HbA1c檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化1糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024前言4個系統的正確度和精密度驗證如何使檢驗結果更準確HbA1c檢測的標準化展望提綱2糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024中國擁有全球最大的糖尿病人群：9240萬PrevalenceofDiabetesamongMenandWomeninChina中國糖尿病流行病學調查中日友好醫(yī)院楊文英組織3糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024與糖尿病相關的死亡21%心臟病14%截肢或致命性外周血管疾病43%12%卒中HbA1c1%微血管并發(fā)癥，如腎病和失明37%降低HbA1c與降低并發(fā)癥的風險密切相關

UKPDS

StrattonIM,etal.UKPDS35.BMJ.2000;321:405-12.微小改善可明顯減少并發(fā)癥

4糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024HbA1c與平均血糖正相關0501001502002503003504004505004567891011121314%HbA1cGlucose(mg/dL)MBG=35.6xA1C–77.3n=1439,r=0.82DiabetesCare2002;25(2)275-8HbA1c：糖尿病人較長期的血糖監(jiān)控指標5糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024HbA1c在糖尿病中的作用

評價血糖控制的“金標準”臨床意義：HbA1c不受短期的血糖濃度波動所影響，反映近2～3個月血糖控制的總體水平。HbA1c可作為糖尿病患者長期血糖控制的監(jiān)測指標。與糖尿病慢性并發(fā)癥的發(fā)生及發(fā)展有密切關系，影響患者長期預后。血糖控制達標的糖尿病患者每半年檢查一次HbA1c。血糖控制未達標或治療方案調整后，糖尿病患者應每3個月檢查一次HbA1c。TheDiabetesControlandComplicationsTrialResearchGroup.NEnglJMed1993;329:977-86UKProspectiveDiabetesStudyGroup.Lancet1998;352:837-536糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/20242010年ADA糖尿病診治指南

增加糖化血紅蛋白（HbA1c)≥6.5%作為糖尿病的診斷標準

source：7糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/20242011-WHO將HbA1c作為糖尿病輔助診斷指標

HbA1c成功轉型－－“治療監(jiān)控”到“診斷篩查”8糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024……因HbA1c6.5％的切點是否適合我國人群尚未在我國人群中驗證，且我國HbA1c檢測方法的標準化程度不夠，測定的儀器和質量控制尚不能符合目前糖尿病診斷標準的要求，因此目前暫不推薦應用HbA1c診斷糖尿病

----中國血糖監(jiān)測臨床應用指南（２０１１年版）

9糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024準確度(accuracy):一次測量的結果與被測量真值的接近程度。正確度(trueness):真實度，大量測量的均值與真值的接近程度。精密度(precision):在規(guī)定條件下獲得的獨立測量結果之間的接近程度。重復性(repeatability)中間精密度(intermediateprecision)重現性(reproducibility)實驗室內精密度（within-labprecision)其反義概念可以用數字表示，分別為不確定度、偏差標準差或變異系數。準確度、正確度、精密度陳文祥、申子瑜、郭健、楊振華,臨床檢驗量值溯源中的重要術語與概念及有關問題中華檢驗醫(yī)學雜志2005年2月第28卷第2期10糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024

日本東曹（TOSOH）HLC-723G7糖化血紅蛋白測定儀及其配套試劑及校準品（簡稱G7）。日本愛科來（Arkray）ADAMSTMA1cHA-8160

糖化血紅蛋白測定儀及其配套試劑及校準品（簡稱8160）。美國伯樂（Bio-Rad）D-10糖化血紅蛋白測定儀及其配套試劑和校準品（簡稱D10）。日立7170A自動生化分析儀/羅氏（Roche）免疫比濁法HbA1c試劑盒及校準品（簡稱Roche）。德國Eppendorf2-20ul和200-1000ulResearch系列加樣器。一、分析系統和設備11糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024A1c檢測方法分類電荷差異離子層析法：HPLC

電泳法結構特異性親和層析法免疫法標準化不同方法測定結果的可比性12糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心2011年HbA1c室間質評項目的實驗室中，離子交換高效液相色譜和免疫比濁兩種方法使用最為普遍，實驗室所占比例分別超過45%（280/610）和25%（156/610）。13糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024CAP室間質評()

71%參與實驗室采取免疫學方法檢測HbA1c2007年1995年免疫比濁法離子交換層析法親和層析法電泳法2011年14糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024美國伯樂質控品（LyphochekDiabetesControl，批號：33810，凍干粉，兩個濃度水平），用于驗證各系統的精密度；復溶混勻后分裝，-80℃保存。JCTLM認證的標物JCCRM411-2（日本JDSLot4，新鮮冰凍血），該標物共有五個水平，取其中的水平二和水平四用于各系統的正確度驗證，標物于-80℃保存，開蓋后在4℃下保存，2天內用完。二、材料

15糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024所有系統在實驗前進行一次校準，在實驗過程中不再對各系統進行校準。每天實驗時須測定高低兩個濃度水平的室內質控樣本，只有室內質控在控時當天的數據方可接受。三、儀器校準和質控16糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024樣本分析方式采用稀釋模式：按照各系統說明書要求的稀釋比例，使用各系統的稀釋液對樣本進行稀釋混勻后，再上機測定。每天在一個實驗批內對兩個濃度水平的樣本進行3次重復測定，重復5天；四、精密度驗證17糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024五、正確度驗證選取JCCRM411-2的水平2和水平4，每天在一個實驗批內，對這兩個樣本進行2次重復測定，重復5天。本實驗中精密度和正確度驗證實驗在一批內同時進行測定。計算所有系統每個樣本測定結果的均值。六、95%置信區(qū)間（CI）的計算采用總誤差=偏倚±1.96×SD的公式來計算偏差的95%CI。七、評判標準1.批內不精密度CV為1.5%，實驗室內不精密度CV為2%。2.95%CI在±0.75%HbA1c范圍內。18糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024測定系統水平1水平2均值%批內CV實驗室內CV均值%批內CV實驗室內CV81605.120.280.468.750.260.28D105.440.781.179.520.360.60G75.610.460.469.500.360.83Roche5.361.021.178.760.541.504個系統的精密度驗證結果（單位：%）19糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024系統測定均值（n=10）標準物質NGSP值偏倚（%HbA1c）由標準物質IFCC值導出的NGSP值偏倚（%HbA1c）81605.535.59-0.065.55-0.02D105.840.250.29G76.000.410.45Roche5.41-0.18-0.144個系統測定水平2的結果（%）20糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024系統測定均值（n=10）標準物質NGSP值偏倚（%HbA1c）由標準物質IFCC值導出的NGSP值偏倚（%HbA1c）81609.559.73-0.189.340.21D109.860.130.52G79.940.210.6Roche9.39-0.340.054個系統測定水平4的結果（%）21糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024系統水平2

水平4實驗室內SDBias95%Cl下限95%Cl上限

實驗室內SDBias95%Cl下限95%Cl上限81600.024-0.06-0.11-0.010.025-0.18-0.23-0.13D100.0640.250.120.380.0570.130.020.24G70.0260.410.360.460.0790.210.060.36ROCHE0.063-0.18-0.30-0.06

0.132-0.34-0.60-0.084個系統測定標準物質偏倚的95%置信區(qū)間(Cl)計算結果（%HbA1c）22糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024好的檢驗系統廠家：溯源保證實驗室：性能驗證實驗室質量保證分析前變異室內質控、室間質評分析后如何使檢驗結果準確23糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024檢測方法高效液相色譜法(離子交換法、親和法)低壓液相法免疫比濁法酶法POCT檢測系統儀器、試劑、校準品SOP、人員、樣本好的？檢測系統24糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024AffinityMajorHbA1cLaboratory

Instruments離子交換HPLCHPLCSource：施小美Immunoassay25糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024PointofCareDevicesDCA2000(Immunoassay)

In2it

(Affinity)A1CNow(immunoassay&chemistry)Source：施小美26糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024HbA1c方法的選擇標準質量標準化不精密度正確度色譜圖抗干擾能力穩(wěn)定性其他因素成本樣本量維修與技術支持Source：施小美27糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024廠家擔負的責任優(yōu)化儀器的性能保證校準品的傳遞和樣本檢測結果與IFCC、DCCT/NGSP的可比性獲得NGSP認證/IFCC認證確保色譜柱/試劑的不同批號間的穩(wěn)定性為客戶提供產品的標準化操作流程（SOP）為操作人員提供培訓/教育Source：施小美28糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024世面常見的HPLC方法獲得NGSP認證；在國內操作不正規(guī)多數免疫方法獲得NGSP認證；部分層析方法獲得NGSP認證；SFDA注冊產品？量值溯源29糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024AbbottArchitectSystem/Aeroset組Bio-RadHPLC組TOSOHG7組DrewDS5/Bio-RadDiastat組其它儀器組PrimusHPLC組NycoCardReaderII組ARKRAYHA-8160組BeckmanSynchronSystems組Hitachi系列組OlypusAUSystems組RocheCOBAS,Roche/Hitachi組中國實驗室的常用儀器（按字母排列）30糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024“國產器械”關鍵字“糖化血紅蛋白試劑盒”的內容列表，共有55條記錄；無一通過NGSP認證。民族產業(yè)

-Leavemuchtobedesired31糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024NGSP&IFCC溯源性證書32糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024EQAS比對計劃

同期中國用戶不同廠家儀器間的變異系數比較部分儀器國內外差異系數差距明顯！33糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024檢測場所：檢驗科/內分泌科實驗/門診所用設備與試劑：進口產品/國產產品所有的檢測方法在中國均有使用有SFDA證書即可銷售，沒有一個強制要求的標準化實驗室不規(guī)范化操作（如少做質控/甚至校準）……分析國內外差距原因34糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024(1)目前應采用結合NGSP標準化的HbA1c結果來估計平均血糖水平；(2)實驗室應該采用離子交換高效液相色譜法檢測HbA1c，但需參加衛(wèi)生管理部門的質控；３）HbA1c仍然是糖尿病管理的關鍵指標，要盡量避免HbA1c參考范圍的變化。因HbA1c6.5％的切點是否適合我國人群尚未在我國人群中驗證，且我國HbA1c檢測方法的標準化程度不夠，測定的儀器和質量控制尚不能符合目前糖尿病診斷標準的要求，因此目前暫不推薦應用HbA1c診斷糖尿病。中國血糖監(jiān)測臨床應用指南（２０１１年版）中華醫(yī)學會糖尿病學分會35糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024室內質控的結果CV<3%(推薦)實驗室內變異水平36糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024不同CV對A1C分析的影響AnalyticalCV%6.5%A1C7.0%A1C8.0%A1C26.4-6.66.9-7.17.9-8.136.3-6.76.8-7.27.8-8.256.2–6.86.7–7.37.7-8.386.0–7.06.5-7.57.5-8.537糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/20242.美國研究數據HbA1C(%)截點U.S人群（百萬）

人數變化67.1195.8%6.15.4125.0%6.24.379.2%6.34.379.2%6.43.545.8%6.52.40.0%6.62.2-8.3%6.72-16.7%6.82-16.7%6.91.7-29.2%71.5-37.5%ClinicalChemistry56:14–6(2010)38糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024HbA1c（%）批號1室內質控變異系數分析39糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024HbA1c（%）批號2室內質控變異系數分析40糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024關于POCTSixofEightHemoglobinA1cPoint-of-CareInstrumentsDoNotMeettheGeneralAcceptedAnalyticalPerformanceCriteriaErnaLenters-Westra1,2*andRobbertJ.Slingerland1,2ClinicalChemistry56:144–52(2010)41糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024行業(yè)標準《糖化血紅蛋白分析儀》規(guī)范化操作42糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024方法精密度要求：室內3%；血液采集：合適的采血管；樣本保存：按照說明書要求，長期保存需在-70℃；室內質控：每批分析都應同時測定至少2個不同水平（高、低值）的質控物；質控品分裝冷凍保存，-70℃可保存一年以上。參加室間質評結果報告：NGSP(%),IFCC(mmol/mol)參考區(qū)間：驗證規(guī)范化操作43糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024應包括：樣本類型、采集、運輸、保存方式；儀器操作維護程序；儀器校準程序；……SOP易于獲取，并被操作人員熟知；由操作人員編寫并由實驗室負責人批準；SOP44糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024均值和SD：自己實驗室的均值；CV：控制在3%以下；室內質控由操作人員完成，不可由廠家越俎代庖；制定合適的失控判斷規(guī)則：1-3S；失控后處理程序：糾正措施；……記錄室內質控45糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024校準間隔；校準物定值的溯源性；……記錄校準46糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024參加室間質評；視同臨床樣本對待；室間質評47糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024糖化血紅蛋白測定標準化48糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024從無序到有序49糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024特點定義明確的被測量：HbA1c特異的測定HbA1c的參考方法高度純化的一級標準物質國際參考實驗室網絡不適用于常規(guī)實驗室使用，僅用于標準化IFCC參考方法50糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024各個標準與IFCC之間的轉換及數值差異(%)IFCC%HbA1cJDS%HbA1c2.03.64.35.66.47.68.69.610.811.6NGSP%HbA1c4681012JDS/JSCC=0.927*IFCC+1.73NGSP=0.915*IFCC+2.15Sweden=0.989*IFCC+0.8851糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024IFCC/DCMMasterEquationsStudy NGSP JDS SwedenMarrakech y=0.926x+2.14y=0.934x+1.76y=1.008x+0.90Chicago y=0.926x+2.05y=0.926x+1.67y=0.941x+1.09Kyoto-1 y=0.906x+2.21y=0.920x+1.78 y=1.002x+0.78Kyoto-2 y=0.912x+2.17y=0.943x+1.68y=0.968x+1.15Barcelona-1 y=0.905x+2.23y=0.912x+1.78y=0.964x+0.95Barcelona-2 y=0.897x+2.21y=0.916x+1.70y=0.963x+0.92LA-1 y=0.901x+2.24y=0.880x+1.95y=0.949x+1.10LA-2 y=0.907x+2.23y=0.911x+1.73y=0.997x+0.91Orlando-1 y=0.913x+2.15y=0.892x+1.84y=0.961x+1.01Orlando-2 y=0.924x+2.07y=0.928x+1.63y=0.998x+0.88Amsterdam-1y=0.890x+2.28y=0.866x+1.89y=0.968x+0.89

MEy=0.915x+2.15y=0.927x+1.73y=0.989X+0.88ClinicalChemistry2004;50:166-174.52糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024IFCC和NGSPIFCC是全球公認的HbA1c標準IFCC參考方法不適合常規(guī)臨床實驗室使用實驗室報告的“IFCC”數值來自于經IFCC2nd

參考物質校準的常規(guī)方法，仍無法避免各種干擾因素.大多數(不是全部)IFCC認可方法是經過NGSP認證的方法IFCC和NGSP每年做兩次樣本比對53糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024IFCC和NGSPNGSP更實用商品化方法通過IFCC2nd

參考物質（凍干全血）的校準溯源到IFCC與IFCC參考方法的溯源性和不確定度只通過文件證明，并沒有對各個方法的偏差（Bias）和不確定度的量設定限制54糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024我們需要改變HbA1c數值嗎?IFCC數值比DCCT數值偏低沒有大型臨床研究支持DCCT與日本和瑞典標準共存有大型臨床數據支持55糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/20242009年10月的上述幾大國際組織經過共同討論又得出第二次共識：HbA1c的檢測必須在世界范圍內標準化，包括參照系統和數值報告。IFCC的參考系統是唯一能夠滿足標準化要求的方法。將來HbA1c同時以IFCC單位(mmol/mol)以及衍生的NGSP單位(%)報告，使用IFCC-NGSP換算公式進行轉換。需要確?；鶎犹悄虿F體容易獲得SI(IFCC)和NGSP單位的轉換公式。雜志編輯和出版物建議采用SI(IFCC)和NGSP/DCCT兩個單位共同報告HbA1c。糖化血紅蛋白的標準名稱為HbA1c，在指南或教育材料中也可以簡寫為A1C。此共識一直到2011年有效，將在下次2011年迪拜IDF會議上再次討論

關于HbA1c檢測標準化的第二次共識Meanwhiledecisionshavebeenmadeinseveralcountries:UKandJapanwill,afteratransitionperiod,reportinthenewIFCCunitsonly,andUSwillreportintheoldNGSPunitsandeAG.“Fromordertochaos”56糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024RelationBetweenIFCCNumbersandtheRespectiveNationalDCMsNationalDCMFromIFCCtoDCMFromDCMtoIFCCUSA(NGSP–BioRex70Resin)NGSP=0.09148IFCC+2.152IFCC=10.93NGSP–23.50JAPAN(JDS/JSCCK0500HPLC)JDS=0.09274IFCC+1.724IFCC=10.78JDS–18.59SWEDEN(Mono-S)Mono-S=0.09890IFCC+0.884IFCC=10.11Mono–S-8.94MASTEREQUATIONSClinChem2004;50:16657糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024HbA1cDiagnosticCutoffsHbA1c(NGSP)(%)HbA1c(IFCC)(mmol/mol)≥6.5≥4758糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024我們可以做得更好59糖化血紅蛋白檢測標準化和實驗室操作規(guī)范化5/9/2024LabIDJC01JC02JC03JC04Instrument16.58.110.46.6TOSOHG726.568.1110.416.50ARKRAY816036.48.010.56.5TOSOHG746.47.910.36.4TOSOHG756.37.79.96.3TOSOHG766.27.