Ⅱ組冠狀病毒非結(jié)構(gòu)蛋白1內(nèi)保守序列LLRKXGXKG的功能研究的開題報(bào)告開題報(bào)告題目：Ⅱ組冠狀病毒非結(jié)構(gòu)蛋白1內(nèi)保守序列LLRKXGXKG的功能研究一、選題背景和意義近年來，冠狀病毒引起的疾病不斷發(fā)生，如2003年SARS，2012年中東呼吸綜合癥和2019年新冠肺炎。這些疾病的病原病毒均為冠狀病毒，其非結(jié)構(gòu)蛋白1（NSP1）是冠狀病毒感染機(jī)制中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，與其它冠狀病毒蛋白質(zhì)相關(guān)，影響RNA病毒基因表達(dá)，進(jìn)而影響宿主細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡等生理過程。該研究的意義在于：通過對(duì)Ⅱ組冠狀病毒NSP1內(nèi)的保守序列LLRKXGXKG的功能研究，可深入了解冠狀病毒感染機(jī)制中NSP1的作用機(jī)制，在病毒抗體和防治措施開發(fā)方面具有重要意義。二、研究?jī)?nèi)容和方法1.研究?jī)?nèi)容（1）NSP1保守序列LLRKXGXKG的生物學(xué)意義。（2）采用細(xì)胞共轉(zhuǎn)染及免疫共沉淀技術(shù)鑒定NSP1保守序列LLRKXGXKG與其它重要蛋白質(zhì)如RNA結(jié)合蛋白(RB)等之間的相互作用。（3）構(gòu)建2個(gè)實(shí)驗(yàn)材料：NSP1保守序列LLRKXGXKG的突變體（在K214進(jìn)行點(diǎn)突變）和野生型對(duì)照。（4）通過細(xì)胞共轉(zhuǎn)染及凋亡、細(xì)胞周期、表達(dá)水平等多維度檢測(cè)，比較兩種實(shí)驗(yàn)材料對(duì)細(xì)胞生理過程的影響。2.研究方法（1）源自于標(biāo)準(zhǔn)冠狀病毒株MHV-A59的NSP1序列，進(jìn)行保守性分析，確定LLRKXGXKG保守序列并進(jìn)行功能的生物學(xué)分析和調(diào)控機(jī)制研究。（2）將NSP1序列高效克隆到真核表達(dá)質(zhì)粒，共轉(zhuǎn)染目標(biāo)細(xì)胞，用控制質(zhì)粒空載體作為空白對(duì)照。（3）利用Co-IP技術(shù)檢測(cè)保守序列與RB等重要蛋白質(zhì)間的相互作用關(guān)系，而后構(gòu)建2個(gè)實(shí)驗(yàn)材料：NSP1保守序列LLRKXGXKG的突變體和野生型對(duì)照。（4）利用多種技術(shù)手段進(jìn)行表達(dá)水平、凋亡、細(xì)胞周期等生理過程方面檢測(cè)，比較兩種實(shí)驗(yàn)材料之間的差異。三、預(yù)期結(jié)果和成果簡(jiǎn)介通過對(duì)Ⅱ組冠狀病毒NSP1內(nèi)保守序列LLRKXGXKG的研究，預(yù)計(jì)可探究NSP1在病毒感染機(jī)制中的作用機(jī)制，可望為未來針對(duì)冠狀病毒的抗體和防治措施開發(fā)提供重要的參考和幫助。本次研究可期望建立在NSP1序列中保守性分析和生物學(xué)分析的基礎(chǔ)上，得出LLRKXGXKG序列在冠狀病毒感染中發(fā)揮的關(guān)鍵作用，并可深刻了解其與RB、凋亡、細(xì)胞周期等方面的聯(lián)系，為病毒防治提供問題的正向解決方案。四、研究計(jì)劃安排（1）資料查找和閱讀，準(zhǔn)備開題報(bào)告及相關(guān)材料。（2）NSP1序列高效克隆到真核表達(dá)質(zhì)粒，共轉(zhuǎn)染目標(biāo)細(xì)胞，用控制質(zhì)?？蛰d體作為空白對(duì)比。（3）運(yùn)用Co-IP技術(shù)檢測(cè)保守序列與RB等重要蛋白質(zhì)間的相互作用關(guān)系。（4）構(gòu)建2個(gè)實(shí)驗(yàn)材料：NSP1保守序列LLRKXGXKG的突變體（在K214進(jìn)行點(diǎn)突變）和野生型對(duì)照。（5）通過多種技術(shù)手段進(jìn)行表達(dá)