輸血科試劑質量管理操作規(guī)程1、目的本文件規(guī)定了輸血科所用試劑質量控制的相關操作程序，以確保輸血科試驗的質量，使檢驗結果更準確。2、適用范圍本文件適用于醫(yī)院輸血科ABO血型、RhD血型、鹽水交叉配血、凝聚胺交叉配血、柱凝膠法血型鑒定及交叉配血，新生兒溶血篩查試驗，抗人球蛋白試驗等試驗項目檢驗過程的質量控制管理。3、職責輸血科技術人員負責本實驗室所用試劑質量的管理。4、內容：4.1ABO試劑紅細胞質控4.1.1物理檢查：參照質量標準要求，逐項肉眼觀察并記錄。4.1.2抗原性檢測：⑴材料和試劑：待檢紅細胞；抗A、抗B試劑血清。⑵方法：將試管排成2列，每列9支。第1管加0.2ml待檢血清，自第2管起每管加生理鹽水0.2ml，將血清倍比稀釋，加入相應的試劑紅細胞懸液0.2ml，同時做紅細胞懸液對照。置于18～22℃孵育15分鐘，3400轉/分離心15秒，肉眼觀察。⑶結果：A型紅細胞應與1：128倍稀釋的抗A出現(xiàn)明顯肉眼可見凝集，B型紅細胞應與1：64倍稀釋的抗B出現(xiàn)明顯肉眼可見凝集。⑷抗原性要求：與1：128倍稀釋的抗A出現(xiàn)肉眼可見凝集，與1：64倍稀釋的抗B出現(xiàn)明顯肉眼可見凝集。4.1.3特異性檢測：⑴材料和試劑：待檢紅細胞；抗A、抗B試劑血清。⑵方法：按每列5支試管排成4列，第1、3列加抗A試劑血清0.1ml，第2、4列加抗B試劑血清0.1ml。在第1列試管中加入A型待檢紅細胞0.1ml，第2列試管中加入B型待檢紅細胞0.1ml，第3、4列試管中加入O型待檢紅細胞0.1ml，同時做紅細胞懸液對照。置于18～22℃孵育15分鐘，3400轉/分離心15秒，肉眼觀察。⑶結果見下表：ABO血型抗體特異性檢測結果表待檢血清標準紅細胞凝集不凝集抗-AA、ABB、O抗-BB、ABA、O待檢血清與相應紅細胞的凝集應符合上表中要求，不得發(fā)生溶血。⑷特異性要求：A型紅細胞與抗-A凝集，與抗-B不凝集；B型紅細胞與抗-B凝集，與抗-A不凝集；O型紅細胞與抗-A、抗-B均不凝集。4.1.4質控頻率：每批1次，每次隨機抽檢1盒檢測。4.2抗A、抗B試劑血清質量控制方法：4.2.1抗A、抗B標準效價檢測：⑴材料和試劑：待檢血清，A1,B型試劑紅細胞（5%）。⑵方法：按每列9支試管排成2列，第1管加0.2ml待檢血清自第2管起每管加生理鹽水0.2ml，將血清倍比稀釋，加入相應的試劑紅細胞懸液0.2ml，同時做紅細胞懸液對照。置于18～22℃孵育15分鐘，3400轉/分離心15秒，肉眼觀察。⑶結果：抗體效價以產生“+”凝集的待檢血清最高稀釋度計算，不計紅細胞懸液體積。兩列試管終點相同作為待檢血清凝集效價，并應符合以下要求，如兩列終點相差一管，且效價均符合要求，則以凝集效價低的為終點；如兩列終點相差一管，有一列效價不符合要求，則取雙倍量待檢血清復試。⑷抗體效價質量要求：抗A效價不應低于128，抗B效價不應低于128。4.2.2抗A、抗B試劑血清特異性檢測⑴材料和試劑：待檢血清；A1、B、O、AB型試劑紅細胞（5%）。⑵方法：按每列5支試管排成2列，各管加待檢血清0.1ml。在各試管中分別加入A1、B、O、AB型試劑紅細胞（5%）0.1ml，同時做紅細胞懸液對照。置于18～22℃孵育15分鐘，3400轉/分離心15秒，肉眼觀察。⑶結果：結果見下表ABO血型抗體特異性檢測結果表待檢血清標準紅細胞凝集不凝集抗-AA1、ABB、O抗-BB、ABA、O待檢血清與相應紅細胞的凝集應符合上表中要求，不得發(fā)生溶血。⑷特異性要求：抗-A與A、AB紅細胞凝集，與B、O紅細胞不凝集，抗-B與B、AB細胞凝集，與A、O細胞不凝集。4.2.3抗A、抗B試劑血清親和力檢測⑴材料和試劑：待檢血清；A1、A2、B型試劑紅細胞（10%），要求至少3人份同型紅細胞混合配制。⑵方法：在玻片上加待檢血清0.05ml，加入等體積的相應的10%紅細胞懸液，充分混勻，面積直徑要求10mm以上。立即記錄肉眼可見的凝集時間和3分鐘時的凝塊大小。⑶結果：在3分鐘時的凝塊直徑≥1mm?？笰血清與A1紅細胞反應，出現(xiàn)凝集時間不超過15秒，與A2紅細胞反應不超過30秒?？笲血清與B紅細胞反應不超過15秒。4.2.4抗A、抗B試劑血清冷凝集素和不規(guī)則抗體測定⑴材料和試劑：待檢血清；O型試劑紅細胞（盡可能包含除ABO系統(tǒng)以外的紅細胞抗原）3例，配制2%～5%懸液；B型試劑紅細胞3例（測抗A用），配制2%～5%懸液；A型試劑紅細胞3例（測抗B用），配制2%～5%懸液；抗人球蛋白。⑵方法：取試管排成3列，每列3支。在管中加待檢血清0.1ml，再分別加入5%O型試劑紅細胞0.1ml，混合后，第1列放置于37℃，孵育1小時，做抗人球蛋白實驗。第2列放置于4℃，第3列放置于20℃，均孵育1小時，肉眼觀察結果。以B型紅細胞懸液取代O型紅細胞懸液測定抗A，以A型紅細胞懸液取代O型紅細胞懸液測定抗B。⑶結果：全部試管均不得出現(xiàn)凝集或溶血反應，以及緡錢狀、冷凝集、細菌性凝集和理化凝集等非特異性凝集。4.2.5質控頻率：每批1次，每次隨機抽檢1盒檢測。4.3抗D試劑血清質控方法4.3.1物理檢查：參照質量標準要求，逐項肉眼觀察并記錄。4.3.2抗D試劑血清抗體效價檢測：⑴材料和試劑：待檢血清，Rh（D）陽性試劑紅細胞（2%～5%）。⑵方法：按每列9支試管排成2列，第1管加0.2ml待檢血清自第2管起每管加生理鹽水0.2ml，將血清倍比稀釋，加入相應的試劑紅細胞懸液0.2ml，同時做紅細胞懸液對照。置于18～22℃孵育15分鐘，3400轉/分離心15秒，肉眼觀察。⑶結果：抗體效價以產生“+”凝集的待檢血清最高稀釋度計算，不計紅細胞懸液體積。兩列試管終點相同作為待檢血清凝集效價，并應符合以下要求，如兩列終點相差一管，且效價均符合要求，則以凝集效價低的為終點；如兩列終點相差一管，有一列效價不符合要求，則取雙倍量待檢血清復試。⑷抗體效價質量要求：抗D效價不應低于128。4.3.3抗D試劑血清特異性檢測：⑴材料和試劑：待檢血清；RhD陽性和陰性試劑紅細胞（2%～5%）。⑵方法：按每列5支試管排成2列，各管加待檢血清0.1ml。在各試管中分別加入RhD陽性和陰性試劑紅細胞0.1ml，同時做紅細胞懸液對照。置于18～22℃孵育15分鐘，3400轉/分離心15秒，肉眼觀察。⑶結果：待檢血清應與RhD陽性試劑紅細胞發(fā)生凝集，而與RhD陰性試劑紅細胞不發(fā)生凝集。4.3.4質控頻率：每批1次，每次隨機抽檢1盒檢測。4.4微術凝膠卡和抗人球蛋白的質控方法4.4.1物理檢查：參照質量標準要求，逐項肉眼觀察并記錄。4.4.2方法：選用IgG型抗-D致敏的紅細胞做陽性對照，紅細胞不規(guī)則抗體篩選陰性的AB型血清做陰性對照，正常O型紅細胞做空白對照。具體操作執(zhí)行輸血科相關檢驗項目的標準操作規(guī)程。4.4.3質控頻率：每批使用前檢測1次，每次隨機抽檢1盒檢測。4.5篩選紅細胞的質控方法4.5.1物理檢查：參照質量標準要求，逐項肉眼觀察并記錄。4.5.2方法：用已知的弱抗血清檢測，同時對試驗樣品平行檢測。具體執(zhí)行紅細胞不規(guī)則抗體篩選試驗標準操作規(guī)程。4.5.3篩選紅細胞質量控制見下表：篩選紅細胞質量控制表檢驗項目質量要求質控頻率外觀上清液沒有溶血或混濁每天反應性和特異性與針對已知紅細胞抗原的抗血清反應清晰效期內第1次及最后1次使用時4.6、凝聚胺試劑的質控方法4.6.1物理檢查：參照質量標準要求，逐項肉眼觀察并記錄。4.6.2方法：用試劑盒提供的陽性對照品與O型Rh（D）陽性獻血者紅細胞做陽性對照，紅細胞不規(guī)則抗體篩選陰性的AB型血清加O型Rh（D）陽性獻血者紅細胞做陽性對照陰性對照。具體執(zhí)行輸血科相關實驗項目的標準操作規(guī)程。4.6.3低離子鹽溶液質量控制見下表：低離子鹽溶液質量控制檢驗項目質量要求