Biologicalsafetycabinets2022-10-12發(fā)布2025-11-01實施國家市場監(jiān)督管理總局國家標準化管理委員會 I 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4分類 5要求 46試驗方法 8 8檢驗規(guī)則 9隨機文件 10包裝、運輸和儲存 附錄A(規(guī)范性)枯草芽孢桿菌芽孢菌懸液的制備 附錄B(規(guī)范性)噴霧器的選擇和校準 附錄C(規(guī)范性)碘化鉀法 附錄D(規(guī)范性)圓形和矩形管道風(fēng)量的測量 參考文獻 I本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由國家藥品監(jiān)督管理局提出并歸口。1儲存。本文件適用于生物安全柜。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T191包裝儲運圖示標志GB4793.1測量、控制和實驗室用電氣設(shè)備的安全要求第1部分：通用要求GB/T14710醫(yī)用電器環(huán)境要求及試驗方法GB/T16273.1設(shè)備用圖形符號第1部分：通用符號GB/T18268.1測量、控制和實驗室用的電設(shè)備電磁兼容性要求第1部分：通用要求3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。生物安全柜biologicalsafetycabinet;BSC負壓過濾排風(fēng)柜，防止操作者和環(huán)境暴露于試驗過程中產(chǎn)生的生物氣溶膠。生物危險biohazard由生物因子導(dǎo)致的直接或潛在的危險。交叉污染crosscontamination目標物外的物質(zhì)意外進入目標物。生物安全柜防止來自外部的空氣傳播污染物通過前窗操作口進入生物安全柜。生物安全柜內(nèi)部從一側(cè)到另一側(cè)，從后側(cè)到前窗玻璃內(nèi)側(cè)，從高效空氣過濾器或散流罩到工作臺面2的區(qū)域。在生物安全柜工作區(qū)內(nèi)供使用人員操作的區(qū)域，該區(qū)域由生物安全柜制造商根據(jù)人員、產(chǎn)品、交叉污染保護的要求定義。高效空氣過濾器highefficiencyparticulateairfilter;HEPA一種一次性的、具有延伸/皺褶介質(zhì)的干燥型過濾器。特征如下：——剛性外殼包裹皺褶成型的全部濾料；——對于直徑為0.3μm的微粒[如用加熱方法產(chǎn)生的單分散鄰苯二甲酸二辛酯(DOP)煙霧微?；蛳喈?shù)奈⒘過濾效率不低于99.99%;——清潔的過濾器在額定流量下工作時，最大壓降為不大于250Pa;——當用光散射中值尺寸0.7μm、幾何標準偏差2.4的多分散氣溶膠進行掃描測試時，透過率不超過0.01%。來自生物安全柜上方經(jīng)高效空氣過濾器過濾的垂直向下流向工作區(qū)的氣流。從生物安全柜前窗操作口進入生物安全柜的氣流。流速標稱值nominalsetpointvelocities由生產(chǎn)廠家設(shè)定，生物安全柜在正常工作狀態(tài)下的下降氣流和流入氣流流速。前窗操作口開啟后，用于空氣流入的開啟距離。4.1概述生物安全柜根據(jù)氣流及隔離屏障設(shè)計結(jié)構(gòu)分為工級、Ⅱ級、Ⅲ級三個等級。4.2I級生物安全柜I級生物安全柜是有前窗操作口的生物安全柜，操作者可通過前窗操作口在生物安全柜操作區(qū)進行操作。用于對人員和環(huán)境進行保護。前窗操作口向內(nèi)吸入的負壓氣流用以保護人員的安全；排出氣流經(jīng)高效空氣過濾器過濾可保護環(huán)境不受污染。4.3Ⅱ級生物安全柜Ⅱ級生物安全柜是有前窗操作口的生物安全柜，操作者可通過前窗操作口在生物安全柜操作區(qū)內(nèi)進行操作，對操作過程中的人員、產(chǎn)品及環(huán)境進行保護。前窗操作口向內(nèi)吸入的負壓氣流用以保護人員的安全；經(jīng)高效空氣過濾器過濾的垂直氣流用以保護受試樣本；氣流經(jīng)高效空氣過濾器過濾后排出可保護環(huán)境不受污染。Ⅱ級生物安全柜按排放氣流占系統(tǒng)總流量的比例及內(nèi)部設(shè)計結(jié)構(gòu)分為A1、A2、B1、B2四種類型。3a)Ⅱ級A1型生物安全柜的特點：——前窗操作口流入氣流的最低平均流速為0.40m/s;——下降氣流為生物安全柜的部分流入氣流和部分下降氣流的混合空氣，經(jīng)過高效空氣過濾器過濾后送至工作區(qū)； 污染氣流經(jīng)過高效空氣過濾器過濾后可以排到實驗室或經(jīng)生物安全柜的外排接口通過排風(fēng)管道排到大氣中；——生物安全柜內(nèi)所有生物污染部位均處于負壓狀態(tài)或者被負壓通道和負壓風(fēng)系統(tǒng)包圍。Ⅱ級A1型生物安全柜不能用于有揮發(fā)性化學(xué)品和揮發(fā)性放射性核素的試驗。b)Ⅱ級A2型生物安全柜的特點：——前窗操作口流入氣流的最低平均流速為0.50m/s;——下降氣流為部分流入氣流和部分下降氣流的混合空氣，經(jīng)過高效空氣過濾器過濾后送至工作區(qū)；——污染氣流經(jīng)過高效空氣過濾器過濾后可以排到實驗室或經(jīng)生物安全柜的外排接口通過排風(fēng)管道排到大氣中；——生物安全柜內(nèi)所有生物污染部位均處于負壓狀態(tài)或者被負壓通道和負壓通風(fēng)系統(tǒng)包圍。Ⅱ級A2型生物安全柜用于進行以微量揮發(fā)性有毒化學(xué)品和痕量放射性核素為輔助劑的微生物試驗時，應(yīng)連接功能合適的排氣罩。c)Ⅱ級B1型生物安全柜的特點：——前窗操作口流入氣流的最低平均流速為0.50m/s;——下降氣流大部分由未污染的流入氣流循環(huán)提供，經(jīng)過高效空氣過濾器過濾后送至工作區(qū)；——大部分被污染的下降氣流經(jīng)過高效空氣過濾器過濾后通過專用的排氣管道排入大氣中；——生物安全柜內(nèi)所有生物污染部位均處于負壓狀態(tài)或者被負壓通道和負壓通風(fēng)系統(tǒng)包圍。如果揮發(fā)性有毒化學(xué)品或放射性核素隨空氣循環(huán)不影響試驗操作或試驗在生物安全柜的直接排氣區(qū)域進行，Ⅱ級B1型生物安全柜可以用于以微量揮發(fā)性有毒化學(xué)品和痕量放射性核素為輔助劑的微生物試驗。d)Ⅱ級B2型生物安全柜的特點：——前窗操作口流入氣流的最低平均流速為0.50m/s;——下降氣流來自經(jīng)過高效空氣過濾器過濾的實驗室或室外空氣(即生物安全柜排出的氣體不再循環(huán)使用);——流入氣流和下降氣流經(jīng)過高效空氣過濾器過濾后通過排氣管道排到大氣中，不允許回到生物安全柜和實驗室中；——所有污染部位均處于負壓狀態(tài)或者被直接排氣(不在工作區(qū)循環(huán))的負壓通道和負壓通風(fēng)系統(tǒng)包圍。Ⅱ級B2型生物安全柜可以用于以揮發(fā)性有毒化學(xué)品和放射性核素為輔助劑的微生物試驗。4.4Ⅲ級生物安全柜具有全封閉、不泄漏結(jié)構(gòu)的生物安全柜。人員通過與柜體密閉連接的手套在生物安全柜操作區(qū)內(nèi)實施操作。生物安全柜內(nèi)對實驗室的負壓應(yīng)不低于120Pa。下降氣流經(jīng)高效空氣過濾器過濾后進入生物安全柜。排出氣流經(jīng)兩道高效空氣過濾器過濾后排放到室外。45要求5.1外觀5.1.3焊接應(yīng)牢固，焊接表面應(yīng)光滑。5.2材料5.2.1所有柜體和裝飾材料應(yīng)耐正常的磨損，能經(jīng)受氣體、液體、清潔劑、消毒劑及去污操作等的腐蝕。材料結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，應(yīng)具有強度和防火耐潮能力。5.2.2所有工作區(qū)內(nèi)表面和集液槽應(yīng)使用材料性能不低于300系列不銹鋼的材料制作。5.2.3前窗玻璃應(yīng)使用光學(xué)透視清晰、清潔和消毒時不對其產(chǎn)生負面影響的防爆裂鋼化玻璃、強化玻璃制作，其厚度應(yīng)不小于5mm。5.2.4高效空氣過濾器以及外框應(yīng)能滿足正常使用條件下的溫度、濕度、耐腐蝕性和機械強度的要求，濾材不應(yīng)為紙質(zhì)材料。濾材中可能釋放的物質(zhì)應(yīng)不對人員、環(huán)境和設(shè)備產(chǎn)生不利影響。外框應(yīng)使用有一定剛度、強度的金屬材料制作。5.2.5Ⅲ級生物安全柜的手套應(yīng)采用耐酸堿及符合試驗要求的橡膠材料制成。型生物安全柜的工作區(qū)均應(yīng)采用四面(左右二側(cè)、后部、底部)雙層結(jié)構(gòu)。型生物安全柜和Ⅲ級生物安全柜所有污染部位均應(yīng)處于負壓狀態(tài)或被負壓通道和負壓通風(fēng)系統(tǒng)包圍。5.3.1.2Ⅱ級、Ⅲ級生物安全柜裸露工作區(qū)內(nèi)三面?zhèn)缺诎鍛?yīng)為一體成型結(jié)構(gòu)。內(nèi)表面的拼接處應(yīng)作密封處理。5.3.1.3生物安全柜裸露工作區(qū)內(nèi)表面與外表面的三面壁板間的連接、底部負壓風(fēng)管外壁板與工作區(qū)外壁板間的連接，均應(yīng)密封處理。Ⅲ級生物安全柜柜體需要氣密部分應(yīng)采用連續(xù)焊接。5.3.1.4風(fēng)機/電機維護和高效空氣過濾器應(yīng)易于拆裝、更換。除了風(fēng)機、無孔密封或加套的線路和必要的風(fēng)速傳感器，其他可更換的電路組件不應(yīng)放置在空氣污染區(qū)域。所有通過空氣污染區(qū)域的線路應(yīng)密封，所有的插座應(yīng)提供電路過載保護。插座應(yīng)安裝在工作區(qū)。在用簡單工具可以打開的蓋板內(nèi)的壓力通風(fēng)系統(tǒng)外區(qū)域，需永久貼上一張全部電路組件的接線圖。還需提供關(guān)于起始電流、運行功率和電路要求的安裝說明。5.3.1.5生物安全柜工作區(qū)內(nèi)所有的兩平面交接處的內(nèi)測曲率半徑應(yīng)不小于3mm,三平面交界處的內(nèi)側(cè)曲率半徑應(yīng)不小于6mm。5.3.2I、Ⅱ級生物安全柜前窗操作口前窗操作口的高度標稱值應(yīng)在160mm～250mm范圍內(nèi)。前窗開啟與關(guān)閉應(yīng)輕便，在行程范圍內(nèi)的任何位置不產(chǎn)生卡死現(xiàn)象，不應(yīng)有明顯的左右或前后晃動現(xiàn)象，滑動應(yīng)順暢。在懸掛系統(tǒng)出故障時，滑動前窗的構(gòu)造不應(yīng)脫落，保證操作者的使用安全。應(yīng)具有報警系統(tǒng)和聯(lián)鎖系統(tǒng)以保證工作只能在規(guī)定的前窗操作口高度范圍之內(nèi)進行。滑動前窗及與其貼合的板之間、窗玻璃與框架之間及框架四周的5生物安全柜使用的電機應(yīng)：a)有熱保護裝置，并能在1.15倍額定電壓值的條件下穩(wěn)定地工作。b)可調(diào)速且控制穩(wěn)定，調(diào)速控制器安裝于可拆除或可鎖控面板的背后。調(diào)速器允許的調(diào)速范圍達到適當?shù)臍饬髌胶馑璧恼{(diào)速范圍。單臺Ⅲ級生物安全柜的一側(cè)應(yīng)設(shè)傳遞裝置(傳遞窗或藥液傳遞箱),當兩臺Ⅲ級生物安全柜串聯(lián)使用且具有傳遞物料的需求時，應(yīng)設(shè)具有兩門開/關(guān)聯(lián)鎖的傳遞窗。傳遞窗與相關(guān)連接處應(yīng)密封。Ⅲ級生物安全柜應(yīng)采用固定觀察窗，窗與框架四周的連接處應(yīng)充分密封。窗玻璃與操作手套的連接處應(yīng)保證不泄漏。Ⅱ級和Ⅲ級生物安全柜應(yīng)設(shè)集液槽，用于收集工作區(qū)的潑濺液體；Ⅱ級生物安全柜的集液槽下應(yīng)設(shè)一個排污閥。Ⅲ級生物安全柜應(yīng)在操作面上設(shè)有可伸到肘部并便于更換的手套，手套應(yīng)適合于手套連接口的直徑和形狀。應(yīng)保證從生物安全柜外面更換手套時，舊的手套可以被擠進生物安全柜內(nèi)且新手套可以安裝好，同時風(fēng)機仍在工作。當密閉手套脫落時，柜體連接處的洞口中心風(fēng)速應(yīng)不小于0.7m/s。Ⅲ級生物安全柜應(yīng)在明顯的位置安裝壓差計以顯示柜內(nèi)的負壓，正常運行時工作區(qū)應(yīng)有不低于120Pa的負壓。上游濃度采樣口：生物安全柜應(yīng)預(yù)留高效空氣過濾器上游氣溶膠濃度測試的采樣口并予以標識。下游濃度采樣口：不可掃描檢測高效空氣過濾器的生物安全柜應(yīng)設(shè)有排風(fēng)高效空氣過濾器下游濃度采樣口。制造商應(yīng)在高效空氣過濾器下游管道上預(yù)留采樣口并予以標識，制造商還應(yīng)在說明書中明確采樣口用途。5.3.9報警和聯(lián)鎖系統(tǒng)5.3.9.1Ⅱ級生物安全柜前窗操作口報警生物安全柜前窗開啟高度高于或低于前窗操作口標稱高度時，視覺和聽覺報警器應(yīng)報警，聯(lián)鎖系統(tǒng)啟動。當開啟高度回到標稱高度時，報警和聯(lián)鎖系統(tǒng)應(yīng)自動解除。5.3.9.2內(nèi)部供/排氣風(fēng)機聯(lián)鎖報警當生物安全柜既有內(nèi)部下降氣流風(fēng)機又有排氣風(fēng)機時，應(yīng)有聯(lián)鎖功能。一旦排氣風(fēng)機停止工作，下降氣流供氣風(fēng)機關(guān)閉，視覺和聽覺報警器報警；一旦下降氣流供氣風(fēng)機停止工作，排覺和聽覺報警器報警。6Ⅱ級B1和B2型生物安全柜應(yīng)有室外排氣風(fēng)機。一旦生物安全柜設(shè)定了允許的氣流范圍，在15s內(nèi)排氣體積損失20%時，則視覺和聽覺報警器報警，聯(lián)鎖的生物安全柜內(nèi)部風(fēng)機同時被關(guān)閉。5.3.9.4Ⅱ級A1或A2型生物安全柜排氣報警(信息提示)Ⅱ級A1和A2型生物安全柜，如果連接排氣罩且通過室外風(fēng)機排氣時，應(yīng)使用視覺和聽覺報警器提示排氣氣流的損失。當下降氣流流速和流入氣流流速波動超過其標稱值的士20%時，應(yīng)使用視覺和聽覺報警器提示下降氣流和流入氣流流速的波動。Ⅲ級生物安全柜壓差異常時，視覺和聽覺報警器應(yīng)報警。生物安全柜應(yīng)實時顯示工作區(qū)的下降氣流流速和流入氣流流速，下降氣流流速和流入氣流流速顯示值應(yīng)在下降氣流流速和流入氣流流速實測值的±0.025m/s之間，并可以校準至實測值，氣流流速顯示分辨率至少應(yīng)為0.01m/s。5.4.1柜體防泄漏Ⅱ級生物安全柜加壓到500Pa,保持10min后氣壓應(yīng)不低于450Pa,或保持生物安全柜內(nèi)氣壓在500Pa±50Pa的條件下，壓力通風(fēng)系統(tǒng)的外表面的所有焊接處、襯墊、穿透處、密封劑密封處在此壓力條件下應(yīng)無皂泡反應(yīng)。5.4.2高效空氣過濾器完整性5.4.2.1可掃描檢測過濾器在任何點的漏過率應(yīng)不超過0.01%。5.4.2.2不可掃描檢測過濾器檢測點的漏過率應(yīng)不超過0.005%。生物安全柜的噪聲應(yīng)不超過67dB(A)。生物安全柜平均照度應(yīng)不小于6501x,每個照度實測值應(yīng)不小于430lx。頻率10Hz和10kHz之間的凈振動振幅應(yīng)不超過5μm(rms)。Ⅱ級生物安全柜用1×10?CFU/mL～8×10?CFU/mL的枯草芽孢桿菌芽孢進行試驗5min后7(微生物試驗),從全部撞擊采樣器收集的枯草芽孢桿菌數(shù)量應(yīng)不超過10CFU。狹縫式空氣采樣器培養(yǎng)皿中枯草芽孢桿菌菌落數(shù)量應(yīng)不超過5CFU,對照培養(yǎng)皿應(yīng)呈陽性(當培養(yǎng)皿菌落計數(shù)大于300CFU時，則該培養(yǎng)皿呈“陽性”)。重復(fù)試驗三次，每次試驗均應(yīng)符合要求?；騃級和Ⅱ級生物安全柜用碘化鉀法測試，前窗操作口的保護因子應(yīng)不小于1×10?。5.4.6.2產(chǎn)品保護(Ⅱ級生物安全柜適用)用1×10?CFU/mL～8×10?CFU/mL枯草芽孢桿菌芽孢進行試驗5min后，在瓊脂培養(yǎng)皿上的枯草芽孢桿菌菌落數(shù)量應(yīng)不超過5CFU,對照培養(yǎng)皿應(yīng)呈陽性(當培養(yǎng)皿菌落計數(shù)大于300CFU時，則該培養(yǎng)皿呈“陽性”)。重復(fù)試驗三次，每次試驗均應(yīng)符合要求。5.4.6.3交叉污染保護(Ⅱ級生物安全柜適用)用1×101CFU/mL～8×10?CFU/mL枯草芽孢桿菌芽孢進行試驗5min后，有些從試驗側(cè)壁到距此側(cè)壁360mm范圍內(nèi)的瓊脂培養(yǎng)皿檢出枯草芽孢桿菌，并用作陽性對照。距被檢測側(cè)壁360mm外的瓊脂培養(yǎng)皿的菌落數(shù)應(yīng)不超過2CFU。從生物安全柜的左側(cè)和右側(cè)均各重復(fù)試驗三次，每次試驗結(jié)果均應(yīng)符合要求。5.4.7下降氣流流速5.4.7.1生物安全柜下降氣流平均流速應(yīng)在0.25m/s～0.50m/s之間。5.4.7.2生物安全柜的下降氣流平均流速應(yīng)在標稱值±0.015m/s之間。若符合5.4.6的要求而保持原型號和尺寸的在用生物安全柜，下降氣流平均流速應(yīng)在下降氣流標稱值±0.025m/s之間。均勻下降氣流的生物安全柜，各測量點實測值與平均流速相差均應(yīng)不超過±20%或±0.08m/s(取較大值)。5.4.7.3非均勻下降氣流生物安全柜，廠家應(yīng)明確各均勻下降氣流區(qū)的范圍和氣流流速，各區(qū)域?qū)崪y的下降氣流平均流速值應(yīng)在其區(qū)域下降氣流標稱值±0.015m/s之間，各測點實測值與其區(qū)域的平均流速相差應(yīng)不超過±20%或±0.08m/s(取較大值)。5.4.8流入氣流流速5.4.8.1生物安全柜的流入氣流平均流速應(yīng)在流入氣流標稱值±0.015m/s之間。若符合5.4.6的要求而保持原型號和尺寸的在用生物安全柜，流入氣流平均流速應(yīng)在流入氣流標稱值±0.025m/s之間。5.4.8.2I級生物安全柜的流入氣流平均流速應(yīng)在0.7m/s～1.0m/s之間。5.4.8.3Ⅱ級A1型生物安全柜流入氣流平均流速應(yīng)不低于0.40m/s,前窗操作口流入氣流工作區(qū)每米寬度的流量應(yīng)不低于0.07m3/s。5.4.8.4Ⅱ級A2、B1和B2型生物安全柜流入氣流平均流速應(yīng)不低于0.5m/s,工作區(qū)每米寬度的流量應(yīng)不低于0.1m3/s。5.4.8.5Ⅲ級生物安全柜應(yīng)保證生物安全柜內(nèi)每立方米容積的供氣流量應(yīng)不低于0.05m3/s;去掉單只手套后手套連接口中心的氣流流速應(yīng)不低于0.7m/s。5.4.9.1Ⅱ級生物安全柜工作區(qū)內(nèi)的氣流應(yīng)向下，應(yīng)不產(chǎn)生旋渦和向上氣流且無死點。5.4.9.2氣流不應(yīng)從生物安全柜中逸出。5.4.9.3I級和Ⅱ級生物安全柜前窗操作口整個周邊氣流應(yīng)向內(nèi)，無向外逸出的氣流。Ⅱ級生物安全柜的前窗操作口流入氣流不應(yīng)進入工作區(qū)。生物安全柜照明燈和風(fēng)機工作且持續(xù)運行4h以后，工作區(qū)中心的溫度應(yīng)不高于生物安全柜外環(huán)8境溫度8℃。5.4.11電機和風(fēng)機風(fēng)機的電機保證當生物安全柜在正常運行而不調(diào)整風(fēng)機的轉(zhuǎn)速控制，通過限制生物安全柜的負壓氣流，使初始負壓讀數(shù)增加初始正壓讀數(shù)的50%或更大，流經(jīng)生物安全柜的氣流總量降低應(yīng)不超5.4.12集液槽防泄漏集液槽容積應(yīng)不小于4L,應(yīng)無滲漏。生物安全柜向每一個方向傾斜10°時，應(yīng)不會傾倒。在生物安全柜背面頂端和側(cè)面頂端中心施加1100N時，對面上端的形變位移應(yīng)不超過2mm。生物安全柜工作臺面中心加載23kg后卸載，工作臺面不應(yīng)產(chǎn)生永久變形。5.4.13.4柜體抗前傾生物安全柜的前窗操作口的前沿施加1100N的力，背面底部離開地面距離應(yīng)不超過2mm。應(yīng)符合GB4793.1的要求。5.6環(huán)境試驗應(yīng)符合GB/T14710中氣候環(huán)境I組和機械環(huán)境I組規(guī)定。5.7電磁兼容性應(yīng)符合GB/T18268.1的要求。6試驗方法6.1外觀和材料實際檢查，判斷結(jié)果是否符合5.1。通過查驗相關(guān)文檔，核查設(shè)計資料，判斷結(jié)果是否符合5.2。玻璃厚度用通用量具測量，判斷結(jié)果是否符合5.2.3。使用測量器具檢測，判斷結(jié)果是否符合5.3.1.5和5.3.2。9通過查驗電機在1.15倍額定電壓值的條件下穩(wěn)定工作的證明文件，判斷結(jié)果是否符合5.3.3。生物安全柜在正常工作條件下運行，在手套洞口中心點進行風(fēng)速檢測，待風(fēng)速穩(wěn)定后讀數(shù)三次，取計算平均值作為手套洞口中心風(fēng)速值，判斷結(jié)果是否符合5.3.6。生物安全柜在正常工作條件下運行，測量柜體內(nèi)外相對壓差，判斷結(jié)果是否符合5.3.7。6.3.1柜體防泄漏測試生物安全柜柜體的防泄漏性能。壓力衰減法的步驟為：a)封好生物安全柜的前窗和排氣孔，使生物安全柜成為一密封狀態(tài)；b)必要時，移開裝飾嵌板和通道上的其他障礙物，將要測試的壓力通風(fēng)系統(tǒng)露出；c)在測試區(qū)連接壓力計或壓力傳感器系統(tǒng)以顯示內(nèi)部壓力；d)給生物安全柜增壓到500Pa,封閉加壓空氣，10min后測定壓力。允許初始壓力下降10%。皂泡法的步驟為：a)封好生物安全柜的前窗和排氣孔，使生物安全柜成為一密封系統(tǒng)；b)必要時，移開裝飾嵌板和通道上的其他障礙物，將要測試的壓力通風(fēng)系統(tǒng)露出；c)在測試區(qū)連接壓力計顯示內(nèi)部壓力；d)對生物安全柜用空氣持續(xù)增壓，使其壓力保持在實測值500×(1±10%)Pa;e)沿生物安全柜壓力通風(fēng)系統(tǒng)的所有焊縫、襯墊、套接處和封口處的外表面噴或涂刷檢漏肥皂溶液，小的泄漏會出現(xiàn)氣泡，如果從孔中吹出檢測液體而未形成泡，則可能發(fā)生大的泄漏，可通過輕微的氣流感覺和聲音來發(fā)現(xiàn)；f)對于通過認證機構(gòu)驗證，后續(xù)生產(chǎn)的生物安全柜，在生產(chǎn)環(huán)節(jié)可采用皂泡法進行檢測。判斷結(jié)果是否符合5.4.1。6.3.2高效空氣過濾器完整性本試驗測定生物安全柜過濾器安裝結(jié)構(gòu)的完整性。掃描檢測過濾器的檢測按下列步驟進行：a)運行生物安全柜的風(fēng)機和照明，拆除過濾器的散流裝置和保護蓋(如果有)。安放氣溶膠發(fā)生器，將氣溶膠導(dǎo)入生物安全柜，按廠商的說明，產(chǎn)生均勻分布的高效空氣過濾器上游氣流。廠商未規(guī)定氣溶膠的導(dǎo)入位置時，導(dǎo)入氣溶膠的方式應(yīng)確保其在生物安全柜正壓艙體內(nèi)的氣流中均勻分布。b)打開氣溶膠光度計，按廠商使用說明進行調(diào)整。c)對含有氣溶膠的高效空氣過濾器上游氣流進行測試，證實該濃度氣溶膠的光散射強度至少應(yīng)等于由10μg/L氣溶膠產(chǎn)生的光散射強度：——如果是線性刻度的光度計(0分度～100分度),將讀數(shù)調(diào)整為100;——如果是對數(shù)刻度的光度計，將上游氣流濃度的讀數(shù)調(diào)整在一個分度對應(yīng)濃度的1×10?以上(利用儀器校準曲線)。d)光度計探頭在過濾器下游距過濾器表面不超過25mm,以小于50mm/s的掃描速率移動，使探頭掃測過濾器的整個下游一側(cè)和每個組合過濾片的邊緣，掃測路線應(yīng)略微重疊。圍繞整個過濾器外圍、沿組合過濾片和框架的連接處以及圍繞過濾器和其他部件之間的密封處仔細檢查。判斷結(jié)果是否符合5.4.2.1。對于經(jīng)管道排氣的生物安全柜，不能進行排氣過濾器的掃描檢測，過濾器下游氣流中氣溶膠濃度的檢測是在下游氣流的管道上鉆一直徑大約10mm的孔，將帶有硬管光度計探針插入孔中進行檢測。判斷結(jié)果是否符合5.4.2.2。測試生物安全柜在正常運行時的噪聲。噪聲測試按下列步驟進行：a)將聲級計設(shè)置為“A”,計權(quán)模式；b)打開生物安全柜的風(fēng)機和照明燈，在生物安全柜前面中心水平向外300mm、工作臺面上方380mm處測量噪聲(見圖1);c)關(guān)閉生物安全柜的風(fēng)機和照明燈，如果有室外排氣風(fēng)機，讓其繼續(xù)運行，在相同位置測量背景噪聲；d)當背景噪聲大于57dB時，實測值參照儀器操作手冊提供的曲線或表進行修正，如果不適用，則用標準校正曲線或表1進行修正。圖1噪聲測試表1噪聲測量值修正表測量總噪聲和背景噪聲的差值/dB從測量總噪聲中減去的數(shù)降低背景噪聲，重新測試33210判斷結(jié)果是否符合5.4.3。本試驗是測試生物安全柜工作臺面的照度。照度測試按下列步驟進行：a)在工作臺面上，沿工作臺面兩內(nèi)側(cè)壁中心連線設(shè)置照度測量點，測量點之間的距離不超過300mm,與側(cè)壁最小距離為150mm(見圖2)。b)關(guān)閉生物安全柜的照明，從一側(cè)起依次在測量點進行背景照度測量。平均背景照度應(yīng)在c)打開生物安全柜的照明，啟動生物安全柜風(fēng)機，從一側(cè)起依次在測量點進行生物安全柜的照度測量。圖2照度測試判斷結(jié)果是否符合5.4.4。本試驗是測試生物安全柜在正常運行時的振動。振動測試按下列步驟進行：a)用夾鉗、螺釘、帶有凡士林凝膠薄膜的磁鐵或雙面膠帶將振動儀的傳感元件固定到工作臺面的幾何中心(見圖3);b)測定生物安全柜正常工作時的總振動振幅；c)關(guān)閉生物安全柜的風(fēng)機(如果有室外風(fēng)機，室外風(fēng)機工作),測定背景振動振幅；d)從總振動振幅中減去背景振動振幅，為生物安全柜的凈振動振幅。圖3振動測試判斷結(jié)果是否符合5.4.5。這些測試確定氣溶膠是否保留在生物安全柜內(nèi)、外部的污染物是否未進入生物安全柜的工作區(qū)域，以及生物安全柜中裝置之間的氣溶膠污染是否減到最小。生物安全柜以測試時要求的氣流流速運行。在試驗開始前生物安全柜啟動并運行至少30min,并連續(xù)運行至所有測試完成。按附錄A制備的枯草芽孢桿菌黑色變種芽孢菌懸液和無菌稀釋液。人員、產(chǎn)品和交叉污染保護試驗中主要使用以下儀器：a)培養(yǎng)皿(100mm×15mm或150mm×22mm),含營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基或其他無抑制劑和添加劑的培養(yǎng)基。b)撞擊采樣器，采樣流量在12.3L/min～12.6L/min之間，盛有20mL無菌稀釋劑。c)狹縫采樣器，采樣流量為28.3L/min±1.4L/min。d)噴霧器，符合下列要求：1)能在5min內(nèi)釋放出1×10?CFU/mL～8×10?CFU/mL枯草芽孢桿菌芽孢；2)能釋放出94%±6%的單細胞芽孢；3)氣溶膠噴射速率為0.50m/s±0.05m/s;噴霧器的校驗按附錄B進行。e)干擾圓筒，以下稱圓筒，為一外徑63mm兩端封閉的圓筒，長度由生物安全柜前后尺寸決定，材質(zhì)為不銹鋼或鋁。圓筒用于模擬手臂對生物安全柜氣流的干擾。人員保護測試用微生物法或碘化鉀法，仲裁時用微生物法。生物安全柜工作區(qū)寬度大于1.5m,應(yīng)分別在生物安全柜中心軸線、左側(cè)中心和右側(cè)中心進行人員保護試驗。人員保護試驗的微生物法步驟為：a)生物安全柜的氣流流速設(shè)置為標稱值。b)噴霧器盛有55mL濃度為1×10?CFU/mL～8×10?CFU/mL芽孢菌懸液。噴霧器位于生物安全柜內(nèi)兩側(cè)壁之間，噴霧器噴嘴的軸線在工作臺面上方360mm處，噴嘴前端在前窗操作口內(nèi)100mm處，噴射方向平行于工作臺面且正對前窗操作口(見圖4)。c)圓筒固定在生物安全柜工作臺面上中心位置，一端貼著生物安全柜的后壁，另一端從生物安全柜的前窗操作口伸出生物安全柜至少150mm。圓筒軸線距工作臺面70mm(見圖5);6個撞擊采樣器呈左右對稱放置在生物安全柜前，采樣口正對生物安全柜。其中，2個撞擊采樣器的采樣口軸線相距150mm,與圓筒上沿平齊，采樣口前端距生物安全柜63mm;2個撞擊采樣器采樣口軸線相離50mm,位于距圓筒下沿30mm的水平面上，采樣口前端距生物安全柜63mm,2個撞擊采樣器的采樣口水平面在工作臺面上方360mm處，采樣口前端距生物安全柜50mm,采樣口軸線距生物安全柜中線150mm(見圖6);一個陽性對照瓊脂培養(yǎng)皿放在圓筒下，位于前窗進氣格柵上方或下方10mm,使其對進氣氣流的干擾最小(見圖5)。d)2個狹縫采樣器的采樣口平面與生物安全柜工作臺面平齊，采樣口的垂直軸線在生物安全柜前方150mm處，各距內(nèi)側(cè)壁200mm(見圖6)。e)測試持續(xù)30min,順序如表2所示。f)用一直徑47mm的孔徑0.22μm濾膜過濾所有撞擊采樣器的采樣液體，于無菌條件下取出濾膜，置于合適的培養(yǎng)基上。有濾膜的培養(yǎng)皿、對照培養(yǎng)皿和狹縫采樣器的培養(yǎng)皿在37℃±1℃培養(yǎng)。當培養(yǎng)到24h～28h時檢查計數(shù)。如果呈陰性，繼續(xù)培養(yǎng)至總培養(yǎng)時間達44h~48h時檢查計數(shù)。g)新型和重大改型設(shè)計的生物安全柜，將流入氣流的流速設(shè)置為低于標稱值0.050m/s±0.015m/s,下降氣流流速設(shè)置為高于標稱值0.050m/s±0.015m/s(應(yīng)拆除對生物安全柜運行不必要的可拆卸設(shè)備，以便設(shè)置下降氣流流速),重復(fù)上述試驗步驟。h)新型和重大改型設(shè)計的生物安全柜，將流入氣流和下降氣流流速設(shè)置為低于標稱值0.050m/s±0.015m/s(應(yīng)拆除對生物安全柜運行不必要的可拆卸設(shè)備，以便設(shè)置下降氣流流速),重復(fù)上述試驗步驟。圖4人員保護試驗一圖5人員保護試驗二實驗設(shè)備圓筒撞擊采樣器狹縫采樣器O圖6人員保護試驗三表2人員保護試驗操作順序時間/min試驗操作0啟動狹縫采樣器5啟動噴霧器6啟動撞擊采樣器停止撞擊采樣器停止噴霧器停止狹縫采樣器氣流流速與微生物試驗相同，按附錄C試驗。判斷結(jié)果是否符合5.4.6.1。產(chǎn)品保護試驗的微生物法按以下步驟進行：a)生物安全柜的氣流流速設(shè)置為其標稱值；b)圓筒固定在生物安全柜工作臺面上的中心區(qū)，一端貼住工作區(qū)的后壁，另一端從前窗操作口伸出生物安全柜至少150mm,圓筒的軸線高于工作臺面70mm(見圖8);c)在生物安全柜的工作臺面上排滿敞開的瓊脂培養(yǎng)皿(見圖7);d)將盛有55mL濃度為5×10?CFU/mL～8×10?CFU/mL芽孢菌懸液的噴霧器放在生物安全柜外，噴霧器噴射軸在生物安全柜中心并與前窗操作口上沿平齊，噴霧器的噴嘴前端位于前窗操作口外100mm,噴霧方向平行于工作臺面，正對前窗操作口(見圖8);e)一個陽性對照瓊脂培養(yǎng)皿放在圓筒下，并位于前窗進氣格柵上方或下方10mm,使其對進氣氣流的干擾最小(見圖8);f)啟動噴霧器，運行5min后關(guān)閉，噴霧器關(guān)閉5min后蓋上瓊脂培養(yǎng)皿的蓋子；g)將培養(yǎng)皿在37℃±1℃培養(yǎng)，當培養(yǎng)到24h～28h時檢查計數(shù)，如果呈陰性，繼續(xù)培養(yǎng)至總培養(yǎng)時間達44h～48h時檢查計數(shù)；h)對于新型和重大改型設(shè)計的生物安全柜，將流入氣流的流速設(shè)置為高于標稱值0.050m/s±0.015m/s,將下降氣流流速設(shè)置為低于標稱值0.050m/s±0.015m/s(應(yīng)拆除對生物安全柜運行不必要的可拆卸設(shè)備，以便設(shè)置下降氣流流速),重復(fù)上述試驗步驟。圖7產(chǎn)品保護試驗一圖8產(chǎn)品保護試驗二判斷結(jié)果是否符合5.4.6.2。交叉污染保護試驗的微生物法按以下步驟進行。a)生物安全柜的氣流流速設(shè)置為其標稱值。b)將盛有55mL濃度為5×10?CFU/mL～8×10?CFU/mL的芽孢菌懸液的噴霧器置于生物安全柜內(nèi)，緊靠左側(cè)內(nèi)壁的中心，噴霧器噴射軸線在工作臺面上76mm～130mm處，噴射方向平行于工作臺面正對面的側(cè)壁(見圖9)。c)按下列方式，將敞開的瓊脂培養(yǎng)皿從前至后排列在工作臺面上(見圖9):1)兩排對照培養(yǎng)皿位于噴霧器噴嘴下方；2)距噴霧器所在側(cè)壁360mm處放一排培養(yǎng)皿；3)距噴霧器所在側(cè)壁360mm外放一排培養(yǎng)皿，如果空間允許則放兩排。d)啟動噴霧器，5min后關(guān)閉噴霧器。e)15min后蓋上培養(yǎng)皿，37℃±1℃培養(yǎng)，當培養(yǎng)到24h～28h時檢查計數(shù)，如果呈陰性，繼續(xù)培養(yǎng)至總培養(yǎng)時間達44h～48h時檢查計數(shù)。f)將噴霧器放于靠右側(cè)內(nèi)壁中央執(zhí)行上述步驟。g)當生物安全柜工作區(qū)寬度超過1.5m,應(yīng)增加從生物安全柜工作區(qū)中心位置對左側(cè)和右側(cè)的交叉污染保護，在中心軸線噴霧器下方放兩排培養(yǎng)皿，作為陽性對照，分別對左側(cè)和右側(cè)超過360mm的區(qū)域一排或兩排培養(yǎng)皿，進行檢查計數(shù)(見圖10)、圖9交叉污染保護試驗一圖10交叉污染保護試驗二6.3.7下降氣流流速本試驗測定生物安全柜內(nèi)下降氣流流速。按下列方式在工作區(qū)上方高于前窗操作口上沿100mm的水平面上確定測量點位置，多點測量穿過該平面的下降氣流流速：a)測量點等距分布，對于工作區(qū)寬度大于1m的生物安全柜，形成的正方形柵格不大于150mm×150mm,測試點最少應(yīng)有3排，每排最少應(yīng)有7個測量點；對于柜體寬度小于1m的生物安全柜，形成的正方形柵格不大于100mm×100mm,測試點最少應(yīng)有3排，每排最少應(yīng)有4個測量點；b)測試區(qū)域邊界與生物安全柜的內(nèi)壁及前窗操作口的距離應(yīng)為150mm;c)用夾具將風(fēng)速儀探針準確定位在各測量點進行測量。記錄所有測量點的測量值并根據(jù)測量值計算出平均值(見圖11)。圖11下降氣流流速測量試驗6.3.7.2.2非均勻下降氣流生物安全柜在工作區(qū)上方高于前窗操作口上沿100mm的水平面上多點測量穿過該平面各區(qū)域的氣流流速，各區(qū)域由測試機構(gòu)驗證。按照廠商的使用說明的區(qū)域界限、在每一區(qū)域的測量點數(shù)和所用等間距柵格的大小測試。對生物安全柜運行不重要的可拆卸元件(可選擇的部件)應(yīng)在設(shè)置標稱值前拆除。將風(fēng)速儀探針準確定位在各測量點進行測量。記錄所有測試點的測量值并根據(jù)測量值計算出各區(qū)域的平均值。判斷結(jié)果是否符合5.4.7。6.3.8流入氣流流速本試驗用風(fēng)量計法或風(fēng)速儀法讀取前窗操作口流入氣流流量或流速數(shù)值，計算平均流入氣流流速，確認生物安全柜在標稱值風(fēng)速運行。流入氣流流速測定后，再用生產(chǎn)廠商推薦的計算或測定流入氣流流速的替代方法測量。用風(fēng)量計測量流入氣流的步驟為：a)將風(fēng)量計的風(fēng)罩密封在生物安全柜的前窗操作口中心，風(fēng)罩兩邊留的開口區(qū)域要密封；b)運行生物安全柜，至少讀取風(fēng)量計5次，得到相應(yīng)的氣體流量測量值，計算平均值，得到流入氣流的平均流量；注：檢測過程中不要影響氣流通過風(fēng)量計入口。c)流入氣流的平均流量(m3/s)除以前窗操作口面積(m2),得到流入氣流平均流速(m/s);d)流入氣流的平均流量(m3/s)除以工作臺面寬度(m)得出工作臺面每米寬度的流量(m3/s);e)測試報告應(yīng)包括各次的實測流量、計算的平均流量、前窗操作口尺寸和面積、平均流速、工作臺面寬度、工作臺面每米寬度的流量和所使用的測量方法。廠商需驗證并提供流入氣流測量的替代方法，經(jīng)測試機構(gòu)核準。廠商的驗證程序包括不少于10次的重復(fù)測試結(jié)果。測試機構(gòu)在對廠商提供的試驗數(shù)據(jù)審查和成功再現(xiàn)測試結(jié)果后方可批準。下面幾種方法可以選擇使用。6.3.8.3.2測量排氣氣流流速確定流入氣流流速(適于Ⅱ級A1、A2型生物安全柜)用風(fēng)速儀測試Ⅱ級A1、A2型生物安全柜的排氣速率計算流入氣流流速的步驟為：a)用熱式風(fēng)速儀多點測量穿過排氣過濾器面的氣流流速，測量點為不大于100mm×100mm的柵格點，邊界點距過濾器邊緣約100mm,測量面與過濾器面的距離約100mm(見圖12)。b)排氣過濾器或排氣口的有效開口面積應(yīng)由廠商確定和提供，并經(jīng)測試機構(gòu)確認。對于生物安全柜的排氣過濾器不易拆卸、排氣口不均勻，則應(yīng)按測試機構(gòu)核準的方法進行檢測。c)用式(1)計算排氣流量E:式中：E——排氣流量，單位為立方米每秒(m3/s);F——各測點排氣流速平均值即為平均排氣流速，單位為米每秒(m/s);Sp——排氣面積，單位為平方米(m2)。d)用式(2)計算平均流入氣流流速I:I=E/S………(2)GB41918—2022I——平均流入氣流流速，單位為米每秒(m/s);e)測試報告應(yīng)包括各測量點實測排氣氣流流速、平均排氣氣流流速、排氣口尺寸和面積、排氣流量、前窗操作口尺寸和面積、流入氣流流速和所用的測算方法。6.3.8.3.3限制前窗操作口開啟高度測量流入氣流流速(適于Ⅱ級A1、A2和B2型生物安全柜)Ⅱ級生物安全柜，用風(fēng)速儀測量前窗操作口開啟到一定高度時的流入氣流流速，計算平均流入氣流流速的步驟為：a)開啟到確定的開啟高度。b)按廠商規(guī)定的測點位置用熱式風(fēng)速儀多點測試前窗氣流流速，測點間距不大于150mm。c)用式(3)計算平均流入氣流流速I:式中：I——平均流入氣流流速，單位為米每秒(m/s);f——平均測點氣流流速，單位為米每秒(m/s);x——修正系數(shù)。d)測試報告應(yīng)包括限制的前窗操作口開啟高度、測點實測流速、平均流速、列出的修正系數(shù)、計算的平均流入氣流流速和測試方法。6.3.8.3.4測量前窗操作口流入氣流流速確定平均流速通過用風(fēng)速儀測量前窗操作口流入氣流流速，計算平均流入氣流流速的步驟為：a)如果生產(chǎn)廠商說明應(yīng)關(guān)閉循環(huán)風(fēng)機，則關(guān)閉生物安全柜的循環(huán)風(fēng)機；b)將前窗開啟到生產(chǎn)廠商推薦的高度；c)用熱式風(fēng)速儀在前窗操作口平面的兩排點測量氣流流速，第一排在前窗操作口上沿下約開啟高度25%的位置；第二排在前窗操作口上沿下約開啟高度75%的位置(見圖13);d)測量點間隔約100mm,距前窗操作口的側(cè)邊接近但不小于100mm,用所有測量值的平均值表示流入氣流流速；e)測試報告包括各測點流入氣流流速實測值、平均流入氣流流速以及測量所用的方法。6.3.8.3.5Ⅱ級B2型生物安全柜流入氣流流速測量對于Ⅱ級B2型生物安全柜，用風(fēng)速儀測量流入氣流流速的步驟為：a)打開生物安全柜下降氣流風(fēng)機和排氣系統(tǒng)風(fēng)機。b)將前窗(觀察窗)開啟到廠商建議的操作高度。c)按照測試機構(gòu)驗證的方法或附錄D的方法測量風(fēng)速，并計算生物安全柜的排氣流量(m3/s)。d)在下降氣流散流裝置下方150mm水平面，起始點距各側(cè)壁50mm,大約100mm×100mm柵格點(見圖14)用熱式風(fēng)速儀測量下降氣流流速。將氣流流速測量平均值，乘以測定流速平面的面積(m2),得到經(jīng)過過濾器的供氣量(m3/s)。e)排氣流量減去下降氣流的供氣流量即為所計算的前窗流入氣流流量(m3/s)。f)前窗流入氣流流量(m3/s)除以前窗操作口面積(m2)即為平均流入氣流流速(m/s)。g)測試報告應(yīng)包括各個排氣氣流流速實測值、計算出的平均排氣流速、排氣輸送管面積、計算出的排氣流量、各個供氣流速實測值、平均供氣流速、有效供氣面積、計算出的供氣流量、前窗操作口面積、計算出的流入氣體流量、計算出的平均流入氣流流速，以及測算所用的方法。圖12A型排氣氣流流速測量圖13流入氣流流速測量圖14B2型經(jīng)過濾器的供氣量測量去掉Ⅲ級生物安全柜的一個連接口的手套，用熱式風(fēng)速儀在連接口中心測量氣流流速，在其他手套連接口進行同樣測量，每只手套測試三次。當手套全部連接上且生物安全柜內(nèi)處于至少120Pa的負壓時，按附錄D測量風(fēng)速并計算排氣流量，即為生物安全柜的供氣流量。判斷結(jié)果是否符合5.4.8。本試驗觀察生物安全柜的氣流模式。6.3.9.2下降氣流測試(Ⅱ級生物安全柜)煙霧沿著工作臺面的橫向中心線，在前窗操作口頂端以上100mm的高度，從生物安全柜的左端到右端。判斷結(jié)果是否符合5.4.9.1。煙在觀察屏后25mm、前窗操作口頂端以上150mm高度從生物安全柜的一端到另一端。判斷結(jié)果是否符合5.4.9.1和5.4.9.2。6.3.9.4前窗操作口邊緣氣流測試煙在生物安全柜外大約38mm處沿著整個前窗操作口的周邊經(jīng)過，特別應(yīng)注意角落和垂直邊緣。判斷結(jié)果是否符合5.4.9.3。煙在滑動窗內(nèi)從距生物安全柜側(cè)壁和工作區(qū)頂部50mm經(jīng)過。判斷結(jié)果是否符合5.4.9.2。在同一環(huán)境溫度下測試，將溫度計放在生物安全柜前窗操作口面中心向外80mm處測量環(huán)境溫度，然后放在生物安全柜操作臺面中心點測量生物安全柜內(nèi)溫度，生物安全柜內(nèi)溫度減去環(huán)境溫度為溫升值。判斷結(jié)果是否符合5.4.10。檢測生物安全柜電機和風(fēng)機性能的步驟：a)將氣流流速調(diào)至標稱值的士0.015m/s范圍內(nèi)。b)按6.3.8.3.5d)和6.3.8.2測定生物安全柜在標稱值運行時風(fēng)機的總氣流流量(m3/s)。c)廠商應(yīng)將正壓接頭直接置于下降氣流的高效空氣過濾器上游，使速度壓力轉(zhuǎn)換為靜壓。正壓接頭不能正對風(fēng)機的出口。廠商將負壓接頭安置在距風(fēng)機入口至少為風(fēng)機入口等效直徑的一半風(fēng)機有兩個進氣口時，應(yīng)將兩進氣口負壓頭連接得到平均靜壓，如果由生物安全柜設(shè)計造成的不能安裝雙靜壓分接頭，可以用一個接頭。在每個壓力接頭連接壓力計，記錄測定結(jié)果。正壓讀數(shù)為初始靜態(tài)壓力參考點，無參考符號的正負壓力讀數(shù)的總和為生物安全柜總靜壓。d)通過限制生物安全柜的負壓氣流，使初始負壓讀數(shù)增加初始正壓讀數(shù)的50%或更大。為此，測試生物安全柜的初始負壓，加載或限制生物安全柜的負壓氣流面積(即Ⅱ級A1、A2、B1型生物安全柜的前進氣柵格或B2型生物安全柜的供氣入口)至初始負壓讀數(shù)增加初始正壓讀數(shù)的50%或更大。當?shù)谝回撦d的高效空氣過濾器處于負壓(B1型生物安全柜)時，將第一高效空氣過濾器的壓降的50%視作初始正壓值的50%。e)按b)測定生物安全柜風(fēng)機的總氣流流量(m3/s)。f)計算最終的風(fēng)機風(fēng)量相對初始風(fēng)量的變化。g)記錄初始負壓和正壓、最終的負壓以及初始和最終的風(fēng)機風(fēng)量和相對變化。判斷結(jié)果是否符合5.4.11。6.3.12集液槽防泄漏用至少4L水充滿集液槽，保持1h,檢查1h后水滲漏情況。判斷結(jié)果是否符合5.4.12。采用靜力加載測試生物安全柜結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。從生物安全柜的前面或后面底邊部位防止生物安全柜側(cè)向移動。使生物安全柜在最容易傾倒的方向傾斜10°,應(yīng)不翻倒。判斷結(jié)果是否符合5.4.13.1。柜體抗變形測試的步驟：a)在地面或生物安全柜的底座安裝固定件，防止生物安全柜傾倒和移動；b)加載1100N的外力于生物安全柜頂端背面，用度盤式測微尺測量頂端前面形變位移；加載1100N的外力于頂端一側(cè)，用度盤式測微尺測量頂端對面的形變位移(見圖15和圖16)。判斷結(jié)果是否符合5.4.13.2。工作臺面抗變形測試的步驟為：a)測量從工作臺面前沿的中心到地面的距離；b)在工作臺面中心加載23kg的壓力，加載尺寸為25cm×25cm,加載時間不少于5min。卸載后，測量工作臺面前沿的中心到地面的距離(見圖17),判斷結(jié)果是否符合5.4.13.3。在生物安全柜前窗操作口前沿的中心加載1100N的壓力，測量生物安全柜后底部與地面的距離(見圖18),判斷結(jié)果是否符合5.4.13.4。圖15柜體抗變形試驗一圖16柜體抗變形試驗二圖17工作臺面抗變形試驗圖18柜體抗前傾試驗應(yīng)置于生物安全柜顯著位置，并提供下述內(nèi)容：a)制造商名稱和地址；b)產(chǎn)品型號、規(guī)格與名稱；c)級別類型；d)設(shè)備編號；e)生產(chǎn)日期；f)產(chǎn)品標準編號；g)生物安全柜的功率、電壓和頻率；i)外形尺寸和工作區(qū)尺寸；j)設(shè)備凈質(zhì)量；k)下降氣流和流入氣流流速標稱值；1)過濾器的規(guī)格和數(shù)量；m)流入氣流檢驗方法(選用限制前窗操作口開啟高度測量流入氣流流速時應(yīng)提供修正系數(shù))。7.2標志在生物安全柜前部顯著位置應(yīng)印有生物危險標志。生物危險標志應(yīng)符合GB/T16273.1,示意圖見圖19。圖19生物危險標志示意圖8檢驗規(guī)則8.1檢驗分類生物安全柜的檢驗分為出廠檢驗、型式檢驗、安裝檢驗和常規(guī)維護檢驗。按表3對出廠檢驗要求的檢驗項目進行檢驗，檢驗項目中出現(xiàn)一項不符合要求，即判定該生物安全柜出廠檢驗不合格。8.3型式檢驗下列情況之一，應(yīng)進行型式檢驗：a)新產(chǎn)品或老產(chǎn)品轉(zhuǎn)廠生產(chǎn)的樣機定型時；b)正式生產(chǎn)后，如果結(jié)構(gòu)、材料、工藝有較大改進，可能影響產(chǎn)品性能時；c)正常生產(chǎn)時，定期或積累一定產(chǎn)量后；d)產(chǎn)品長期停產(chǎn)后，恢復(fù)生產(chǎn)時；e)出廠檢驗結(jié)果與上次型式檢驗的結(jié)果差異較大時；f)國家質(zhì)量監(jiān)管機構(gòu)提出進行型式檢驗的要求時；g)產(chǎn)品有下列改變時：——風(fēng)機位置、容量和數(shù)量；——壓力排風(fēng)區(qū)尺寸和結(jié)構(gòu)；——過濾器位置；——前窗操作口尺寸；——排氣口尺寸和位置；——工作面尺寸和結(jié)構(gòu)；——內(nèi)置附件(如離心機、紫外燈、靜脈藥容器的支架、扶手等)。按表3對型式檢驗要求的檢驗項目進行檢驗，檢驗項目中出現(xiàn)一項不符合要求，即判定該生物安全柜型式檢驗不合格。8.4安裝檢驗生物安全柜安裝完成、位置移動后，進行安裝檢驗。按表3對安裝檢驗要求的檢驗項目進行檢驗，檢驗項目中出現(xiàn)一項不符合要求，即判定該生物安全柜安裝檢驗不合格。8.5維護檢驗按表3對維護檢驗要求的檢驗項目進行檢驗，至少每年一次。當生物安全柜更換過濾器和內(nèi)部部件維修后，也要進行維護檢驗。檢驗項目中出現(xiàn)一項不符合要求，即判定該生物安全柜維護檢驗不表3檢驗類型及項目出廠檢驗5.1、5.2、5.3、5.4.1～5.4.5、5.4.7～5.4.9、5.5型式檢驗5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7安裝檢驗至少5.1、5.3.9、5.4.2、5.4.7～5.4.9維護檢驗5.1、5.4.2、5.4.7～5.4.99隨機文件生產(chǎn)廠商應(yīng)提供產(chǎn)品的相關(guān)文件，詳細說明生物安全柜的操作程序，以保證生物安全柜的性能。文件還包括對產(chǎn)品性能和驗證的說明，主要包括：a)符合標準各項要求的證書，生物安全柜過濾器的合格證書；b)生物安全柜檢測的方法和儀器；c)安裝和操作手冊；d)過濾器的維護和更換說明，包括生物安全柜需要適宜的去污染聲明；e)生物安全柜氣流模式示意圖；f)工作區(qū)域的范圍和未保護區(qū)域的指示；g)生物安全柜消毒和清潔的說明和適宜的消毒劑；h)對于Ⅲ級生物安全柜，手套的接口形狀和尺寸。10.1包裝標志包裝箱上字樣和標志應(yīng)保證不因歷時較久而模糊不清，包裝箱上應(yīng)有下列內(nèi)容：a)產(chǎn)品型號及名稱；b)制造廠名稱；c)凈質(zhì)量和毛質(zhì)量；d)產(chǎn)品編號或生產(chǎn)日期；e)外形尺寸；f)儲運條件；10.2包裝要求包裝應(yīng)符合以下要求：a)生物安全柜應(yīng)有牢固的包裝，包裝應(yīng)無明顯破損與變形；包裝完備的生物安全柜，應(yīng)儲存在相對濕度不大于80%,無腐蝕性氣體和通風(fēng)良好的室內(nèi)。(規(guī)范性)枯草芽孢桿菌芽孢菌懸液的制備A.1材料枯草芽孢桿菌黑色變種芽孢。A.2無菌稀釋液無菌稀釋液按下列的方法之一進行配制：a)方法一：1)34g磷酸二氫鉀(KH?PO?)溶于500mL蒸餾水中，用1mol/L氫氧化鈉(NaOH)將溶液的pH值調(diào)至7.2±0.5,用蒸餾水稀釋至1L,制備濃磷酸鹽緩沖液(PBS);2)取1.25mL濃PBS,加入1L蒸餾水，高壓滅菌器中120℃滅菌15min,得到稀釋的PBS,還可以再加入5.0mL硫酸鎂(MgSO?)溶液。硫酸鎂溶液的濃度為每1L蒸餾水中含50g七水硫酸鎂。1L蒸餾水，25℃時將蒸餾水的pH值調(diào)節(jié)至7.0±0.1;在高壓滅菌器中120℃消毒15min,用方法二制備的無菌稀釋液適于對制備后立即使用的芽孢菌懸液的稀釋。當稀釋的菌懸液需要在4℃保存時，使用方法一制備的稀釋液進行稀釋。A.3枯草芽孢桿菌黑色變種芽孢菌懸液利用已培養(yǎng)的枯草芽孢桿菌黑色變種芽孢及枯草芽孢桿菌凍干粉分別按方法一或方法二步驟進行制備：a)方法一：1)用劃線技術(shù)無菌接種于含胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基(TSA)(或與之相當?shù)钠贩N)的培養(yǎng)皿(100mm×15mm)中。2)在37℃±0.5℃下培養(yǎng)48h±2h。3)選取特征著色菌落，并轉(zhuǎn)移至10個消毒的220mL帶螺旋蓋小瓶中，每個瓶內(nèi)盛有大約50mL胰蛋白胨大豆瓊脂。4)在37℃±0.5℃培養(yǎng)48h±2h。5)加10mLPBS至斜面培養(yǎng)基上并輕輕的洗滌瓊脂表面的菌落。6)合并細菌菌懸液于一消毒的150mL帶螺旋蓋的瓶中，使其約為100mL。在65℃±0.5℃熱振動培養(yǎng)15min。如果細胞碎片干擾噴霧器的噴灑，可用PBS洗滌三次，以2500r/min離心分離15min,菌懸液會澄清，在PBS中懸浮至原體積。7)采用PBS和胰蛋白胨大豆瓊脂按標準稀釋平板法測定芽孢濃度。按上述方法制備的芽孢濃度應(yīng)為2×10°CFU/mL～4×10°CFU/mL。8)在37℃士0.5℃培養(yǎng)48h±2h。8×10?CFU/mL。10)在4℃保存2×10?CFU/mL～4×10°CFU/mL芽孢菌懸液或分成等量放入帶旋蓋的小瓶中于一70℃貯存。時常用培養(yǎng)皿劃線法檢查芽孢的成活力，用芽孢染色技術(shù)檢查b)方法二：1)將以前培育的枯草芽孢桿菌芽孢或按說明書再水化的無水凍干培養(yǎng)菌種接種到250ml無菌胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)。2)在往復(fù)式振蕩器上37℃±0.5℃振蕩培養(yǎng)48h±2h。3)在65℃±0.5℃加熱振蕩培養(yǎng)15min。4)轉(zhuǎn)移菌懸液至有旋蓋的試管中，2500r/min離心分離15min,用無菌蒸餾水洗滌至少3次。如果需要貯存，最后洗滌用PBS。6)在37℃±0.5℃培養(yǎng)48h±2h。7)如果芽孢菌懸液立即使用，用PBS稀釋芽孢菌懸液至濃度為5×10?CFU/mL～8×8)如果芽孢菌懸液不立即使用，在一70℃保存芽孢菌懸液或分成等量裝入帶旋蓋的小瓶中于4℃貯存。使用前檢查芽孢菌懸液的成活力。(規(guī)范性)噴霧器的選擇和校準B.1選擇當噴霧器符合如下要求時，即為合格：——能在5min內(nèi)釋放出1×10?個～8×10?個空氣傳播的枯草芽孢桿菌芽孢；——能釋放出不小于88%的單體芽孢；——芽孢氣溶膠噴出速度為0.5m/s±0.05m/s。B.2校準證明噴霧器符合附錄A的制備要求。噴霧器應(yīng)在其使用的實驗室中進行校準。B.2.3頻率噴霧器應(yīng)在其使用前進行校準，隨后應(yīng)定期校準。B.2.4材料和儀器試驗中使用下列儀器和材料：——5×10?CFU/mL～8×10?CFU/mL的枯草芽孢桿菌芽孢菌懸液。——待校準的噴霧器?！矒舨蓸悠鳌！_關(guān)定時器?！∧み^濾器漏斗(過濾器尺寸為47mm)兩端用室溫硫化密封硅橡膠隔膜，隔膜穿有孔，在寬的一端可插入噴霧器的噴出口，另一端為采樣器。采樣器采樣口末端應(yīng)插緊，噴霧器末端應(yīng)插松，這樣采樣器是在大氣壓下運行，而不是在密閉系統(tǒng)中?！髁坑嫛！獕毫τ嫛！?7mm氣溶膠型薄濾膜在采樣盒中，有一敞開面。B.2.5方法噴霧器校準試驗按以下步驟進行：a)測定噴霧器噴出口尺寸并計算出口面積(m2)。b)以噴霧器要求的流速(m/s)計算所需的流量(m3/s)。c)將芽孢菌懸液按生產(chǎn)廠家推薦的體積量加入噴霧器。d)將噴霧器噴出口放在過濾器漏斗寬端的橡膠隔膜上，將采樣器采樣口插進過濾器漏斗另一端的橡膠隔膜中，確保采樣器末端插緊。e)將一軟管連接到流量計附帶的壓力計上，再與噴霧器相連。f)同時打開噴霧器和采樣器(按照廠商的用法說明操作)。運行噴霧器5min(采用定時器開關(guān)),采樣5.25min。g)以無菌方式將采樣器所采集的液體轉(zhuǎn)移到一消毒的500mL量筒中，用蒸餾水沖洗漏斗、采樣器主體和瓶子，確保所有的采集的芽孢和所有的沖洗水均收集在量筒中。h)測量與記錄量筒中的液體體積。以無菌方式轉(zhuǎn)移全部液體至一含有磁攪拌器的消毒燒瓶中，混合均勻。i)連續(xù)稀釋并采用5個完全相同的平皿接種定量芽孢濃度。j)用薄濾膜采集細菌氣溶膠，采樣完成后，用適當?shù)娜玖蠈δみM行染色。在顯微鏡下有代表性的視野中進行計數(shù)。B.2.6計算按以下方法計算出試驗結(jié)果：a)用式(B.1)計算5min釋放的芽孢數(shù)Q:式中：Q——5min釋放的芽孢數(shù)；M——5個平皿中菌落形成單位的平均值，單位為菌落形成單位(CFU);D?——稀釋因子。b)用式(B.2)計算噴霧器的噴氣速度Vp:式中：Vp——噴霧器的噴氣速度，單位為米每秒(m/s);G,——氣體流量，單位為立方米每秒(m3/s);Sp——噴嘴口面積，單位為平方米(m2)。c)計算單個細菌在總氣溶膠樣品中的百分數(shù)。B.2.7認可結(jié)果符合下列要求，則噴霧器可被認可：——重復(fù)5次校準試驗，噴霧器運行5min的釋放芽孢的平均數(shù)應(yīng)在1×10?~8×10?之間；——噴霧器噴氣速度應(yīng)為0.5m/s±0.05m/s。(規(guī)范性)C.1基本原理傳遞指數(shù)將給定點的曝露量定義為n/(N×s),其中N是釋放粒子數(shù)，n是以流速s采樣獲得的粒子數(shù)，采樣持續(xù)至測試結(jié)束。紊流通風(fēng)的房間，其整個空間可達到完全均勻的混合，傳遞指數(shù)相當于1/V,其中V為含沉降損失的有效流量。傳遞指數(shù)的量綱為：時間/體積。開放工作臺的傳遞指數(shù)與生物安全柜內(nèi)部的傳遞指數(shù)的比值為保護因子Ap,Ap;無量綱。對于通風(fēng)量為V.的參考開放工作臺，室內(nèi)通風(fēng)量為10m3/min,那么如果采樣速率s以m3/min為單位，則Ag為(N×s)/(10n),如果采樣速率s以L/min為單位，則Aμ變?yōu)?N×s)/(10'n)。理想情況下，不應(yīng)有危害性氣溶膠從安全柜逸出，故n為0,A,無窮大。然而，前窗操作口開啟的生物安全柜不會提供完全的保護，Ay;最小值取決于測試的靈敏度，即：挑戰(zhàn)試驗釋放粒子數(shù)N、采樣速率s和采樣獲得的能可靠地從背景污染中區(qū)分出來粒子的最小數(shù)量。一套測試系統(tǒng)的實際經(jīng)驗值為：N≥3×10?,s≥20L/min,n≤4,由此確知Ap的最小值為碘化鉀法試驗中使用的試劑為：——碘化鉀：15g/L碘化鉀的乙醇溶液或不超過50%(體積分數(shù))水的工業(yè)甲基化酒精溶液；——氯化鈀：1.0g/L氯化鈀的0.1mol/L鹽酸溶液。C.3設(shè)備碘化鉀法試驗中的主要儀器為：a)氣溶膠發(fā)生器：由直徑38mm、能以28000r/min±500r/min速度旋轉(zhuǎn)的渦流盤和一個將碘化鉀溶液噴射到渦流盤上的噴嘴組成，噴嘴末端與渦流盤的間隙調(diào)整至0.1mm。該裝置還包括一只試驗支架，必要時，用其將氣溶膠發(fā)生器支撐在工作臺面以上。b)空氣采樣器：利用向心力原理工作，前部入口的空氣流量為100L/min,一只錐形管夾帶3%的這種空氣注1:可由一只離心式風(fēng)機提供流經(jīng)采樣器的氣流，通過一根固定的導(dǎo)管將風(fēng)機與空氣采樣器連接。注2:比空氣重的微粒，沿直線穿過錐形頭的通道沉積在錐形頭底部的過濾膜上，而空氣則被偏離到錐形頭的外部。c)干擾圓筒：直徑60mm～65mm,表面光滑，至少一端封閉，由支架支撐。d)皮氏培養(yǎng)皿：直徑55mm。e)過濾膜：直徑25mm,孔徑3μm。C.4測試準備在遠離被測試生物安全柜的地方擺放兩只皮氏培養(yǎng)皿。一只培養(yǎng)皿內(nèi)裝入半皿氯化鈀溶液，另一只內(nèi)裝入半皿蒸餾水，將蓋子蓋回到培養(yǎng)皿上。準備兩張濾紙，用于干燥過濾膜。將干擾圓筒放在生物安全柜工作區(qū)域的側(cè)壁之間的中部，一端伸入到生物安全柜內(nèi)部，緊貼生物安全柜后壁，干擾圓筒下沿距生物安全柜工作臺面65mm～75mm。干擾圓筒的另一端伸出生物安全柜至少150mm。將四只空氣采樣器放到生物安全柜前方中間部位，使采樣器的空氣進氣口距生物安全柜前部開口平面150mm～160mm。兩只采樣器的進氣口與干擾圓筒頂部水平，并在前部開口中線兩側(cè)各距中線150mm;另外兩只采樣器的進氣口與前窗底沿平齊，在前部開口中線兩側(cè)各相距中線對于I級生物安全柜，要將氣溶膠發(fā)生器放到生物安全柜中間低于干擾圓筒的位置，使渦流盤的前沿位于前部開口平面之后100mm。對于Ⅱ級生物安全柜，使試驗支架上的氣溶膠發(fā)生器位于生物安全柜中間，渦流盤盤心在干擾圓筒上方正對干擾圓筒的中心，渦流盤的前沿位于前部開口平面之后100mm。調(diào)節(jié)發(fā)生器高度至渦流盤與前部開口頂沿水平。注：為了測試氣幕最薄弱的地方，I級和Ⅱ級生物安全柜的氣溶膠發(fā)生器的擺放位置有所不同。在每只空氣采樣器上安裝一塊過濾膜，依照廠家說明書調(diào)節(jié)每只采樣器的壓差至可產(chǎn)生100L/min的吸入氣流流量。C.5試驗步驟啟動生物安全柜，使其運行至正常操作狀態(tài)。使空氣采樣器吸氣，啟動渦流盤。等待15s后，使碘化鉀進入渦流盤中部，允許20mL的碘化鉀氣溶膠化。氣溶膠化結(jié)束15s后空氣采樣器停止吸氣。等到抽氣泵完全停下來后，移去過濾膜。將一只采樣器上取下的過濾膜放到盛有氯化鈀溶液的皮氏培養(yǎng)皿內(nèi)，暴露在氣流中的