實(shí)驗(yàn)十生物材料石蠟包埋實(shí)驗(yàn)

（洗滌、脫水、透明）石蠟切片的主要步驟：一、取材二、固定三、洗滌四、脫水五、透明六、透蠟與包埋七、切片八、貼片九、染色十、封藏一、實(shí)驗(yàn)原理：1、洗滌洗滌是洗去滲入細(xì)胞內(nèi)部的固定液。因?yàn)椴牧现械墓潭ㄒ河械臅恋K染色；有的會發(fā)生沉淀或結(jié)晶；有的會繼續(xù)與組織作用，使材料變壞等。因此要徹底洗凈固定液。2、脫水:

材料經(jīng)洗滌后含有大量的水分，必須用脫水劑脫盡里面的水分，有利于材料的透明和制片的保存。因?yàn)樗謺共牧戏纸?，而且透明劑與水是不相混合的，因此只有在完全無水的情況下，透明劑才能完全透入到組織當(dāng)中。3、透明：是指利用透明劑既可與脫水劑相混合又能和石蠟相混合的性質(zhì)，將脫水劑替換出來，使石蠟?zāi)茼樌M(jìn)入材料中，達(dá)到不同程度的透明狀態(tài)。常用的脫水劑：

酒精、丙酮、甘油、正丁醇、二氧乙環(huán)等。常用的透明劑：

二甲苯、苯、甲苯、氯仿、香柏油等。透明劑都是石蠟的溶劑，絕大多數(shù)不能與水混合。二、實(shí)驗(yàn)步驟1、洗滌

材料自固定液中取出，放入指形管或廣口瓶，加入半管水，用紗布將管口扎住，置于水槽內(nèi)，進(jìn)行流水沖洗。注意水流不宜太急，以免沖壞材料。流水沖洗時間一般需要12～24小時。沖洗時應(yīng)注意以下事項(xiàng)：

水溶性的固定劑：需用流水沖洗。酒精溶劑的固定劑：應(yīng)用同濃度的酒精浸洗。含苦味酸的固定劑：（苦味酸與甲醛混合液除外），須用70％酒精浸洗，以免水洗后固定作用消失。福爾馬林固定劑：除長期存放外，一般可以不沖洗。

含有升汞固定劑：組織經(jīng)固定后應(yīng)在沖洗劑－水或酒精中加碘以洗去組織內(nèi)汞的沉淀。含有鉻酸的固定劑：組織在沖洗時最好置于暗處，以免產(chǎn)生沉淀或使組織硬化而影響制片。

2、脫水材料自低濃度至高濃度的酒精進(jìn)行脫水。一般經(jīng)50%、70%、80%、95%直至純酒精。每級停留約30分鐘至1小時。如需過夜，應(yīng)停留在70%酒精中。脫水必須徹底，否則不易透明，甚至使透明劑內(nèi)出現(xiàn)白色混濁現(xiàn)象。脫水時的注意事項(xiàng)：①脫水必須要在有瓶蓋的器皿中進(jìn)行，尤其是高濃度乙醇很容易吸收空氣中的水份。②組織由低濃度向高濃度的乙醇轉(zhuǎn)移時，以避免組織過度收縮和過度硬化。要用吸水紙吸干余液，以免將水份帶入。③在低濃度酒精中，每級停留時間不宜太長，否則易使組織變軟，助長材料的解體。④在高濃度或純酒精中，每級停留時間不宜過長，否則會使組織變脆，影響切片。3、透明透明也是漸次由低濃度至高濃度進(jìn)行，要求每級更換動作要迅速，蓋好相應(yīng)的蓋子。材料先在純酒精和二甲苯各半的混合液浸15～30分鐘，再轉(zhuǎn)入純二甲苯中透明（至透明為止），一般15～30分鐘。若透明過程中，材料周圍出現(xiàn)白色霧狀，說明材料中的水未被脫凈，應(yīng)退回純酒精中重新脫水，然后再透明。總的透明時間不宜超過3h。具體操作步驟：取材(鼠肝、脾、腎、心3mm)

→固定(10％福爾馬林，12～24h)

↙洗滌↙

脫水→50%乙醇，30min→70%乙醇,30min

→80%乙醇，30min

→95%乙醇,30min

→無水乙醇，30min

透明→50%純乙醇﹢50%二甲苯，15min

→純二甲苯，30min（出現(xiàn)霧狀，重新脫水)

三、實(shí)驗(yàn)用品1、器材：水浴鍋、透蠟格、包埋機(jī)、石蠟?zāi)Ｗ印窈?、鑷子、方盤等。2、試劑：各級酒精（50、70、80、95、100％）、二甲苯、石蠟3