近幾年發(fā)育生物學(xué)實驗 目的基因的發(fā)育表達圖式全文課件_第1頁
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最新發(fā)育生物學(xué)實驗?zāi)康幕虻陌l(fā)育表達圖式精品課件第一頁，編輯于星期六：十四點五十五分。地高辛（DIG）標(biāo)記的UTP

ALP標(biāo)記的Anti-DIG抗體

ALP堿性磷酸酶顯色

DIGAnti-DIG抗體ALPALP底物RNA原位雜交原理：主要是利用堿基互補原理，將體外合成的帶有標(biāo)記的單鏈反義RNA與組織或細(xì)胞中待測的mRNA發(fā)生雜交，從而將探針定位在特定基因的表達區(qū)域內(nèi)。顯色觀察，確認(rèn)其表達部位。標(biāo)記物的種類分為2種，即非放射性的標(biāo)記物（地高辛(DIG)和生物素(BIO)）或帶有放射性的同位素(32P)。第二頁，編輯于星期六：十四點五十五分。vasa基因——生殖細(xì)胞的標(biāo)記分子櫛孔扇貝胚胎和幼蟲單環(huán)刺螠胚胎和幼蟲三、實驗材料第三頁，編輯于星期六：十四點五十五分。第四頁，編輯于星期六：十四點五十五分。四、胚胎原位雜交的實驗流程RNA探針設(shè)計合成

思考：如何確保探針特異性？

反義RNA探針

正義RNA探針

HindⅢ線性化質(zhì)粒1μgEcoRⅠ線性化質(zhì)粒1μg10×轉(zhuǎn)錄緩沖液2μl10×轉(zhuǎn)錄緩沖液2μl10×NTP2μl10×NTP2μlRNase抑制劑1μlRNase抑制劑1μlT7RNA聚合酶2μlSP6RNA聚合酶2μlDEPC處理水至20μlDEPC處理水至20μl胚胎固定：4％多聚甲醛(PBS配制)，保存于100%甲醇中（-20℃）

體外轉(zhuǎn)錄帶有T7/SP6噬菌體轉(zhuǎn)錄啟動子的載體第五頁，編輯于星期六：十四點五十五分。雜交流程（第一天）(12-16h)第六頁，編輯于星期六：十四點五十五分。以上過程，為防止RNA酶污染，操作時需戴手套和口罩。試劑和容器處理：DEPC（焦碳酸二乙酯）或180℃復(fù)水、消化、后固定雜交、預(yù)雜交第七頁，編輯于星期六：十四點五十五分。雜交流程（第二天）(顯色：30min–2h)第八頁，編輯于星期六：十四點五十五分。第九頁，編輯于星期六：十四點五十五分?！づ咛ヮA(yù)處理·預(yù)雜交和雜交·洗脫和抗體孵育·顯色和觀察實驗主要階段思考：各關(guān)鍵步驟的目的和原理，如何確定最佳條件第十頁，編輯于星期六：十四點五十五分。第十一頁，編輯于星期六：十四點五十五分。作業(yè)電子版上交vasamRNA在實驗動物發(fā)育過程中的表達圖式；根據(jù)實驗結(jié)果，提出實

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