第一節(jié)細胞因子檢測概述一、細胞因子類型與作用特點二、細胞因子檢測特點與方法細胞因子檢測概述第1頁由非神經(jīng)—內(nèi)分泌細胞產(chǎn)生一大類與免疫應(yīng)答活動親密相關(guān)低分子蛋白與多肽。細胞因子細胞因子檢測概述第2頁細胞因子類型與作用特點1、細胞因子分類2、細胞因子作用特點細胞因子檢測概述第3頁以生物學(xué)作用進行劃分分類白細胞介素（Interleukin）——IL-1、IL-2、……IL-18干擾素（Interferon）——IFN-、IFN-、IFN-腫瘤壞死因子（Tumornecrosisfactor）——TNF-、TNF-集落刺激因子（Colony-stimulatingfactor）——M-CSF、G-CSF轉(zhuǎn)化生長因子（Transforminggrowthfactor）——TGF-趨化因子（Chemokine）——IL-8、GROs、MCP-1生長因子（Growthfactor）——EGF、FGF、IGF、PDGF細胞因子檢測概述第4頁TNFsILsIFNsTGFsChemokinesCSFs各類細胞因子間關(guān)系細胞因子檢測概述第5頁1、旁分泌（paracrine）、自分泌（autocrine）性2、多源與同源性3、高效性4、多效性（pleiotropy）5、豐余性（redundancy）6、協(xié)同性7、拮抗性8、網(wǎng)絡(luò)性細胞因子檢測概述第6頁細胞因子細胞因子細胞因子受體細胞因子受體細胞因子自分泌與旁分泌性細胞因子檢測概述第7頁

IL-2IFN-TNF-細胞因子同源性與多源性IFN-

T細胞T細胞NK細胞細胞因子檢測概述第8頁IL-4Th細胞肥大細胞Th細胞B細胞細胞因子多效性細胞因子檢測概述第9頁Th細胞B細胞細胞因子豐余性IL-2IL-4IL-5細胞因子檢測概述第10頁Th細胞B細胞細胞因子協(xié)同性IL-4IL-5細胞因子檢測概述第11頁Th2細胞B細胞細胞因子拮抗性Th1細胞IL-4IFN-

細胞因子檢測概述第12頁細胞因子網(wǎng)絡(luò)性IL-3、IL-5、IL-4、IL-6、GM-CSFTNFTGFIL-1IFNIL-1IFNTNFIL-1TGFIFNIL2IL-4IFNIL2IL-4IL-5IL-6TNFIFNIL-1TGFTNFIL-1IFNIL-5GM-CSFG-CSFM-GSFTNFTNFIL-1TGFIL-1IL-6GM-CSFG-CSFM-GSFIL-1IL-6IL-1IL-6GM-CSFG-CSFM-GSFIFN內(nèi)皮細胞成纖維細胞TB細胞因子檢測概述第13頁細胞因子檢測特點與方法1、檢測特點2、檢測方法

細胞因子檢測概述第14頁細胞因子檢測特點免疫原性較弱樣品含量低樣品含有時效性生物效應(yīng)特異性差細胞因子檢測概述第15頁細胞因子檢測方法免疫學(xué)檢測方法——抗原性檢測細胞生物學(xué)檢測方法——生物活性檢測分子生物學(xué)檢測方法——基因表示檢測細胞因子檢測概述第16頁

第二節(jié)細胞因子檢測方法與原理一、細胞因子細胞生物學(xué)檢測二、細胞因子免疫學(xué)檢測三、細胞因子分子生物學(xué)檢測細胞因子檢測概述第17頁細胞因子細胞生物學(xué)檢測1、檢測方法與原理2、檢測中操作注意關(guān)鍵點

細胞因子檢測概述第18頁檢測方法與原理細胞增殖或增殖抑制試驗細胞病變抑制試驗細胞毒試驗細胞趨化試驗細胞因子檢測概述第19頁濾膜：計數(shù)受趨化細胞趨化因子細胞趨化試驗原理示意細胞因子檢測概述第20頁檢測中操作注意關(guān)鍵點靶細胞選擇與培養(yǎng)檢測標(biāo)本制備顯示檢測結(jié)果細胞因子檢測概述第21頁靶細胞選擇與培養(yǎng)1、對所測細胞因子有特異敏感性2、易培養(yǎng)、保留、生物學(xué)特征穩(wěn)定3、有良好生長狀態(tài)4、種屬適配細胞因子檢測概述第22頁各類細胞因子檢測慣用靶細胞細胞因子試驗系統(tǒng)干擾原因IL-1D10（M）增殖法IL-2、IL-4EL-4（M）增殖法IL-4A352（H）增殖抑制法IL-2CTLL（M）增殖法IL-4IL-3KG-1（H）增殖法TF-1（H）增殖法GN-CSF、IL-5IL-6、EPOIL-4CTLL（M）增殖法IL-2IL-5BCL-1（M）增殖法IL-4細胞因子檢測概述第23頁各類細胞因子檢測慣用靶細胞細胞因子試驗系統(tǒng)干擾原因IL-6B9（M）增殖法IL-4、IL-11BM60（H）增殖法IL-7Clone-IXN/2b（M）增殖法IL-8中性粒細胞（M、H）趨化法GM-CSFTF-1（H）增殖法IL-3、IL-5IL-6、IL-5TNF/L929（M、H）細胞毒法IFNwish（H）病變保護法IFN-、IFN-L929（M）病變保護法IFN-、IFN-

細胞因子檢測概述第24頁檢測標(biāo)本準(zhǔn)備1、分離特定產(chǎn)生細胞2、對產(chǎn)生細胞進行誘導(dǎo)、激活3、選擇適當(dāng)搜集時間細胞因子檢測概述第25頁顯示檢測結(jié)果1、細胞增殖狀態(tài)顯示：放射性核素摻入法、胞內(nèi)酶活性顯示法活細胞染色法細胞熒光測定法2、細胞毒或細胞病變狀態(tài)顯示活細胞染色法胞內(nèi)酶活性顯示法DNA斷片測定法細胞因子檢測概述第26頁細胞因子免疫學(xué)檢測分泌型細胞因子檢測細胞內(nèi)細胞因子檢測細胞因子檢測概述第27頁ELISPOT細胞因子檢測概述第28頁細胞內(nèi)細胞因子檢測技術(shù)激活膜抗原標(biāo)識細胞內(nèi)細胞因子標(biāo)識細胞因子檢測概述第29頁細胞因子分子生物學(xué)檢測原位雜交技術(shù)Rt-PCR技術(shù)細胞因子檢測概述第30頁

第三節(jié)慣用細胞因子檢測方法一、IL-2檢測二、IFN-γ檢測三、TNF檢測細胞因子檢測概述第31頁待檢樣品（細胞上清）指示細胞（CTLL-2）按不一樣稀釋度加入37oC，16-20小時加入3HTdR（1-5

Ci）37oC，4-6小時搜集細胞測定白細胞介素-2測定示意圖細胞因子檢測概述第32頁待檢樣品（細胞上清）指示細胞（L929）按不一樣稀釋度加入37oC，4小時37oC，24-48小時棄取上清，加入VSV觀察細胞病變（鏡檢或比色）干擾素測定示意圖細胞因子檢測概述第33頁腫瘤壞死因子測定示意圖待檢樣品（細胞上清）指示細胞（L929）按不一樣稀釋度加入37oC，24小時棄取上清，洗滌加入結(jié)晶紫染液，洗滌加入細胞裂解液，比色細胞因子