酵母菌制劑保存的穩(wěn)定性研究摘要：選取３種不同濃度的酵母菌制劑（１．６７×１０－２、５．００×１０－２、８．００×１０－２ｇ／ｍＬ）分為試驗(yàn)組１、２和３，在４℃下保存３６０ｄ，每３０ｄ取樣１次，采用稀釋平板法進(jìn)行活酵母菌計(jì)數(shù)，檢測(cè)酵母菌制劑保存的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，隨著保存時(shí)間延長，試驗(yàn)組1、3的活酵母菌數(shù)呈下降趨勢(shì)，試驗(yàn)組2的活酵母菌數(shù)呈先下降后升高的趨勢(shì)。在第３０、９０、１８０和３６０天時(shí)，試驗(yàn)組１酵母菌存活率分別為７６．２７％、２８．６４％、２０．８５％和１１．１０％，試驗(yàn)組２酵母菌存活率分別為１０６．２５％、１３．６３％、１２１．２５％和１０１．８８％，試驗(yàn)組３酵母菌存活率分別為１２６．３７％、９０．１１％、６９．７８％和５６．０４％。可見，酵母菌制劑試驗(yàn)組３保存的穩(wěn)定性良好，４℃條件下保存期可達(dá)到１８０ｄ以上。

關(guān)鍵詞 ：酵母菌；制劑；保存；穩(wěn)定性

中圖分類號(hào)：Ｓ８５９．１；Q93-336文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：0439－８114（２０15）07－1661-03

DOI:10.14088/jki.issn0439-8114.2024.07.033

在抗生素限制使用的時(shí)代，微生態(tài)制劑作為較理想的替代品被廣泛應(yīng)用。微生態(tài)制劑又稱為微生態(tài)調(diào)節(jié)劑，是指可以提高人類、畜禽宿主或植物寄主等健康水平和促進(jìn)生長的菌群及其代謝產(chǎn)物的制品［１］，具有無毒副作用、無殘留和無耐藥性等特性。目前，用于微生態(tài)制劑的微生物主要有芽孢桿菌屬、乳桿菌屬和酵母菌屬等［２］。其中，酵母菌屬于兼性厭氧型真菌，可以耐受一定劑量的抗生素，而大多微生態(tài)制劑是細(xì)菌制劑，對(duì)抗生素敏感，所以酵母菌能在含有抗生素的機(jī)體或環(huán)境中應(yīng)用，并逐漸取代抗生素。此外，酵母菌菌體含有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素等成分，還可以分泌酶類、糖類、脂類和生長因子等［３］。酵母菌是繼動(dòng)物蛋白質(zhì)和植物蛋白質(zhì)之后的一種重要蛋白質(zhì)來源，又有“菌體蛋白質(zhì)”之稱［４］。研究表明，每１００ｋｇ干酵母所含的蛋白質(zhì)，相當(dāng)于５００ｋｇ大米、２１７ｋｇ大豆或２５０ｋｇ豬肉所含蛋白質(zhì)的含量［５］。

酵母菌有著悠久的應(yīng)用史，尤其在面包制作和釀酒行業(yè)。近幾年，酵母菌以微生態(tài)制劑的形式廣泛應(yīng)用于食品、保健品、藥品、飼料等行業(yè)。酵母菌制劑主要作為多功能食品、保健品、添加劑和醫(yī)藥品，甚至用作含重金屬廢水的凈化劑等［６，７］。微生態(tài)制劑中起重要作用的是活性微生物，保證制劑中活性微生物的含量對(duì)其發(fā)揮益生作用至關(guān)重要。

酵母菌制劑保存的穩(wěn)定性是指該制劑從制備到使用期間活酵母菌數(shù)的變化速度和程度，是評(píng)價(jià)制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。穩(wěn)定性研究是制劑質(zhì)量控制研究的主要內(nèi)容之一，與制劑質(zhì)量研究和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立緊密相關(guān)。本研究通過對(duì)酵母菌制劑在一定條件下活菌數(shù)隨時(shí)間變化規(guī)律進(jìn)行研究，掌握制劑保存的穩(wěn)定性變化，為制劑的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

１材料與方法

１．１材料

１．１．１菌種酵母菌液由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所提供。

１．１．２試劑與培養(yǎng)基瓊脂粉購自生工生物工程（上海）股份有限公司；麥芽汁購自蘭州啤酒廠；固體麥芽汁：瓊脂粉＋麥芽汁。

１．１．３儀器電子天平（武漢格萊莫檢測(cè)設(shè)備有限公司），ＰＨＳＪ－４Ｆ型實(shí)驗(yàn)室ｐＨ計(jì)（上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司），ＬＤＺＸ－３０ＫＢ型立式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠），ＢＳ－２Ｆ型數(shù)顯振蕩培養(yǎng)箱（金壇市華城開元實(shí)驗(yàn)儀器廠），恒溫培養(yǎng)箱（上海申賢恒溫設(shè)備廠）。

１．２方法

?。保恚虧舛葹椋保啊粒保埃罚茫疲眨恚痰慕湍妇杭尤耄梗梗恚帖溠恐囵B(yǎng)基，培養(yǎng)７２ｈ后4℃保存，作為供試菌液。將供試菌液從４℃取出后室溫放置１ｈ，置于搖床１ｈ（速度１１０ｒ／ｍｉｎ），以使菌液均勻。取１００μＬ菌液加入到９９００μＬ無菌生理鹽水中，菌液濃度稀釋１０－１，振蕩１ｍｉｎ，依次稀釋１０－２、１０－３、１０－４、１０－５和１０－６，選取３種不同濃度供試菌液（１．６７×１０－２、５．００×１０－２、８．００×１０－２ｇ／ｍＬ）作為試驗(yàn)處理，分別為試驗(yàn)組１、２和３，涂布于固體麥芽汁培養(yǎng)基，置于２８℃恒溫箱培養(yǎng)４８～７２ｈ（做３次平行，取其平均值）。試驗(yàn)組1、2和3添加某種物質(zhì)，對(duì)照組不添加該種物質(zhì)。將３種不同濃度酵母菌制劑及其同期對(duì)照組于冰箱４℃保存，試驗(yàn)期為３６０ｄ，每３０ｄ取樣１次，采用稀釋平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行活酵母菌計(jì)數(shù)，以平均活酵母菌數(shù)表示制劑保存的穩(wěn)定性。

２結(jié)果與分析

對(duì)不同濃度酵母菌制劑及其同期對(duì)照組進(jìn)行０～３６０ｄ保存穩(wěn)定性的檢測(cè)，測(cè)定結(jié)果如圖1所示。由圖1可知，隨著保存時(shí)間的延長，試驗(yàn)組1、3的活酵母菌數(shù)呈下降趨勢(shì)，試驗(yàn)組2的活酵母菌數(shù)呈先下降后升高的趨勢(shì)；在相同時(shí)間內(nèi)，除試驗(yàn)組2保存90d外，所有試驗(yàn)組的酵母菌存活率均高于對(duì)照組；與保存９０～３６０ｄ相比，在０～９０ｄ內(nèi)試驗(yàn)組1、3和對(duì)照組的活酵母菌數(shù)存活率均偏高。在第３０、９０、１８０和３６０天時(shí)，試驗(yàn)組１酵母菌存活率分別為７６．２７％、２８．６４％、２０．８５％和１１．１０％，試驗(yàn)組２酵母菌存活率分別為１０６．２５％、１３．６３％、１２１．２５％和１０１．８８％，試驗(yàn)組３酵母菌存活率分別為１２６．３７％、９０．１１％、６９．７８％和５６．０４％。試驗(yàn)組１酵母菌存活率均低于試驗(yàn)組２和３；試驗(yàn)組２酵母菌存活率大部分測(cè)定時(shí)間高于１００％。說明酵母菌制劑試驗(yàn)組３保存的穩(wěn)定性良好。

３小結(jié)與討論

目前，微生態(tài)制劑保存的穩(wěn)定性是確保制劑使用效果的基礎(chǔ)。張世風(fēng)等［８］報(bào)道溫度對(duì)菌種保存期存活率影響最大，微生物添加劑保存溫度一般為２～８℃。鐘青萍等［９］報(bào)道納豆菌微生態(tài)制劑在４℃冷藏保存，有較好的穩(wěn)定性。因此，本試驗(yàn)選取４℃冷藏保存酵母菌制劑。

近年來，大多微生態(tài)制劑通過膠囊化、添加保護(hù)劑和凍干等形式，提高制劑保存穩(wěn)定性。宋文龍等［１０］采用乳化和擠壓法包埋枯草芽孢桿菌活菌制劑；徐暉等［１１］研究微膠囊化枯草芽孢桿菌制劑，均在４℃冷藏下保存，提高了制劑保存的穩(wěn)定性。彭虹旎等［１２］報(bào)道添加保護(hù)劑的屎腸球菌凍干樣品，在４℃存放４周后，存活率高于97.90％。蔡凱凱［１３］將納豆芽孢桿菌制劑制成凍干產(chǎn)品４℃存放１個(gè)月，菌制存活率為９１．４％；固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)品４℃存放１個(gè)月，菌制存活率為４９．１％。本試驗(yàn)制備不同濃度酵母菌制劑，于４℃冷藏保存，測(cè)定酵母菌制劑的保存穩(wěn)定性。

本試驗(yàn)結(jié)果表明濃度不同，酵母菌制劑的酵母菌存活率不同。在不同時(shí)期，試驗(yàn)組１酵母菌存活率均低于試驗(yàn)組２和３；試驗(yàn)組２酵母菌存活率大部分時(shí)間高于１００％；試驗(yàn)組３酵母菌存活率逐漸下降，但１８０ｄ時(shí)酵母菌存活率為６９．７８％，３６０ｄ時(shí)還高于５０％。相關(guān)研究表明，在低于０℃或高于４７℃時(shí)，酵母菌一般不會(huì)增殖。試驗(yàn)組２酵母菌存活率大部分時(shí)間高于１００％，可能是酵母菌在４℃保存時(shí)增殖引起的，有待于進(jìn)一步研究。本試驗(yàn)各試驗(yàn)組酵母菌存活率的結(jié)果與沈麗琳等［１４］報(bào)道基本一致，并且優(yōu)于史懷平［１５］的報(bào)道結(jié)果。此外，在不同時(shí)期，除試驗(yàn)組2保存９０ｄ外，本試驗(yàn)中所有試驗(yàn)組的酵母菌存活率均高于對(duì)照組。本試驗(yàn)結(jié)果表明，酵母菌制劑試驗(yàn)組３保存的穩(wěn)定性良好，４℃條件下保存期為１８０ｄ時(shí)，酵母菌存活率較高。選擇適宜的濃度可以提高酵母菌制劑保存的穩(wěn)定性，其作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

［１］康白．微生態(tài)學(xué)原理［Ｍ］．遼寧大連：大連出版社，１９９６.２．

［２］ＳＥＫＨＯＮＢＳ，ＪＡＩＲＡＴＨＳ．Ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ，ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓａｎｄｓｙｎｂｉｏｔｉｃｓ：Aｎｏｖｅｒｖｉｅｗ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＥｄｕｃａｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈ，２０１０，１（２）：１３－３６．

［３］ＰＡＮＤＥＹＡ．ＣｏｎｃｉｓｅEｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆBｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅTｅｃｈｎｏｌｏｇｙ［Ｍ］．ＮｅｗＹｏｒｋ：ＦｏｏｄＰｒｏｄｕｃｔｓＰｒｅｓｓ，２００４．

［４］王卓，顧正彪，洪雁．馬鈴薯渣的開發(fā)與利用［Ｊ］．中國糧油學(xué)報(bào)，２００７，２２（２）：１３３－１３６．

［５］孫萬儒．酵母菌［Ｊ］．生物學(xué)通報(bào)，２００７，４２（１１）：５－１０．

［６］ＢＥＫＡＴＯＲＯＵＡ，ＰＳＡＲＩＡＮＯＳＣ，ＫＯＵＴＩＮＡＳＡＡ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｆｏｏｄｇｒａｄｅｙｅａｓｔｓ［Ｊ］．ＦｏｏｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００６，４４（３）：４０７－４１５．

［７］ＦＥＲＲＥＩＲＡＩ，ＰＩＮＨＯＯ，ＶＩＥＩＲＡＥ，ｅｔａｌ．Ｂｒｅｗｅｒ＇ｓＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｙｅａｓｔｂｉｏｍａｓｓ：Cｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄｐｏｔｅｎｔｉａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＴｒｅｎｄｓｉｎＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，２１（２）：７７－８４．

［８］張世風(fēng)，翟建新．影響飼用微生物添加劑作用效果的原因淺析［Ｊ］．河南畜牧獸醫(yī)，１９９９，２０（３）：２２－２３．

［９］鐘青萍，王發(fā)祥，鐘士清，等．納豆菌微生態(tài)制劑的穩(wěn)定性研究［Ｊ］．食品科學(xué)，２００６，２７（３）：１３３－１３６．

［１０］宋文龍，叢麗娜，王紅英．枯草芽孢桿菌發(fā)酵條件的優(yōu)化及微生態(tài)制劑的研制［Ｊ］．食品工業(yè)科技，２０１３，３４（１７）：２０６－２０９．

［１１］徐暉，魏培蓮．枯草芽孢桿菌微生態(tài)制劑的研制［Ｊ］．氨基酸和生物資源，２００８，３０（２）：５６－５８．

［１２］彭虹旎，梁莉，陳西廣．屎腸球菌冷凍干燥保護(hù)劑篩選及穩(wěn)