計(jì)算出該中藥中其他多種待測(cè)成分的含量，使其計(jì)算值與實(shí)測(cè)值符合定量方法學(xué)要求的一種多指標(biāo)同步質(zhì)量控制方法。3.2相對(duì)校正因子Relativecorrectionfactor是一種修正因子，它的主要作用是修正測(cè)量值，以獲得更準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，提高研究質(zhì)量，它的計(jì)算公式為某組分的絕對(duì)校正因子與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的絕對(duì)校正因子之比。4原理在同時(shí)測(cè)定兩面針多個(gè)指標(biāo)質(zhì)量成分的含量時(shí)，以兩面針中典型成分氯化兩面針堿做內(nèi)參物，分別求出內(nèi)參物與木蘭花堿、橙皮苷、鹽酸血根堿、白屈菜紅堿等其它4個(gè)待測(cè)成分間的相對(duì)校正因子，并把相對(duì)校正因子作為一個(gè)常數(shù)用于相應(yīng)成分的含量測(cè)定。5試劑5.1氯化兩面針堿：分析標(biāo)準(zhǔn)品，HPLC≥98%，化學(xué)式C21H18ClNO4，分子量383.83。5.2甲醇：色譜純。5.3乙腈：色譜純。6儀器6.1高效液相色譜儀：含四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、二極管陣列檢測(cè)器、柱溫箱和程序升溫控制系統(tǒng)。6.2分析天平：精度0.1mg。5T/XXXXXXX—XXXX6.3超聲波清洗儀：功率≥500W。7色譜條件AgilentEclipseC18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相20%乙腈-0.1%甲酸（三乙胺調(diào)節(jié)pH至4.5）；體積流量1.0mL/min；柱溫30℃;檢測(cè)波長273、284nm；進(jìn)樣量10μL。8測(cè)定步驟8.1制備樣品溶液精密稱定兩面針?biāo)幉姆勰健?.5mm）1.0g，置于具塞錐形瓶中，加6mL的70%甲醇置于超聲波清洗儀中超聲提取30min，重復(fù)3次，合并提取液，用70%甲醇定容至50mL量瓶中，用0.45μm微孔濾膜過濾，即得供試樣品溶液。8.2制備標(biāo)準(zhǔn)品溶液用分析天平精密稱取氯化兩面針堿標(biāo)準(zhǔn)品適量，用70%甲醇溶解并定容至25mL，制備成0.05mg/mL的對(duì)照品貯備液，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩Ｈ缓髲馁A備液中分別精確量取5、2、1、0.4mL，用70%甲醇定容至10mL，即得0.025、0.01、0.005、0.002mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。8.3繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線分別吸取10μL濃度為0.05、0.025、0.01、0.005、0.002mg/mL的氯化兩面針堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液依次注入高效液相色譜儀，按“7”的色譜條件，測(cè)定氯化兩面針堿、木蘭花堿、橙皮苷、鹽酸血根堿、白屈菜紅堿的峰面積As、A1、A2、A3和A4，以氯化兩面針堿峰面積（As）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度（Cs）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。9結(jié)果計(jì)算9.1測(cè)定氯化兩面針堿含量吸取10μL樣品溶液注入高效液相色譜儀，按第“7”點(diǎn)的色譜條件，測(cè)定氯化兩面針堿的峰面積（As根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出氯化兩面針堿濃度（Cs）。9.2計(jì)算木蘭花堿、橙皮苷、鹽酸血根堿、白屈菜紅堿的含量9.2.1根據(jù)一測(cè)多評(píng)法確定木蘭花堿、橙皮苷、鹽酸血根堿、白屈菜紅堿的相對(duì)校正因子f1、f2、f3、f4分別為0.376、0.210、0.825、1.301。9.2.2根據(jù)公式計(jì)算木蘭花堿濃度（C1）：C1=f1×Cs×A1/As。9.2.3根據(jù)公式計(jì)算橙皮苷濃度（C2）：C2=f2×Cs×A2/As。9.2.4根據(jù)公式計(jì)算鹽酸血根堿濃度（C3