中華人民共和國(guó)醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布I——第8部分：海藻酸鈉 本部分為YY/0606的第8部分。YY/T0606.8—2008下列文件中的條款通過(guò)YY/T0606的本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于GB/T2828.1—2003技術(shù)抽樣檢驗(yàn)程序第1部分：按接受質(zhì)量限(AQL)檢索的逐批檢驗(yàn)抽樣計(jì)劃GB/T16886.1—2001醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第1部分：評(píng)價(jià)與試驗(yàn)(idtISO10993-1:1997)GB/T16886.3—1997醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第3部分：遺傳毒性、致癌性和生殖毒性試驗(yàn)GB/T16886.4—2003醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第4部分：與血液相互作用試驗(yàn)選擇(ISO10993-GB/T16886.5—2003醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第5部分：體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)(ISO10993-5:1999,GB/T16886.6—1997醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第6部分：植入后局部反應(yīng)試驗(yàn)(idtISO10993-4:GB/T16886.10—2005醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第10部分：刺激與遲發(fā)型超敏反應(yīng)試驗(yàn)GB/T16886.11—1997醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第11部分：全身毒性試驗(yàn)(idtISO10993-11:GB/T16886.12—2005醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第12部分：樣品制備與參照樣品(ISO10993-12:中華入民共和國(guó)藥典(2005版)美國(guó)藥典USP26/NF21海藻酸鈉ASTMF2064-00作為用于生物醫(yī)學(xué)和組織工程醫(yī)用產(chǎn)品初始材料的海藻酸鹽的表征和試驗(yàn)標(biāo)ASTMF2259-03用于檢測(cè)海藻酸鹽的化學(xué)成分和序列結(jié)構(gòu)的1H-核磁共振(1HNMR)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)2解聚是指聚合物鏈的長(zhǎng)度縮小成為較短的鍵段。解聚可以將聚合物變?yōu)楣烟呛?或單糖單元。對(duì)海藻酸鈉而言，糖苷鍵的水解是解聚的自要因素。M-2uN,Zw=23.0之間。4要求4.2鑒別通過(guò)傅里葉變換死普(FI-R)檢測(cè)且其典持此峰(a:3379~339b(b),1613(s),1416采用'H-核磁共振光譜(Mg測(cè)，典型'H-NMR譜如圖1所示。D34.5干燥失重應(yīng)不大于15.0%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))。應(yīng)為18.0%～27.0%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))。以鉛計(jì)重金屬總量應(yīng)不大于0.004%(質(zhì)量分?jǐn)?shù)),其中砷含量應(yīng)不大于0.00015%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))應(yīng)不大于0.3%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))。4.9細(xì)菌內(nèi)毒素應(yīng)符合4.6規(guī)定。4合4.11.1規(guī)定。合4.11.2規(guī)定。合4.11.5規(guī)定。0合4.11.6規(guī)定。5.11.7遺傳毒性試行測(cè)定，應(yīng)符合4.11規(guī)定。6.1.2批檢驗(yàn)應(yīng)進(jìn)行4.1,4.5,4.6,4.74.8,4.9,4.10的檢測(cè)b)產(chǎn)品名稱；56A.1范圍A.2使用和有效性采用1H-NMR的方法進(jìn)行測(cè)定時(shí)，海藻溶解于99%D?O中之后凍干，再將其溶解于99.9%D?O再凍干從而制備低1H?O含量的樣品。三乙烯A.3.1化學(xué)物質(zhì)A.3.1.5D?O(99%～99.9X,A.3.1.6三乙烯四胺六乙酸(TTHA,D?O中0.3mol/L,DCl或NaOD調(diào)pH值至5-5.5)。A.3.2.3pH計(jì)。A.4步驟A.4.1.1制備100mLA.4.1.2HCl溶液(1mol/L,0.1mol/L)調(diào)pH值為5.6,將其置于100℃水浴中1h。A.4.1.3HCl溶液(1mol/L,0.1mol/L)調(diào)pH值為3.8,將其置于100℃水浴中30min。A.4.1.4NaOH溶A.4.1.5在99%～99.9%D?O5mL中溶解海藻酸鈉樣品，再次凍-F。A.4.1.6在99.9%D?O1mL中溶解海藻酸鈉樣品10mg~12mg。7A.4.2技術(shù)參數(shù)原子核質(zhì)子譜帶寬度(8)-0.5→9.5A.4.2.2參考譜圖見(jiàn)圖1。A.4.3計(jì)算red-b:betareducing-endsB?:A.4.3.2相關(guān)公式如下：8Nc>1=(Fc-FMGM)/FccM…………NM=Fm/FMG如果reducingendsignals也被積分(“red-a”和“red-b”),則平均聚合度的評(píng)估公式如下：DP。=(M+G+red-a+red-b)/(red-a+red-b)………………(A.20)G——a-L-古羅糖醛酸；M——β-D-甘露糖醛酸；MM、MMM——β-D-甘露糖醛酸聚合嵌段；Fc——a-L-古羅糖醛酸含量；FM——β-D-甘露糖醛酸含量；Fcc、Fccc——a-L-古羅糖醛酸聚合嵌段含量；FMM——β-D-甘露糖醛酸聚合嵌段含量；FcM、FMCM、FcM——-α-L-古羅糖醛酸和β-D-甘露糖醛酸聚合嵌段含量；Nc——連續(xù)的a-L-古羅糖醛酸單體的平均數(shù)量；Nc>1——連續(xù)的α-L-古羅糖醛酸單體的平均數(shù)量大于1的數(shù)值，即不包括-MGM-在內(nèi)的G單元的平均長(zhǎng)度；NM——連續(xù)的β-D-甘露糖醛酸單體的平均數(shù)量；DPn——平均聚合度。A.5標(biāo)準(zhǔn)偏差和結(jié)果A.5.1Fc及其標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)應(yīng)精確到0.01。A.5.2G含量高的海藻酸鈉應(yīng)給出G含量，例如，F(xiàn)c為0.68(標(biāo)準(zhǔn)偏差=±0.01)。M含量高的海藻酸鈉應(yīng)給出M含量，例如，F(xiàn)M為0.66(標(biāo)準(zhǔn)偏差=±0.01)。9海藻酸鈉的分子量決定著它的某些特性如黏度和人或膠體拉伸率等。由于的不同對(duì)最終用途的影響，采用直按或間接的方法測(cè)一個(gè)確定分子量范圍的多分散體系。分子量牙用數(shù)均分特性黏數(shù)是描這位質(zhì)量聚合物的一種特性，與濃無(wú)關(guān)，與聚合0.5～1。當(dāng)a=時(shí)，η=Mw。對(duì)海藻酸針而言在離子強(qiáng)0定特性黏數(shù)，并樣品的K和等條件下進(jìn)行波中的流體力學(xué)體積表征聚合物在特定溶劑和溫度條件下描述聚合物組成的經(jīng)驗(yàn)常數(shù)，通常為溶液),其指數(shù)接近于1。通過(guò)測(cè),可確定的黏均分量。特性對(duì)數(shù)可以通過(guò)烏氏黏度計(jì)定為2,含有rNaCl溶液利足夠低的海藻酸鈉濃度其具體操位法如下。精密稱取103T于燥6h的海素NaCl溶液中(含05%乙二乙二鈉)放置24h后溶附錄VG第三法測(cè)定特性黏數(shù)(n)(溫度0.2g,置于約5dmL的0.1mol/L稀釋至100mL,《中華人民共和國(guó)多角度激光散疲義作為測(cè)分子量用的附棚檢測(cè)器，不需標(biāo)準(zhǔn)品放準(zhǔn)，克服了樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的化學(xué)組成、分子結(jié)構(gòu)及大的誤差。由于通常無(wú)法獲得海溪酸鈉的標(biāo)準(zhǔn)品，GPC結(jié)合SEC-MALLS方法為測(cè)定其平于量提供了新的途徑。色譜條件如下：采用rk4000Pwx色譜柱；多角度激光檢測(cè)及示差折光檢測(cè)器；流動(dòng)相為采用GPC結(jié)合SEC-MALLS,在690.0nm的波長(zhǎng)和25℃下測(cè)定散射光強(qiáng)。海藻酸鈉溶液的溶劑為超純水。將樣品按上述色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定力于里及其分子量分布。由Zimm圖用外推法計(jì)算Mn,Mw以及分子量分布指數(shù)Mw/Mn。C.1原理C.2設(shè)備C.3溶液制備C.3.1庫(kù)馬斯亮藍(lán)G-250試液：稱取庫(kù)馬斯亮藍(lán)G-250100mg溶解于50mL的95%乙醇中，再加入85%(體積分?jǐn)?shù))的磷酸100mL,并用蒸餾水稀釋至1000mL,置于棕色瓶?jī)?nèi)，室溫貯存。C.3.2蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液：精確吸取5%人血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液0.2mL于1000mL容量瓶中，用蒸餾水稀c——海藻酸鈉測(cè)定濃度值，%;00蛋白質(zhì)濃度/(μg/mL)01248C.5.2在標(biāo)準(zhǔn)液系列的各試管及樣品試管中分別加入5mL的庫(kù)馬斯亮藍(lán)G-250溶液。用旋渦式混P?=p?/p?×100著聚合物鏈排列成一系列的嵌段，嵌段形式是G單元均聚嵌段(G嵌段),M單元均聚嵌段(M嵌段)以酸鹽鏈中M和G單元嵌段的NMR特征用于計(jì)算不同嵌段含量。NMR的檢測(cè)結(jié)果也表明海藻酸鹽不具有規(guī)則的重復(fù)單體。海藻酸鹽會(huì)在制造過(guò)程中發(fā)生自然降解。海藻酸鈉成品的分子量很少超過(guò)500000g/mol,相當(dāng)于聚合度大約為2500。D.2.1概述D.2.2海藻酸鈉的化學(xué)組成和序列結(jié)構(gòu)的變化海藻酸鈉的化學(xué)組成和序列結(jié)構(gòu)的變化與提取海藻酸鈉的海草和海藻種類(lèi)有關(guān)。表D.1羅列了表D.1寒帶昆布屬植物(莖)寒帶昆布屬植物(葉)巨型囊腫梨形植物YY/T0606.8—2008D.2.3.2凝膠化特性是與M/G和M與G序列結(jié)構(gòu)相關(guān)的功能。連續(xù)古羅糖醛酸單體形成G嵌段，D.2.3.3海藻酸鈉的黏性與分子量和溶液中分子的構(gòu)象有關(guān)。在高濃度的海藻酸鈉溶液中，海藻酸D.2.3.4不同原料加入的順序也可導(dǎo)致海藻酸鈉的凝膠化D.2.3.6降解。就如3.2中描述的那樣，斷裂糖苷鍵可使海藻酸鈉中(通常用來(lái)將多糖轉(zhuǎn)化成單糖的條件下),糖醛酸中的糖苷鍵幾乎不發(fā)生率直接與質(zhì)子濃度相關(guān)。當(dāng)pH值接近于海藻酸鈉的pKa值(即pH1～4)時(shí)，降解速率不完全依賴于[1]ASTMF2064-00作為用于生物醫(yī)學(xué)和組織工程醫(yī)用產(chǎn)品初始材料的海藻酸鹽的表征和試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)指南.[2]ASTME386關(guān)于高分辨率核磁共振波譜實(shí)驗(yàn)的表征.[3]USP24-NF19<761)Nuclear[4]H.Grasdalen,B.Larsen&Smidsrod(1979)A.P.M.R.studyofsequenceofuronateresidues