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ICS07.080DNA甲基化的測定焦磷酸測序法國家市場監(jiān)督管理總局國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會IGB/T40183—2021本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由中國標(biāo)準(zhǔn)化研究院提出并歸口。育生物學(xué)研究所農(nóng)業(yè)資源研究中心、河北師范大學(xué)。1GB/T40183—2021DNA甲基化的測定焦磷酸測序法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用焦磷酸測序法測定DNA甲基化的方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于動植物組織或體外培養(yǎng)細(xì)胞DNA甲基化測定。下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1.1在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下，以S-腺苷甲硫氨酸為甲基供體，將甲基轉(zhuǎn)移至堿基特定結(jié)構(gòu)上的DNA:脫氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid)PCR:聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction)4原理DNA經(jīng)重硫酸鹽硫化處理后，DNA雙鏈中未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，通過PCR將尿嘧啶轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶，根據(jù)PCR產(chǎn)物中相應(yīng)甲基化位點(diǎn)的胞嘧啶和胸腺嘧啶的比例進(jìn)行定量。5試劑或材料5.2動物基因組DNA提取試劑盒。5.3植物基因組DNA提取試劑盒。5.420pmol/μL焦磷酸測序用引物。25.870%(體積分?jǐn)?shù))乙醇。取70mL無水乙醇加水稀釋定容至100mL。5.1050×電泳緩沖液。稱取242gTris溶于800mL蒸餾水中，加入57.1mL冰乙酸和100mL0.5mol/L乙二胺四乙酸溶液(pH8.0),再加蒸餾水定容至1000mL,室溫保存，稀釋50倍使用。6.4水平電泳槽。6.6低溫離心機(jī)：最大離心力25910g。6.7凝膠成像系統(tǒng)。6.10PCR管。7測定步驟7.2DNA重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化7.3.1

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