的載玻片放到烘干臺(50℃)上，烘干(30min)。也可在37℃溫箱中過夜干燥。干燥后的組織切片在室溫下保存，待檢。4.4伊紅-蘇木素溶液(H.E)染色步驟4.4.3二甲苯：無水乙醇(1:1)溶液；2min~5min。4.4.695%乙醉：2min~5min。4.4.780%乙醇：2min~5min。4.4.870%乙醇：2min~5min。4.4.10蘇木素染色液13min(可根據(jù)染液放置時間調(diào)整)。4.4.12鹽酸乙醇：3s~10s(根據(jù)染色的深度進(jìn)行調(diào)整)。4.4.1570%乙醇：2min。4.4.1680%乙醇；2min。4.4.17伊紅乙醇染液；1min~2min。4.4.1895%乙醇：2mim。4.4.21無水乙醇1二甲苯(1:1)溶液：2min。4.5免疫組織化學(xué)(IHC)染色步驟4.5.1將被檢切片放人自動染色機(jī)上脫蠟(二甲苯10min、二甲苯10min)、脫二甲苯[二甲蘋：無水乙醇(1:1)溶液3min、無水乙醇3min,無水乙醇3min,95%乙醇3min,80%乙醇3min,70%乙醇4.5.2將組織切片移至二級水中，在微波爐中加熱煮沸20min。加熱時，要保證切片一直浸在水中。加熱后，在空氣中自然冷卻2min?；虬亚衅腩A(yù)熱至37℃并含有蛋白牌K的緩沖液(5μR/mL)中并消化15min,4.5.3PBS洗5min。4.5.4將切片放入含1%過氧化氫的甲醇溶液中，10min。4.5.6切片上滴加含0.1%胰酶的緩沖液，濕盒中室溫作用15min~20min。4.5.7自來水洗1min,再用PBS洗兩次，每次5min。4.5.8在切片上滴加1%正常馬血清，濕盒中反應(yīng)20min。4.5.9用紙巾蘸掉馬血清。4.5.10切片上滴加第一抗體(FH11,終濃度稀釋至5μg/mL),在相同的另一張切片上滴加正常鼠血清或PBS,濕盒中作用37℃作用2h或4℃過夜。4.5.11PBS洗三次，每次5min。4.5.12切片上滴加標(biāo)記有生物素的抗鼠血清(第二抗體),濕盒中室溫作用1h。4.5.13PBS洗三次，每次5min。4.5.14切片上滴加親和素標(biāo)記的鏈霉卵白素，濕盒中室溫作用30min。4.5.15PBS洗5min。4.5.16滴加AEC顯色劑，室溫作用15min~20min。4.5.17PBS洗5min,再用自來水洗1min。4.5.18蘇木素染色液復(fù)染2min。4.5,19自來水洗至不掉色。4.5.20甘油乙婦乙醇水溶液封片。4.5.21光學(xué)顯微鏡下觀察。5結(jié)果判定5.1蘇木素-伊紅染色感染癢病的羊腦組織在光學(xué)顯微鏡下的病理變化是以中樞神經(jīng)系統(tǒng)海綿狀變化和較廣泛的星形膠質(zhì)細(xì)胞肥大及增生為特征。病變是非炎性的，呈兩側(cè)對稱分布，5.2兔疫組織化學(xué)感染癢病的羊腦組織在光鏡下可見紅褐色的PrP*(癢病異常PrP蛋白)陽性反應(yīng)物。5(規(guī)范性附錄)試劑的配制A.1蘇木素染色液乙液：3g甲明礬+100mL.二級水混合甲液和乙液，再加人10mL冰乙酸，14d后再用。A.2伊紅染色液0.5g~1g伊紅(醇溶)+100mL95%乙醇。A.3胰酶溶液稱取8.94gTris-HC1,0.3g胰腳，溶解在300mL二級水中。A.4蛋白酶K溶液TrisHCl(1mol/L,pH8,0)2,5mL,氧化鈣(CaCl)(0.1mol/