病毒病實(shí)驗(yàn)室診斷-病毒的血凝抑制試驗(yàn)(動(dòng)物微生物學(xué)課件)_第1頁
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新城疫血凝與血凝抑制試驗(yàn)1新城疫概述2新城疫血凝試驗(yàn)原理3操作方法雞新城疫腺胃乳頭出血,肌胃黏膜皺襞的脊出血新城疫概述雞新城疫腺胃乳頭出血,肌胃黏膜皺襞的脊出血新城疫概述雞新城疫卵泡出血新城疫概述雞新城疫臨床癥狀新城疫概述病雞呼吸困難,口腔內(nèi)有粘液新城疫概述病雞排綠色稀便新城疫概述新城疫血凝與血凝抑制試驗(yàn)試驗(yàn)原理有些病毒表面有血凝素,如禽流感病毒、新城疫病毒等,能與雞、豚鼠、人等某些動(dòng)物的紅細(xì)胞表面受體結(jié)合,從而出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象,故可以來推測材料中有無該病毒的存在,稱為病毒的血凝現(xiàn)象。試驗(yàn)儀器及材料普通托盤天平、普通離心機(jī)、微型振蕩器(MH-2)、DRAGON微量移液器(0.005~0.05mL)、DRAGON微量移液器(0.1~1mL)、Thermo微量移液器(2~10mL)、板式微量移液器架、96孔V型血凝反應(yīng)板、燒杯、禽用采血器、具蓋塑料離心管、指型離心管、試管架、細(xì)記號(hào)筆、生理鹽水、3.8%檸檬酸鈉溶液、新城疫標(biāo)準(zhǔn)抗原75%酒精棉球、干棉球、標(biāo)簽紙、非免疫公雞等。新城疫血凝與血凝抑制試驗(yàn)操作過程配制1%雞紅細(xì)胞懸液新城疫血凝與血凝抑制試驗(yàn)新城疫血凝與血凝抑制試驗(yàn)血凝試驗(yàn)(HA)血凝試驗(yàn)(HA)結(jié)果判定凡能使雞紅細(xì)胞完全凝集的病毒最高稀釋倍數(shù),稱為該病毒的血凝價(jià)或血凝滴度。新城疫血凝與血凝抑制試驗(yàn)新城疫血凝與血凝抑制試驗(yàn)1新城疫血凝抑制試驗(yàn)原理2試驗(yàn)操作方法3試驗(yàn)結(jié)果判定新城疫血凝與血凝抑制試驗(yàn)試驗(yàn)原理有些病毒,如禽流感病毒、新城疫病毒等,能凝集某種動(dòng)物的紅細(xì)胞,故可以來推測材料中有無該病毒的存在。如有能凝集紅細(xì)胞的病毒,其凝集性可為相應(yīng)的抗體所抑制,這種抑制還有特異性,故病毒的血凝抑制試驗(yàn),可用已知病毒來檢查被檢血清中的相應(yīng)抗體,也可用已知血清來鑒定未知病毒。新城疫血凝與血凝抑制試驗(yàn)試驗(yàn)儀器及材料新城疫血凝與血凝抑制試驗(yàn)新城疫血凝與血凝抑制試驗(yàn)操作過程配制4單位病毒液血凝抑制試驗(yàn)(HI)新城疫血凝與血凝抑制試驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果判定在紅細(xì)胞對(duì)照孔紅細(xì)胞完全沉淀,即呈明顯紐扣狀沉到孔底,并且抗原對(duì)照孔紅細(xì)胞完全凝集于孔壁時(shí)觀察試驗(yàn)結(jié)果,只有當(dāng)陰性血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原對(duì)照的HI滴度不大于2log2,陽性血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原對(duì)照的HI滴度與已知滴度相差在1個(gè)稀釋度范圍內(nèi),并且作用陰、陽性血清都不發(fā)生自凝的情況下,HI試驗(yàn)結(jié)果方判定有效。新城疫血凝與血凝抑制試驗(yàn)新城疫血凝與血凝抑制試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)(HI)結(jié)果判定結(jié)合臨床進(jìn)行結(jié)果的分析一般認(rèn)為雞的免疫臨界水平為1:8(成年)或1:16(雛雞),隨地區(qū)不同而稍有差異。

雞血清HI抗體效價(jià)高于1:16時(shí)可適當(dāng)推遲新城疫免疫的時(shí)間,HI抗體效價(jià)在1:16以下須進(jìn)行新城疫疫苗接疫種,在新城疫流行的地區(qū)或雞場,雞的免疫臨界水平應(yīng)稍提高。新城疫血凝與血凝抑制試驗(yàn)結(jié)合臨床進(jìn)行結(jié)果的分析雞群的HI抗體水平是以抽檢樣品的HI抗體效價(jià)(㏒2)的幾何平均值表示的。如果某雞群的10份樣品中,HI抗體效價(jià)(㏒2)為8的有3份樣品,為7的有5份樣品,為6的有2份樣品,它們的平均值為(8*3+7*5+6*2)/(3+5+2)=7.1平均水平在4(10g2)以上說明該雞群為免疫雞群。新城疫血凝與血凝抑制試驗(yàn)結(jié)合臨床進(jìn)行結(jié)果的分析大型養(yǎng)雞場,每次進(jìn)行抽測時(shí),抽樣率一般不低于0.1%一0.5%,小型雞群,抽樣率應(yīng)有所增加,一般認(rèn)為理想的抽樣率應(yīng)為2.0%。雞群接種新城疫疫苗后,經(jīng)2-3周測血清中的HI抗體效價(jià),若提高2個(gè)滴度以上,表示雞的免疫應(yīng)答良好,疫苗接種成功,若HI抗體效價(jià)無明顯提高,表示免疫失敗。新城疫血凝與血凝抑制試驗(yàn)結(jié)合臨床進(jìn)行結(jié)果的分析若有10%以上的雞群出現(xiàn)11(10g2)以上的高血凝抑制滴度,說明雞群已受新城疫強(qiáng)毒感染。若監(jiān)測雞群的免疫水平,用血凝抑制滴度在4(10g2)的雞群保護(hù)率為50%左右,在4(10g2)以上保護(hù)率達(dá)90-100%,在4(10g2)以下的非免疫雞群保護(hù)率約9%,免疫過的雞群為43%。

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