ICS65.020.30CCSB44中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB14923—2022代替GB14923—2010實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳質(zhì)量控制Laboratoryanimal—Geneticqualitycontrol2022-12-29發(fā)布2023-07-01實(shí)施國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)IGB14923—2022本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替GB14923—2010《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物哺乳類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳質(zhì)量控制》'與GB14923—2010相比'除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動(dòng)外'主要技術(shù)變化如下:b)增加了應(yīng)用CRISPR/Cas9等技術(shù)制備基因修飾動(dòng)物的命名(見4.2.1.11);c)增加了微衛(wèi)星和SNP座位檢測(cè)法(見6.2.3)。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由中華人民共和國(guó)科學(xué)技術(shù)部提出并歸口。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為:—1994年首次發(fā)布為GB14923—1994'2010年第一次修訂;—本次是第二次修訂。1GB14923—2022實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳質(zhì)量控制1范圍本文件給出了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳分類及命名、繁殖方法'以及近交系、遠(yuǎn)交群、雜交群動(dòng)物的遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)。本文件適用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳質(zhì)量控制。2規(guī)范性引用文件本文件沒有規(guī)范性引用文件。3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。近交系inbredstrain一個(gè)動(dòng)物群體中'任何個(gè)體基因組中98.6%以上的座位為純合的品系。注:經(jīng)典近交系經(jīng)至少連續(xù)20代的全同胞兄妹交配培育而成。品系內(nèi)所有個(gè)體都可追溯到起源于第20代或以后代數(shù)的一對(duì)共同祖先。經(jīng)連續(xù)20代以上親子交配與全同胞兄妹交配有等同效果。近交系的近交系數(shù)3.2亞系substrain近交系內(nèi)各個(gè)分支。注:各個(gè)分支的動(dòng)物之間'因遺傳分化而產(chǎn)生差異。3.3重組近交系recombinantinbredstrain;RI由兩個(gè)近交系雜交后'經(jīng)連續(xù)20代以上兄妹交配育成的近交系。3.4重組同類系recombinantcongenicstrain;RC由兩個(gè)近交系雜交后'子代與兩個(gè)親代近交系中的一個(gè)進(jìn)行數(shù)次回交(通?；亟?次)'再經(jīng)不對(duì)特殊基因選擇的連續(xù)兄妹交配(通常大于14代)而育成的近交系。3.5同源突變近交系coisogenicinbredstrain除了某一個(gè)特定座位等位基因不同外'其他遺傳基因全部相同的兩個(gè)近交系。注:一般由近交系發(fā)生基因突變或者人工誘變(如基因剔除)形成。用近交代數(shù)表示出現(xiàn)突變的代數(shù)'如F110十F23'表示近交系在110代出現(xiàn)突變后再近交23代。3.6同源導(dǎo)入近交系congenicstrain同類系從供體品系中選擇一個(gè)特定標(biāo)記'通過回交方式形成的一個(gè)與原近交系只在一個(gè)很小染色體片段GB14923—2022上有所不同的近交系。注:隨機(jī)挑選后代至少回交10個(gè)世代'供體品系的基因組占基因組總量在1%以下。3.7染色體置換系consomicstrainsorchromosomesubstitutionstrains為把某一染色體全部導(dǎo)入到近交系中'反復(fù)進(jìn)行回交而育成的近交系。注:與同類系相同'將F1作為第1個(gè)世代'要求至少回交10個(gè)世代。3.8核轉(zhuǎn)移系conplasticstrains將某個(gè)品系的核基因組移到其他品系細(xì)胞質(zhì)后培育的品系。3.9混合近交系mixedinbredstrains由最多3個(gè)親本品系(其中一個(gè)是重組基因的ES細(xì)胞株)混合制作的近交系。互交系advancedintercrossli兩個(gè)近交系間繁殖到F2'采取非兄妹交配的互交方式所得到的多個(gè)近交系。注:由于其相近基因座位間的重組率較高而被應(yīng)用于突變基因的精細(xì)定位分析?；蛐揎梽?dòng)物geneticmodifiedanimals用基因修飾等技術(shù)手段對(duì)特定基因改造所獲得的動(dòng)物。注:包括轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、基因定位突變動(dòng)物等。遠(yuǎn)交群outbredstock為了維持群體的最大雜合度、以非近親交配方式進(jìn)行繁殖生產(chǎn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種群。不引進(jìn)外部動(dòng)物、在群體內(nèi)隨機(jī)選擇種動(dòng)物進(jìn)行繁殖'以維持有限雜合度的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種群。雜交群hybrids由兩個(gè)不同近交系雜交產(chǎn)生的后代群體。注:子一代簡(jiǎn)稱F1。4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳分類及命名4.1遺傳分類根據(jù)遺傳特點(diǎn)的不同'實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為近交系、遠(yuǎn)交群(封閉群)和雜交群。4.2命名4.2.1近交系近交系一般以大寫英文字母命名'亦可以用大寫英文字母加阿拉伯?dāng)?shù)字命名'符號(hào)應(yīng)盡量簡(jiǎn)短。如A系、TA1系等。23GB14923—20224.2.1.2近交代數(shù)近交系的近交代數(shù)用大寫英文字母F表示。例如當(dāng)一個(gè)近交系的近交代數(shù)為87代時(shí)'寫成(F87)。如果對(duì)以前的代數(shù)不清楚'僅知道近期的近交代數(shù)為25'可以表示為(F?十25)。4.2.1.3亞系的命名亞系的命名方法是在原品系的名稱后加一道斜線'斜線后標(biāo)明亞系的符號(hào)。亞系的符號(hào)可以是以下幾種。a)培育或產(chǎn)生亞系的單位或個(gè)人的縮寫英文名稱'第一個(gè)字母用大寫'以后的字母用小寫。使用縮寫英文名稱應(yīng)注意不要和已公布過的名稱重復(fù)。b)當(dāng)保持者保持的某個(gè)近交系具有兩個(gè)以上亞系時(shí)'可在數(shù)字后再加保持者的縮寫英文名稱來表示亞系。c)一個(gè)亞系在其他機(jī)構(gòu)保種'形成了新的群體'在原亞系后加注機(jī)構(gòu)縮寫。d)一些建立及命名較早'并為人們所熟知的近交系'亞系名稱可用小寫英文字母表示。示例:BALB/c、C57BR/cd等'作為以上命名方法的例外情況。4.2.1.4重組近交系和重組同類系命名4.2.1.4.1重組近交系的命名在兩個(gè)親代近交系的縮寫名稱中間加大寫英文字母X命名。相同雙親交配育成的一組近交系用阿拉伯?dāng)?shù)字予以區(qū)分'雌性親代在前'雄性親代在后。示例:由BALB/c與C57BL兩個(gè)近交系雜交育成的一組重組近交系'分別命名為CXB1、CXB2…如果雄性親代縮寫為數(shù)字'如CX8'為區(qū)分重組近交組'則用連接符表示為CX8-1、CX8-2…4.2.1.4.2重組同類系的命名在兩個(gè)親代近交系的縮寫名稱中間加小寫英文字母c命名'用其中做回交的親代近交系(稱受體近交系)在前'供體近交系在后。相同雙親育成的一組重組同類系用阿拉伯?dāng)?shù)字予以區(qū)分。示例:CcS1表示以BALB/c(C)為親代受體近交系'以STS(S)品系為供體近交系'經(jīng)2代回交育成的編號(hào)為1的重組同類系。如果雄性親代縮寫為數(shù)字'如Cc8'為區(qū)分不同重組同類組'則用連接符表示為Cc8-1。4.2.1.5同源突變近交系的命名在發(fā)生突變的近交系名稱后加突變基因符號(hào)(用英文斜體)組成'二者之間以連接號(hào)分開。當(dāng)突變基因必須以雜合子形式保持時(shí)'用“十”號(hào)代表野生型基因。示例1:DBA/Ha-D'表示DBA/Ha品系突變基因?yàn)镈的同源突變近交系。示例2:129S7/SVEVBrd-Fyntm1Sor表示用來源129S7/SVEVBrd品系的AB1ES細(xì)胞株制作的Fyn基因變異的同源突變系。示例3:A/Fa—十/c。4.2.1.6同源導(dǎo)入近交系(同類系)的命名由以下幾部分組成:a)接受導(dǎo)入基因(或基因組片段)的近交系名稱;b)提供導(dǎo)入基因(或基因組片段)的近交系的縮寫名稱'并與a之間用英文句號(hào)分開;c)導(dǎo)入基因(或基因組片段)的符號(hào)(用英文斜體)'與b之間以連字符分開;4GB14923—2022d)經(jīng)第三個(gè)品系導(dǎo)入基因(或基因組片段)時(shí)'用括號(hào)表示;e)當(dāng)染色體片段導(dǎo)入多個(gè)基因(或基因組片段)或座位'在括號(hào)內(nèi)用最近和最遠(yuǎn)的標(biāo)記表示出來。示例1:B10.129-H-12b表示該同源導(dǎo)入近交系的遺傳背景為C57BL/10sn(即B10)'導(dǎo)入B10的基因?yàn)镠-12b'基因提供者為129/J近交系。示例2:C.129P(B6)-Il2tm1Hor為經(jīng)過第三個(gè)品系B6導(dǎo)入的。示例3:B6.Cg-(D4Mit25-D4Mit80)/Lt導(dǎo)入的片段標(biāo)記為D4Mit25-D4Mit80。4.2.1.7染色體置換系的命名表示方法為HOSTSTRAIN-Chr#DONORSTRAIN'如C57BL/6J-Chr19SPR為M.spretus的第19染色體回交于B6的染色體置換系。4.2.1.8核轉(zhuǎn)移系的命名命名方法為NUCLEARGENOME-mtCyTOPLASMICGENOME'如:C57BL/6J-mtBALB/c指帶有C57BL/6J核基因組和BALB/c細(xì)胞質(zhì)的品系。這樣的品系是以雄的C57BL/6J小鼠和雌的BALB/c小鼠交配'子代雌鼠與C57BL/6J雄鼠反復(fù)回交10代而成。4.2.1.9混合近交系的命名混合近交系的命名分兩種情況:a)兩個(gè)品系縮寫之間用分號(hào)'如:B6;129-Acvr2tm1zuk為C57BL/6J和敲除Acvr2基因的129ES細(xì)胞株制作的品系;b)兩個(gè)以上親本品系制作的近交系'或者受不明遺傳因素影響的突變系'作為混合近交系'用STOCK空格后加基因或染色體異常來表示'如STOCKRb(16.17)5Bnr為具有Rb(16.17)5Bnr的、含有未知或復(fù)雜遺傳背景的混合系。4.2.1.10互交系的命名由實(shí)驗(yàn)室縮寫編碼:母系親本'父系親本—G#表示。4.2.1.11基因修飾動(dòng)物的命名基因修飾動(dòng)物包括轉(zhuǎn)基因、基因定位突變等動(dòng)物'其命名按照附錄A。4.2.2遠(yuǎn)交群和封閉群的命名遠(yuǎn)交群由2個(gè)~4個(gè)大寫英文字母命名'種群名稱前標(biāo)明保持者的英文縮寫名稱'第一個(gè)字母需大寫'后面的字母小寫'一般不超過4個(gè)字母。保持者與種群名稱之間用冒號(hào)分開。示例1:N:NIH'表示由縮寫為N的機(jī)構(gòu)保持的NIH遠(yuǎn)交群小鼠。某些命名較早'又廣為人知的遠(yuǎn)交群動(dòng)物'名稱與上述規(guī)則不一致時(shí)'仍可沿用其原來的名稱。示例2:wistar大鼠、ddy小鼠等。把保持者的縮寫名稱放在種群名稱的前面'而二者之間用冒號(hào)分開'是遠(yuǎn)交群動(dòng)物與近交系命名中最顯著的區(qū)別。除此之外'近交系命名中的規(guī)則及符號(hào)也適用于遠(yuǎn)交群動(dòng)物的命名。封閉群的命名組成包含了品系來源以及突變描述'再加上[cc]來表示封閉群。示例3:C57BL/6Tac-Bmp4tm1Blh[cc]表示了C57BL/6Tac近交系來源且攜帶Bmp4tm1Blh突變的封閉群。4.2.3雜交群的命名雜交群按以下方式命名:以雌性親代名稱在前'雄性親代名稱居后'二者之間以大寫英文字母“X”5GB14923—2022相連表示雜交。將以上部分用括號(hào)括起'再在其后標(biāo)明雜交的代數(shù)(如F1、F2等)。對(duì)品系或種群的名稱常使用通用的縮寫名稱。示例:(C57BL/6XDBA/2)F1=B6D2F1B6D2F2指B6D2F1同胞交配產(chǎn)生的F2;B6(D2AKRF1)指B6為雌性親代'與(DBA/2XAKR/J)的F1雄性親代回交所得。5實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的繁殖方法5.1近交系動(dòng)物的繁殖方法選擇近交系動(dòng)物繁殖方法的原則是保持近交系動(dòng)物的同基因性及其基因純合性。作為繁殖用原種的近交系動(dòng)物必須遺傳背景明確'來源清楚'有較完整的資料(包括品系名稱、近交代數(shù)、遺傳基因特點(diǎn)及主要生物學(xué)特征等)。引種動(dòng)物應(yīng)來自近交系的基礎(chǔ)群(foundationstock)或血緣擴(kuò)大群(pedigreeexpansionstock)。5.1.3近交系動(dòng)物的繁殖分為基礎(chǔ)群、血緣擴(kuò)大群和生產(chǎn)群(productionstock)。當(dāng)近交系動(dòng)物生產(chǎn)供應(yīng)數(shù)量不是很大時(shí)'一般不設(shè)血緣擴(kuò)大群'僅設(shè)基礎(chǔ)群和生產(chǎn)群。5.1.4基礎(chǔ)群5.1.4.1設(shè)基礎(chǔ)群的目的'一是保持近交系自身的傳代繁衍'二是為擴(kuò)大繁殖提供種用動(dòng)物。5.1.4.2基礎(chǔ)群嚴(yán)格以全同胞兄妹交配方式進(jìn)行繁殖。5.1.4.3基礎(chǔ)群應(yīng)設(shè)動(dòng)物個(gè)體記錄卡(包括品系名稱、近交代數(shù)、動(dòng)物編號(hào)、出生日期、雙親編號(hào)、離乳日期、交配日期、生育記錄等)和繁殖系譜。5.1.4.4基礎(chǔ)群動(dòng)物不超過5代~7代都應(yīng)能追溯到一對(duì)共同祖先。5.1.5血緣擴(kuò)大群5.1.5.1血緣擴(kuò)大群的種源來自基礎(chǔ)群。5.1.5.2血緣擴(kuò)大群以全同胞兄妹交配方式進(jìn)行繁殖。5.1.5.3血緣擴(kuò)大群動(dòng)物應(yīng)設(shè)繁殖記錄卡。5.1.5.4血緣擴(kuò)大群動(dòng)物繁殖3代后必須從基礎(chǔ)群重新引入新的種源。5.1.6生產(chǎn)群5.1.6.1設(shè)生產(chǎn)群的目的是生產(chǎn)供應(yīng)實(shí)驗(yàn)用近交系動(dòng)物'生產(chǎn)群種源來自基礎(chǔ)群或血緣擴(kuò)大群。5.1.6.2生產(chǎn)群動(dòng)物一般以隨機(jī)交配方式進(jìn)行繁殖。5.1.6.3生產(chǎn)群動(dòng)物應(yīng)設(shè)繁殖記錄卡。5.1.6.4生產(chǎn)群動(dòng)物隨機(jī)交配繁殖代數(shù)不應(yīng)超過4代。5.2遠(yuǎn)交群和封閉群動(dòng)物的繁殖方法選擇遠(yuǎn)交群動(dòng)物繁殖方法的原則是盡量保持遠(yuǎn)交群的動(dòng)物的基因異質(zhì)性及多態(tài)性'避免近交系數(shù)6GB14923—2022隨繁殖代數(shù)增加而過快上升。5.2.2引種作為繁殖用原種的遠(yuǎn)交群動(dòng)物應(yīng)遺傳背景明確'來源清楚'有較完整的資料(包括種群名稱、來源、遺傳基因特點(diǎn)及主要生物學(xué)特性等)。為保持遠(yuǎn)交群動(dòng)物的遺傳異質(zhì)性及基因多態(tài)性'引種動(dòng)物數(shù)量應(yīng)足夠多'小型嚙齒類遠(yuǎn)交群動(dòng)物引種數(shù)目大于或等于25對(duì)。5.2.3繁殖為保持遠(yuǎn)交群動(dòng)物的遺傳基因的穩(wěn)定'種群應(yīng)足夠大'并避免近親交配。根據(jù)遠(yuǎn)交群的大小'選用循環(huán)交配法等方法進(jìn)行繁殖。封閉群的繁殖方式同遠(yuǎn)交群。具體方法見附錄B。5.3雜交群的繁殖方法將適齡的雌性親代品系動(dòng)物與另一個(gè)品系雄性親代動(dòng)物雜交'即可得到F1動(dòng)物。雌雄親本交配順序不同'得到的F1動(dòng)物也不一樣。F1動(dòng)物自繁成為F2動(dòng)物。除特殊需要外F1動(dòng)物一般不進(jìn)行繁殖。6近交系動(dòng)物的遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)6.1近交系動(dòng)物的遺傳質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)近交系動(dòng)物應(yīng)符合以下要求:a)具有明確的品系背景資料'包括品系名稱、近交代數(shù)、遺傳組成、主要生物學(xué)特性等'并能充分表明新培育的或引種的近交系動(dòng)物符合近交系定義;b)用于近交系保種及生產(chǎn)的繁殖系譜及記錄卡應(yīng)清楚完整'繁殖方法科學(xué)合理;c)經(jīng)遺傳檢測(cè)(生化標(biāo)記'免疫標(biāo)記基因、DNA多態(tài)性檢測(cè)法等)質(zhì)量合格。6.2近交系小鼠、大鼠遺傳檢測(cè)方法及實(shí)施6.2.1生化標(biāo)記檢測(cè)對(duì)基礎(chǔ)群'凡在子代留有種鼠的雙親動(dòng)物都應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)生產(chǎn)群'按表1要求從每個(gè)近交系中隨機(jī)抽取成年動(dòng)物'雌雄各半'一般不超過30只。表1抽樣數(shù)量單位為只雌性種鼠數(shù)量(N)抽樣數(shù)量≤1006>100N×6%6.2.1.2生化標(biāo)記基因的選擇及常用近交系動(dòng)物的遺傳概貌近交系小鼠選擇位于10條染色體上的14個(gè)生化座位'近交系大鼠選擇位于6條染色體上的11個(gè)生7GB14923—2022化座位'作為遺傳檢測(cè)的生化標(biāo)記。以上生化標(biāo)記基因的名稱及常用近交系動(dòng)物的遺傳概貌見附錄C。6.2.1.3結(jié)果判斷按表2進(jìn)行結(jié)果判定。表2檢測(cè)結(jié)果的判定檢測(cè)結(jié)果判斷處理與標(biāo)準(zhǔn)遺傳概貌完全一致未發(fā)現(xiàn)遺傳變異'遺傳質(zhì)量合格 有一個(gè)座位的標(biāo)記基因與標(biāo)準(zhǔn)遺傳概貌不一致可疑增加檢測(cè)座位數(shù)目和增加檢測(cè)方法后重檢'確實(shí)只有一個(gè)標(biāo)記基因改變可命名為同源突變系兩個(gè)或兩個(gè)以上座位的標(biāo)記基因與標(biāo)準(zhǔn)遺傳概貌不一致不合格淘汰'重新引種6.2.2免疫標(biāo)記檢測(cè)6.2.2.1皮膚移植法:每個(gè)品系隨機(jī)抽取至少10只相同性別的成年動(dòng)物'進(jìn)行同系異體皮膚移植。移植全部成功者為合格'發(fā)生非手術(shù)原因引起的移植物的排斥判為不合格。6.2.2.2微量細(xì)胞毒法:按照6.2.1.1的抽樣數(shù)量檢測(cè)小鼠H-2單倍型'結(jié)果符合標(biāo)準(zhǔn)遺傳概貌的為合格'否則為不合格。6.2.3DNA多態(tài)性檢測(cè)法6.2.3.1微衛(wèi)星檢測(cè)法:按6.2.1.1抽樣數(shù)量和6.2.1.3判定原則'選擇合適的微衛(wèi)星座位檢測(cè)動(dòng)物'遺傳概貌見附錄D。6.2.3.2SNP檢測(cè)法:按6.2.1.1抽樣數(shù)量和6.2.1.3判定原則'選擇合適的SNP座位檢測(cè)動(dòng)物'遺傳概貌見附錄E。6.2.4其他方法除以上兩種方法外'還可選用其他方法進(jìn)行遺傳質(zhì)量檢測(cè)'如毛色基因測(cè)試(coatcolorgenetes-ting)、下頜骨測(cè)量法(mandiblemeasurement)、染色體標(biāo)記檢測(cè)(chromosomemarkerstesting)、基因組測(cè)序法(genomicsequence)等。6.3其他動(dòng)物遺傳檢測(cè)方法其他近交系動(dòng)物參照6.2建立遺傳檢測(cè)方法'小型豬的微衛(wèi)星座位信息見附錄F。6.4檢測(cè)時(shí)間間隔近交系動(dòng)物生產(chǎn)群每年至少進(jìn)行一次遺傳質(zhì)量檢測(cè)。7遠(yuǎn)交群動(dòng)物的遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)7.1遠(yuǎn)交群動(dòng)物的遺傳質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)遠(yuǎn)交群動(dòng)物應(yīng)符合以下要求:a)具有明確的遺傳背景資料'來源清楚'有較完整的資料(包括種群名稱、來源、遺傳基因特點(diǎn)及8GB14923—2022主要生物學(xué)特性等);b)用于保種及生產(chǎn)的繁殖系譜及記錄卡清楚完整'繁殖方法科學(xué)合理;c)封閉繁殖'保持動(dòng)物的基因異質(zhì)性及多態(tài)性'避免近交系數(shù)隨繁殖代數(shù)增加而過快上升;d)經(jīng)遺傳檢測(cè)[生化標(biāo)記基因檢測(cè)法'DNA多態(tài)性檢測(cè)法(DNAPolymorPhisms)等]基因頻率穩(wěn)定'下頜骨測(cè)量法(Mandiblemeasurement)判定為相同群體。7.2遠(yuǎn)交群動(dòng)物小鼠、大鼠遺傳檢測(cè)方法及實(shí)施7.2.1生化標(biāo)記基因檢測(cè)隨機(jī)抽取雌雄各25只以上動(dòng)物進(jìn)行基因型檢測(cè)。7.2.1.2生化標(biāo)記基因的選擇選擇代表種群特點(diǎn)的生化標(biāo)記基因'如小鼠選擇位于10條染色體上的14個(gè)生化座位'大鼠選擇位于6條染色體上的11個(gè)生化座位'作為遺傳檢測(cè)的生化標(biāo)記。7.2.1.3群體評(píng)價(jià)按照哈代-溫伯格(Hardy-weinberg)定律'無選擇的隨機(jī)交配群體的基因頻率保持不變'處于平衡狀態(tài)。根據(jù)各座位的等位基因數(shù)計(jì)算封閉群體的基因頻率'進(jìn)行X2檢驗(yàn)'判定是否處于平衡狀態(tài)。或者用群體內(nèi)遺傳變異采用平均雜合度指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)'當(dāng)平均雜合度在0.5~0.7時(shí)'且期望雜合度與觀測(cè)雜合度經(jīng)X2檢驗(yàn)無明顯差異時(shí)'群體為合格。處于非平衡狀態(tài)的群體應(yīng)加強(qiáng)繁殖管理'避免近交。7.2.2微衛(wèi)星和SNP檢測(cè)法按6.2.1.1數(shù)量進(jìn)行抽樣。7.2.2.2座位的選擇選擇能夠代表種群遺傳特征的座位進(jìn)行檢測(cè)'見附錄D。7.2.2.3群體評(píng)價(jià)7.2.3其他方法除以上方法外'還可選用其他方法進(jìn)行群體遺傳質(zhì)量檢測(cè)'如下頜骨測(cè)量法、DNA多態(tài)性檢測(cè)法以及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析法等。統(tǒng)計(jì)項(xiàng)目包括生長(zhǎng)發(fā)育、繁殖性狀、血液生理和生化指標(biāo)等多種參數(shù)'通過連續(xù)監(jiān)測(cè)把握群體的正常范圍。7.3他動(dòng)物遺傳檢測(cè)方法其他動(dòng)物根據(jù)遺傳特性'參照6.2建立遺傳檢測(cè)方法。小型豬和長(zhǎng)爪沙鼠的微衛(wèi)星標(biāo)記基因見附錄F和附錄G;檢測(cè)數(shù)量100以下'不少于15頭(只)'100以上群體不少于30頭(只)。7.4檢測(cè)時(shí)間間隔遠(yuǎn)交群動(dòng)物每年至少進(jìn)行1次遺傳質(zhì)量檢測(cè)。9GB14923—20227.5封閉群動(dòng)物遠(yuǎn)交群動(dòng)物的遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)方法也適用于封閉群動(dòng)物。8雜交群動(dòng)物的遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)由于F1動(dòng)物遺傳特性均一'不進(jìn)行繁殖而直接用于試驗(yàn)'一般不對(duì)這些動(dòng)物進(jìn)行遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)'需要時(shí)參照近交系的檢測(cè)方法進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)測(cè)。10GB14923—2022附錄A(規(guī)范性)基因修飾動(dòng)物A.1分類與定義用基因修飾等技術(shù)手段對(duì)特定基因改造所獲得的動(dòng)物。主要分為轉(zhuǎn)基因、基因定位突變等。以小鼠為例定義如下:示例1:轉(zhuǎn)基因小鼠(transgenicmouse)通過原核顯微注射、電轉(zhuǎn)或逆轉(zhuǎn)錄病毒感染等方式將DNA片段隨機(jī)整合或插入到目的小鼠的基因組中形成的小鼠。示例2:基因定位突變小鼠(mousewithtargetedmutations)通過同源重組或核酸酶(如ZFN、TALEN或CRISPR等)介導(dǎo)的對(duì)特定靶基因位點(diǎn)進(jìn)行破壞、置換或插入外源序列而建立的小鼠。A.2命名A.2.1轉(zhuǎn)基因動(dòng)物命名轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的命名遵循以下原則:背景品系加連接符加轉(zhuǎn)基因符號(hào)。符號(hào):一個(gè)轉(zhuǎn)基因符號(hào)由以下三部分組成'均以羅馬字體表示:Tgx(YYYYYY)#####ZZZ'其中各部分符號(hào)表示含意為:Tgx=方式(mode)(YYYYYY)=插入片段標(biāo)示(insertdesignation)#####=實(shí)驗(yàn)室指定序號(hào)(laboratory-assignednumber)及ZZZ=實(shí)驗(yàn)室注冊(cè)代號(hào)(laboratorycode)以上各部分具體含意及表示如下:a)方式轉(zhuǎn)基因符號(hào)通常冠以Tg字頭'代表轉(zhuǎn)基因(transgene)。隨后的一個(gè)字母(x)表示DNA插入的方式:H代表同源重組'R代表經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄病毒載體感染的插入'N代表非同源插入。b)插入片段標(biāo)示插入片段標(biāo)示是由研究者確定的表明插入基因顯著特征的符號(hào)。通常由放在圓括號(hào)內(nèi)的字符組成:可以是字母(大寫或小寫)'也可由字母與數(shù)字組合而成'不用斜體字'上標(biāo)、下標(biāo)、空格及標(biāo)點(diǎn)等符號(hào)。研究者在確定插入標(biāo)示時(shí)'應(yīng)注意:標(biāo)示應(yīng)簡(jiǎn)短'一般不超過6個(gè)字符。如果插入序列源于已經(jīng)命名的基因'在插入標(biāo)示中使用基因的標(biāo)準(zhǔn)命名或縮寫'但基因符號(hào)中的連字符應(yīng)省去。確定插入片段指示時(shí)'使用一些標(biāo)準(zhǔn)的命名縮寫'目前包括:An匿名序列Ge基因組Im插入突變Nc非編碼序列RP報(bào)告基因11GB14923—2022sn合成序列Et增強(qiáng)子捕獲裝置pt啟動(dòng)子捕獲裝置插入片斷標(biāo)示只表示插入的序列'并不表明其插入的位置或表型。c)實(shí)驗(yàn)室指定序號(hào)及實(shí)驗(yàn)室注冊(cè)代號(hào)實(shí)驗(yàn)室指定序號(hào)是由實(shí)驗(yàn)室對(duì)已成功的轉(zhuǎn)基因系給予的特定編號(hào)'最多不超過5位數(shù)字。而且'插入片斷標(biāo)示的字符與實(shí)驗(yàn)室指定序號(hào)的數(shù)字位數(shù)之和不能超過11。實(shí)驗(yàn)室注冊(cè)代號(hào)是對(duì)從事轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究生產(chǎn)的實(shí)驗(yàn)室給予的特定符號(hào)。示例:C57BL/6J-TgN(CD8Ge)23Jwg來源于J實(shí)驗(yàn)室的C57BL/6品系小鼠被轉(zhuǎn)入人的CD8基因組(Ge);轉(zhuǎn)基因在JonW.Gordon(Jwg)實(shí)驗(yàn)室完成'獲取于一系列顯微注射后得到的序號(hào)為23的小鼠。TgN(Gp-DHIm)1Bir是以人的甘油磷酸脫氫酶基因(GpDH)插入(C57BL/6JXsJL/J)F1代雌鼠的受精卵中'并引起插入突變(Im)'這是EdwardH.Birkenmeier(Bir)實(shí)驗(yàn)室命名的第一只轉(zhuǎn)基因小鼠。根據(jù)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物命名的原則'如果轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的遺傳背景是由不同的近交系或封閉群之間混合而成時(shí)'則以sTOCK表示未知的背景或2個(gè)以上親代品系。轉(zhuǎn)基因符號(hào)的縮寫:轉(zhuǎn)基因符號(hào)可以縮寫'即去掉插入片斷標(biāo)示部份'例如TgN(GpDHIm)1Bir可縮寫為TgN1Bir。一般第一次出現(xiàn)時(shí)使用全稱'其后再次出現(xiàn)時(shí)可使用縮寫名稱。A.2.2基因定位突變動(dòng)物的命名原則:背景品系—基因名tm/em[實(shí)驗(yàn)室序號(hào)][實(shí)驗(yàn)室代號(hào)]'其中tm/em為定位突變基因'是targetmutation的縮寫'em是endonuclease-mediatedmutation的縮寫。示例1:B6/N-Ctnnb1tm1C(s45p)/Gtp為C57BL/6N小鼠背景上完成'Ctnnb1是基因名稱'tm后面的數(shù)字代表founder鼠的編號(hào)'(s45p)表明在Ctnnb1基因處敲入的突變基因'Gtp是實(shí)驗(yàn)室注冊(cè)代碼。示例2:NOD-prkdcem26Cd52/Gtp、NOD-prkdcem26Td52/Gtp、NOD-prkdcem26Zd52/Gtp'其中'在NOD/shiLtJ背景上完成'prkdc是基因名稱;且上角標(biāo)中大寫C代表Cas9方法制作'大寫T代表Talen方法制作'大寫Z代表ZFN方法制作'em后面的數(shù)字代表founder鼠的編號(hào)'Gtp是實(shí)驗(yàn)室注冊(cè)代碼。此外'通常d代表deletion'in代表insert'd或in后面的數(shù)字代表敲除或者敲入片段的大小。A.3鑒定與質(zhì)量控制A.3.1轉(zhuǎn)基因動(dòng)物A.3.1.1陽性動(dòng)物的鑒定通過pCR、DNA印跡等檢測(cè)方法確認(rèn)陽性基因在子代動(dòng)物中整合成功。經(jīng)鑒定為陽性的小鼠成為首建鼠(founder)。將首建鼠與野生型小鼠交配'檢測(cè)子代中攜帶轉(zhuǎn)基因序列的為陽性鼠'子代陽性鼠繼續(xù)與野生型小鼠交配傳代'轉(zhuǎn)基因小鼠以雜合方式繁育保種。每一只首建鼠來源的后代作為一個(gè)系(Line)'同一轉(zhuǎn)基因的不同首建鼠來源的后代不相互交配。A.3.1.3外源基因的表達(dá)鑒定外源基因的穩(wěn)定表達(dá)是轉(zhuǎn)基因成功的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一'采用RT-pCR、Northern雜交、Westernblot及免疫組化等方法確認(rèn)外源基因的表達(dá)。明確表達(dá)的靶器官(細(xì)胞)、表達(dá)水平。GB14923—2022A.3.1.4質(zhì)量控制在建系過程需要檢測(cè)每代陽性鼠'確認(rèn)轉(zhuǎn)入基因在后代中穩(wěn)定遺傳。選擇純合子或雜合子交配的方式進(jìn)行繁殖'同時(shí)檢測(cè)靶器官表達(dá)水平'確保轉(zhuǎn)基因的穩(wěn)定表達(dá)和遺傳。同一個(gè)轉(zhuǎn)基因系至少連續(xù)檢測(cè)3代'確認(rèn)遺傳及表達(dá)的穩(wěn)定性。A.3.2基因定位突變動(dòng)物通過分子生物學(xué)技術(shù)(southernbolt'PCR或測(cè)序等)檢測(cè)純合子或雜合子小鼠靶位點(diǎn)突變'選用純合子或雜合子進(jìn)行建系繁殖'建立突變品系。12GB14923—2022附錄B(資料性)遠(yuǎn)交群的繁殖方法B.1基本要求保持遠(yuǎn)交群條件'無選擇'以非近親交配方式進(jìn)行繁殖'每代近交系數(shù)上升不超過百分之一。B.2方法的選擇遠(yuǎn)交群的種群大小、選種方法及交配方法是影響遠(yuǎn)交群的繁殖過程中近交系數(shù)上升的主要因素'應(yīng)根據(jù)種群的大小'選擇適宜的繁殖交配方法。具體方法如下:a)當(dāng)遠(yuǎn)交群中每代交配的雄種動(dòng)物數(shù)目為10只~25只時(shí)'一般采用最佳避免近交法'也可采用循環(huán)交配法;b)當(dāng)遠(yuǎn)交群中每代交配的雄種動(dòng)物數(shù)目為26只~100只時(shí)'一般采用循環(huán)交配法'也可采用最佳避免近交法;c)當(dāng)遠(yuǎn)交群中每代交配的雄種動(dòng)物數(shù)目多于100只時(shí)'一般采用隨選交配法'也可采用循環(huán)交配法。B.3交配方法B.3.1最佳避免近交法每只雄種動(dòng)物和每只雌種動(dòng)物'分別從子代各留一只雄性動(dòng)物和雌性動(dòng)物'作為繁殖下一代的種動(dòng)物。動(dòng)物交配時(shí)'盡量使親緣關(guān)系較近的動(dòng)物不配對(duì)繁殖'編排方法盡量簡(jiǎn)單易行。a)對(duì)某些動(dòng)物品種'如小鼠'大鼠等'生殖周期較短'易于集中安排交配'可按下述方法編排配對(duì)進(jìn)行繁殖:假設(shè)一個(gè)遠(yuǎn)交群有16對(duì)種動(dòng)物'分別標(biāo)以籠號(hào)1、2、3、…、16。設(shè)n為繁殖代數(shù)(n為自1開始的自然數(shù))。n代所生動(dòng)物與n十1代交配編排見表B.1。表B.1最佳避免近交法的交配編排n十1代籠號(hào)雌種來自n代籠號(hào)雄種來自n代籠號(hào)112234356::::::8151692110431314GB14923—2022表B.1最佳避免近交法的交配編排(續(xù))n十1代籠號(hào)雌種來自n代籠號(hào)雄種來自n代籠號(hào)::::::161615b)某些動(dòng)物品種如犬、貓、家兔等'生殖周期較長(zhǎng)'難于按上述方式編排交配。只要保持種群規(guī)模不低于10只雄種'20只雌種的水平'留種時(shí)每只雌、雄種各留一只子代雌、雄動(dòng)物作種'交配時(shí)盡量避免近親交配'則可以把繁殖中每代近交系數(shù)的上升控制在較低的程度。B.3.2循環(huán)交配法B.3.2.1應(yīng)用范圍循環(huán)交配法廣泛適用于中等規(guī)模以上的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遠(yuǎn)交群'其優(yōu)點(diǎn)一是可以避免近親交配'二是可以保證種動(dòng)物對(duì)整個(gè)遠(yuǎn)交群有比較廣泛的代表性。B.3.2.2實(shí)施辦法循環(huán)交配實(shí)施辦法如下:a)將遠(yuǎn)交群劃分成若干個(gè)組'每組包含有多個(gè)繁殖單位(一雄一雌單位'一雄二雌單位'一雄多雌單位等);b)安排各組之間以系統(tǒng)方法進(jìn)行交配。示例:一遠(yuǎn)交群每代有48籠繁殖用種動(dòng)物(一雄一雌'或一雄多雌)。先將其分成8個(gè)組'每組有6籠。各組內(nèi)隨機(jī)選留一定數(shù)量的種動(dòng)物'然后在各組之間按以下排列方法進(jìn)行交配'見表B.2。表B.2循環(huán)交配法組間交配編排新組編號(hào)雄種動(dòng)物原組編號(hào)雌種動(dòng)物原組編號(hào)112234356478521643765887B.3.3隨選交配法B.3.3.1應(yīng)用范圍當(dāng)遠(yuǎn)交群的動(dòng)物數(shù)量非常多(繁殖種動(dòng)物在100個(gè)繁殖單位以上)'不易用循環(huán)交配法進(jìn)行繁殖時(shí)'可用隨選交配法。B.3.3.2實(shí)施辦法從整個(gè)種群中隨機(jī)選取種動(dòng)物'然后任選雌雄種動(dòng)物交配繁殖。15GB14923—2022(資料性)常用近交系小鼠、大鼠的遺傳生化標(biāo)記基因C.1常用近交系小鼠的遺傳標(biāo)記基因'見表C.1。表C.1常用近交系小鼠的遺傳標(biāo)記基因遺傳標(biāo)記主要近交系小鼠的標(biāo)記基因生化座位染色體中文名稱AAKRC3H/HeC57BL/6CBA/JAkp11堿性磷酸酶-1bbbaaCar23碳酸酐酶-2bababCe217過氧化氫酶-2abbabEs18酯酶-1bbbabEs311酯酶-3cccacEs1014酯酶-10abbabGpd14葡萄糖-6-磷酸脫氫酶-1bbbabGpi17葡萄糖磷酸異構(gòu)酶-1aabbbHbb7血紅蛋白β鏈dddsdIdh11異檸檬酸脫氫酶-1abaabMod19蘋果酸酶-1ababbpgm15磷酸葡萄糖變位酶-1aabaapep31肽酶-3bbbabTrf9轉(zhuǎn)鐵蛋白bbbbaH-2D17組織相容性抗原-2D kkbkH-2K17組織相容性抗原-2K kkbk遺傳標(biāo)記主要近交系小鼠的標(biāo)記基因生化座位染色體中文名稱BALB/cDBA/1DBA/2TA1/TMTA2615Akp11堿性磷酸酶-1baabbaCar23碳酸酐酶-2babbaaCe217過氧化氫酶-2ababbbEs18酯酶-1bbbabbEs311酯酶-3accaccEs1014酯酶-10abbbaaGpd14葡萄糖-6-磷酸脫氫酶-1babbbbGpi17葡萄糖磷酸異構(gòu)酶-1aaaabaHbb7血紅蛋白β鏈dddsdsIdh11異檸檬酸脫氫酶-1abbaaaMod19蘋果酸酶-1aaabbbpgm15磷酸葡萄糖變位酶-1abbabbpep31肽酶-3abbcbaTrf9轉(zhuǎn)鐵蛋白bbbbbbH-2D17組織相容性抗原-2DdqdbbkH-2K17組織相容性抗原-2Kdqdbbk16GB14923—2022C.2常用近交系大鼠的生化標(biāo)記基因'見表C.2。表C.2常用近交系大鼠的生化標(biāo)記基因遺傳標(biāo)記主要近交系大鼠的標(biāo)記基因生化座位染色體中文名稱ACIBNF344LEW/MLOU/CSHRWKYAKP19堿性磷酸酶-1baaaaabAlP9血清堿性磷酸酶bbbbbabCs12過氧化氫酶aaaaabbEs119酯酶-1baaaaaaEs311酯酶-3adadabdEs419酯酶-4bbbbbabEs68酯酶-6bbaabaaEs819酯酶-8babbbbaEs919酯酶-9acacaacEs1019酯酶-10abaaaabHbb1血紅蛋白baabaaa17GB14923—2022附錄D(資料性)常用小鼠、大鼠的微衛(wèi)星座位信息D.1常見近交系小鼠微衛(wèi)星座位'見表D.1。表D.1常見近交系小鼠微衛(wèi)星座位座位片段大小/bpC57BL/6JBALB/CJT739SCIDDBA/2FVBNCPC/2D1Mit3659292104~1081041049292D2Mit15140140158140140170160D3Mit29144196144144~202180144144D4Mit235112969696969696D5Mit48202196208198204198196D6Mit102141131139131121171135D7Mit281110136136136136136136D8Mit33224222222226216224224D9Mit23206204208204204208204D10Mit12237237237237237215237D11Mit4251245251245285251295D12Mit7106122106~122106106~120106106~122D13Mit3162188172188196188196D15Mit5959511195111111111D16Mit9143123131123123123111~131D17Mit11169145169145145173169D18Mit19154160154152156158158D19Mit16132132132~135132114128132DXMit161118993931079393D6Mit8163185173185143~185143~185149~185D6Mit15252194152194152152252D7Mit12201201233201207201211D8Mit14138162138138~162162134134D9Mit21193193193193179179193D12Nds11169~174179179174~179179179179D14Mit3226226226226226226226D15Mit15158158158158144144150D17Nds3136114156~158118122114132D18Mit9166156164156156166156D19Mit3197~201197~201197197~201197~207197~20121518GB14923—2022D.2常見近交系大鼠微衛(wèi)星引物序列及常見品系帶型'見表D.2o表D.2近交系大鼠微衛(wèi)星引物序列及常見品系帶型引物名稱序列(5l-3l)常用品系帶型LewisBNF344D3WOX9(F)TTCAGGTATGATTCGGGAACbbaATTGGCGATATCATTTCACTAACAPOC3(F)GATTTGAAGCGATTGTCCATbabGTCTAGCTGCCCACAGGAGD11mgh3(F)GGAGCTGAAATACGAGAGAAATAAacbGTCCTGCTGGCTGTGCATD12Mit2(F)GTGGCTCTTTTCCTTAGGGAbbaTCGGCTTCTGAATGTATTGGRATIL6G(F)ACTCTACAAGGACCAGAAAGTGaabGCATCTTAGCTGGGCTGACCPA2S(F)AGTGTTGCCCTCCTATGCATACabbAGAACATGCTGTTGTCAGGCTC注:按泳動(dòng)快慢將條帶依次命名為a、b、c…帶'泳動(dòng)最快的命名為a帶oD.3遠(yuǎn)交群大鼠微衛(wèi)星座位'見表D.3o表D.325個(gè)遠(yuǎn)交群大鼠微衛(wèi)星引物序列序號(hào)座位引物序列(5l-3l)染色體1D1Rat345TTCACACAAATGCCACCAGT1CAAAGAGATAGGGCGACAGG2D1Mgh14CCGCACTGAGCTCTCAGAG1CCCAACCATTGAGCTAGTAAGG3D2WOX15GGTGCTAGTAGACAATAAGATAGAT2TTCATGAGTTTTCACTGTTTGC4D2Mgh26ATTGGTGATCAGATTTTTTTCTCC2CCCAACCATTGAGCTAGTAAGG5D3WOX9TTCAGGTATGATTCGGGAAC3ATTGGCGATATCATTTCACTAAC6D4Arb10ACTCATCTTCTGAGGAGTAGCG4TTCACAGTCTATTTGGTAGGGC7D4Mit15CCTAATGACAGCAATAGAAACTACG4TTTTGGTACTGGAGAAAGTTGGGB14923—2022表D.325個(gè)遠(yuǎn)交群大鼠微衛(wèi)星引物序列(續(xù))序號(hào)座位引物序列(5/-3/)染色體8D5Hmgc2ATGTTCCCTGATGTCCCTTC5AAACCATGCCACGTGAAC9D6Mit1TTAGGAGAGAACTGAAAGTTGTCC6ATGGTGCACTATGGTGGTCA10D7Mgh3CGGCATGTGTCTCTGTGTG7TGACTTCTGGTGTCCTCACG11D8Rat14GGCCGGTCTAATTATTTCTTCA8GCCCATACGTTGCATCAAGT12D9Mit2TGACCAGTTAGCCCTTTCCA9GGGAGCAGGGTTCTACACAG13D10wox12CGCTGGGAGGAAAGAGAG10AGGCTTGCACTCTGTGTTTG14D11Mgh3GGAGCTGAAATACGAGAGAAATAA11GTCCTGCTGGCTGTGCAT15D11wox3CACTTTGAGGCCATTCTGAA11CCTTCTCTTTGTGAAAAATAAAGTC16D12Mit2GTGGCTCTTTTCCTTAGGGA12TCGGCTTCTGAATGTATTGG17LCATACAGAGCAAGCTCCAGGAC13TGTTTCTAATCCATAGGAAGTGC18ALBTTTTCGTAGTAACGGAAGCC14TAAGGATTCTCAGATGCAAATG19D15Mit3GACCTGACCTGTTGTGGGAT15GTTGCTCTCTGGCCTCCTC20MBPAACCTACACGGACACATGGTG16GTTGTACTTCCTGATTTCCCTTT21ACRMAGGAAATTAAGAGAAGTTGGGACT17TATGCTCTTTGGGCAGCTTA22TILPAATCACTGGATGCTGGAAGA18AGGGAGCAGAACTACTAAAGATACA23AGTTATGTAACTCAACGCCAGCC19TAAGGATTCTCAGATGCAAATG24TNFAGGAAATGGGTTTCAGTTCC20CAGGATTCTGTGGCAATCTG25PRPS2GTTTTCCCGCTTCACCAGXAGAAGGAGAAAGCGACCG1920GB14923—2022附錄E(資料性)常用近交系小鼠SNP標(biāo)記基因常用近交系小鼠SNP標(biāo)記基因'見表E.1。表E.1常用近交系小鼠SNP標(biāo)記基因序號(hào)染色體SNP標(biāo)記基因C57BL/6JBALB/CCBA/JC3H/HeJ11AF-067836350A1--TATT21M223811692--TTTC32M-090111-AACC43M-027071-TTCC54 M-016091 CTTT65 M-021872 GGTT75M-052333-AAAA86M-020941-GTTT97M-057821-TGGG108M-115592-CAAA119M-055371-AAGA129 M-048191 TCCC1310 M-095262 TGTT1410 M-057991 GGGG1511M-089241-ACAC1611M-057271-TCCC1712M-074033-TCCC1813M688961511--CTTT1913M-054952-TGGG2014 M-072511 TTTT2115 M-076461 GGAA2216 M-013222 ATTA2317 M-046591 AAGG2417AF0278651-TCCC2518M-098441-GAGG2619M-021621-GAAG27XM-058101-TTCT28808-015199792-MTC—C291111-004367508-MGAAA301313-041017317-MTCC 311515-057561875-MA G321919-049914266-MG 33101-032174982-MGT 34404-063116157-MTC—T351818-064780780-MGA—G附錄F（資料性）小型豬微衛(wèi)星標(biāo)記基因GBF.1實(shí)驗(yàn)用五指山小型豬近交系、廣西巴馬小型豬和貴州小型豬近交系培育過程中，遺傳質(zhì)量控制的微衛(wèi)星座位及優(yōu)勢(shì)等位基因，見表F.1。GB群體等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%CGASW769SW857SW240SW72SW24五指山小型豬近交系五指山小型豬近交系等位基因頻率合計(jì)廣西巴馬小型豬廣西巴馬小型豬等位基因頻率合計(jì)GBGB表F.1實(shí)驗(yàn)用五指山小型豬近交系、廣西巴馬小型豬和貴州小型豬近交系培育過程中，遺傳質(zhì)量控制的微衛(wèi)星座位及優(yōu)勢(shì)等位基因（續(xù)）群體等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%等位基因bp座位%CGASW769SW857SW240SW72SW24貴州小型豬貴州小型豬等位基因頻率合計(jì)23GB14923—2022F.2各微衛(wèi)星座位的引物序列、染色體位置、最佳擴(kuò)增條件、等位基因數(shù)及等位基因分布范圍'見表F.2o表F.2各微衛(wèi)星座位的引物序列、染色體位置、最佳擴(kuò)增條件、等位基因數(shù)及等位基因分布范圍座位引物序列(5l-3l)所在染色體鎂離子濃度mmol/L退火溫度℃等位基因數(shù)等位基因范圍SW974GGTGAAGTTTTTGCTTTGAACCGAAAGAAATCCAAATCCAAACC12.05817129~175S0091TCTACTCCAGGAGATAAGCCAGATCAGTGACTCCATGCACAGTTATGA2551496~174SW240AGAAATTAGTGCCTCAAATTGGAAACCATTAAGTCCCTAGCAAA2581192~114SW1066GCAGGATGAACCACCCTGCTCTTGAGGCAACCTGCTG32.06019166~214SW1089TTTTCCCCTTCACTCACCCGATCAAAGTCCCTTACTCCGG45810142~190S0005TCCTTCCCTCCTGGTAACTAGCACTTCCTGATTCTGGGTA52.05411204~244SW1057TCCCCTGTTGTACAGATTGATGTCCAATTCCAAGTTCCACTAGC62.05814142~191SW632TGGGTTGAAAGATTTCCCAAGGAGTCAGTACTTTGGCA72.0549148~173OPNCCAATCCTATTCACGAAAAAGCCAACCCACTTGCTCCCAC82.05912138~170SW29AGGGTGGCTAAAAAAGAAAAGGATCAAATCCTTACCTCTGCAGC82.06112133~187SW911CTCAGTTCTTTGGGACTGAACCCATCTGTGGAAAAAAAAAGCC92.06014151~178SW511AAGCAGGAATCCCTGCATCCCCAGCCACCAGTCTGAC96212161~196SWr158TCCAATTCAACTCCTGGCTCGAATGTGCACATACCACATGC102.06018158~200SW951TTTCACAACTCTGGCACCAGGATCGTGCCCAAATGGAC105814108~142SW271TTCCAGTGGCTTTCTGTGCCATTCATTCCCAGTGAAACTTG35813111~144S0386TCCTGGGTCTTATTTTCTATTTTTATCTCCAACAGTAT112.04812155~178S0068CCTTCAACCTTTGAGCAAGAACAGTGGTCTCTCTCCCTCTTGCT132.06210210~25624GB14923—2022表F.2各微衛(wèi)星座位的引物序列、染色體位置、最佳擴(kuò)增條件、等位基因數(shù)及等位基因分布范圍(續(xù))座位引物序列(5/-3/)所在染色體鎂離子濃度mmol/L退火溫度℃等位基因數(shù)等位基因范圍Swr1008ACAGCCACCAACAGTGTTTGGAACTTCCATATGCTGCAAGTG132.0621698~256S0007TTACTTCTTGGATCATGTCGTCCCTCCTCATAATTTCTG142.05415142~192Sw857TGAGAGGTCAGTTACAGAAGACCGATCCTCCTCCAAATCCCAT142.05816129~173Swr312ATCCGTGCGTGTGTGCATCTGGTGGCTACAGTTCCGAT156411116~136Sw81GGGGCTCTCAGGAAGGAG16608128~144Swr1120CAAATGGAACCCATTACAGT