廣東省佛山市第四中學(xué)2025屆高考全國統(tǒng)考預(yù)測密卷生物試卷注意事項(xiàng)1．考生要認(rèn)真填寫考場號和座位序號。2．試題所有答案必須填涂或書寫在答題卡上，在試卷上作答無效。第一部分必須用2B鉛筆作答；第二部分必須用黑色字跡的簽字筆作答。3．考試結(jié)束后，考生須將試卷和答題卡放在桌面上，待監(jiān)考員收回。一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個(gè)選項(xiàng)符合題目要求）1．下列有關(guān)“檢測生物組織中的油脂、糖類和蛋白質(zhì)”活動(dòng)的敘述，正確的是（）A．在制作花生種子徒手切片時(shí)，需先將花生子葉的一端切出一個(gè)平面B．檢測還原糖時(shí)，用100℃比80℃的熱水浴更快出現(xiàn)橙黃色沉淀C．檢測蛋白質(zhì)時(shí)，先加2ml雙縮脲試劑A，再加2ml雙縮脲試劑BD．活動(dòng)均未設(shè)置對照組2．我國科學(xué)家用秋水仙素處理二倍體西瓜的幼苗，獲得四倍體植株，發(fā)現(xiàn)四倍體植株上所結(jié)的西瓜少籽。再將萘乙酸（生長素類似物）涂抹在四倍體植株花的雌蕊上，誘導(dǎo)子房發(fā)育得到完全無籽西瓜。下列相關(guān)敘述不正確的是A．西瓜少籽可能是四倍體聯(lián)會出現(xiàn)紊亂造成B．完全無籽西瓜果肉細(xì)胞中只有2個(gè)染色體組C．涂抹萘乙酸前后應(yīng)設(shè)法避免雌蕊接受花粉D．涂抹的萘乙酸促進(jìn)了四倍體西瓜果實(shí)的發(fā)育3．如圖為某植物葉肉細(xì)胞部分結(jié)構(gòu)示意圖，①是葉綠體。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．②是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，能對蛋白質(zhì)進(jìn)行加工B．①和④中都含有光合色素C．③是線粒體，是有氧呼吸的主要場所D．①是進(jìn)行光合作用的場所4．下列有關(guān)生物膜及其所含蛋白質(zhì)的敘述，錯(cuò)誤的是（）A．線粒體中催化丙酮酸分解的酶分布在線粒體內(nèi)膜上B．溶酶體膜蛋白經(jīng)過修飾，不會被溶酶體內(nèi)的水解酶水解C．葉綠體中催化NADPH合成的酶分布在類囊體膜上D．細(xì)胞膜的選擇透過性與膜上載體蛋白種類密切相關(guān)5．洋蔥是生物實(shí)驗(yàn)中常用的材料，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A．可用洋蔥鱗片葉內(nèi)表皮作實(shí)驗(yàn)材料觀察細(xì)胞的質(zhì)壁分離與復(fù)原B．用顯微鏡觀察低溫誘導(dǎo)的洋蔥細(xì)胞既有二倍體細(xì)胞也有染色體數(shù)目變化的細(xì)胞C．低溫誘導(dǎo)處理洋蔥根尖經(jīng)卡諾氏液固定后，需用清水沖洗2次后才能制作裝片D．觀察洋蔥根尖細(xì)胞有絲分裂實(shí)驗(yàn)應(yīng)在顯微鏡下找到呈正方形細(xì)胞數(shù)目多的區(qū)域來觀察6．已知某一動(dòng)物種群中僅有Aabb和AAbb兩種類型個(gè)體，Aabb：AAbb=1：2，該種群的每種基因型中雄雌個(gè)體比例為1：1，個(gè)體間可以自由交配，則該種群自由交配產(chǎn)生的子代中能穩(wěn)定遺傳的個(gè)體比例為A．5/8 B．5/9 C．13/16 D．13/18二、綜合題：本大題共4小題7．（9分）正常細(xì)胞不能合成干擾素，但含有干擾素基因。我國科學(xué)家釆用基因工程技術(shù)生產(chǎn)干擾素a-2b已實(shí)現(xiàn)量產(chǎn)。具體做法是將產(chǎn)生干擾素的人白細(xì)胞的mRNA分離，反轉(zhuǎn)錄得到干擾素基因。將含有四環(huán)素、氨芐青霉素抗性基因的質(zhì)粒PBR322和干擾素基因進(jìn)行雙酶切，用連接酶連接。將重組載體DNA分子在一定條件下導(dǎo)入大腸桿菌，在培養(yǎng)基中篩選培養(yǎng)，檢測干擾素的表達(dá)量，選出高效表達(dá)的工程菌。請回答：（1）在分化誘導(dǎo)因子作用下，正常細(xì)胞可以擺脫抑制、合成干擾素，該過程發(fā)生的實(shí)質(zhì)是________________________________（2）據(jù)下圖分析，構(gòu)建重組載體DNA分子時(shí)，可以選用_____兩種限制酶對質(zhì)粒pBR322和干擾素基因進(jìn)行雙酶切，目的是既能保證目的基因和質(zhì)粒正向連接，又能防止_____________________________(答兩點(diǎn))。（3）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌中，然后將細(xì)菌涂布到含_____的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，就可得到含質(zhì)粒PBR322或重組質(zhì)粒的細(xì)菌單菌落；再從每一個(gè)單菌落中挑取部分細(xì)菌轉(zhuǎn)涂到含有_____的培養(yǎng)基上，不能生長的絕大部分是含有重組質(zhì)粒的細(xì)菌，原因是_____（4）干擾素在體外保存非常困難，如果將其分子中的一個(gè)半胱氨酸變成絲氨酸，在-70°C條件下可以保存半年。實(shí)現(xiàn)這一轉(zhuǎn)變需要直接對_____進(jìn)行修飾或改造，這屬于蛋白質(zhì)工程的范疇。8．（10分）甲醇酵母菌是基因工程中常用的受體菌，研究人員將人的膠原蛋白基因?qū)爰状冀湍妇胁⒊晒Ρ磉_(dá)。回答下列問題。（1）獲取目的基因是實(shí)施基因工程的第一步，獲取目的基因的方法有_____、__________(答出兩種)。（2）要使膠原蛋白基因在甲醇酵母菌中表達(dá)，需要先構(gòu)建基因表達(dá)載體而不是直接將基因?qū)胧荏w細(xì)胞，原因是_________________和_________________。（3）甲醇酵母菌可高效表達(dá)外源蛋白質(zhì)并分泌到細(xì)胞外，但自身蛋白質(zhì)分泌到培養(yǎng)基中的很少，這一特點(diǎn)的優(yōu)點(diǎn)在于_____________，甲醇酵母菌分泌的膠原蛋白的結(jié)構(gòu)與人的幾乎完全相同，從細(xì)胞結(jié)構(gòu)的角度分析，其原因可能是_______。（4）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，用兩種不同的限制酶分別切割目的基因的兩端和質(zhì)粒，使目的基因和質(zhì)粒獲得不同的黏性末端，其目的是______________。9．（10分）白細(xì)胞介素是人體重要的淋巴因子，具有免疫調(diào)節(jié)、抑制腫瘤等多種功能。近年來科學(xué)家將藥用蛋白轉(zhuǎn)向植物生產(chǎn)，如圖是將人的白細(xì)胞介素基因?qū)腭R鈴薯中，培養(yǎng)生產(chǎn)白細(xì)胞介素的過程。（tsr為一種抗生素—硫鏈絲菌素的抗性基因）（1）提取人的白細(xì)胞介素基因適宜選用的限制酶是___________，不能使用限制酶SmaI的原因是___________。（2）除圖示方法外，也可從利用___________法構(gòu)建的cDNA文庫中獲取目的基因。獲得目的基因后可采用PCR技術(shù)大量擴(kuò)增，需提供Taq酶和___________等。（3）將目的基因?qū)腭R鈴薯細(xì)胞常采用___________法，其原理是將目的基因?qū)隩i質(zhì)粒上的___________。（4）為篩選出含目的基因的馬鈴薯細(xì)胞，需要在培養(yǎng)基中添加___________。最終為了檢測目的基因是否在馬鈴薯中表達(dá)，可通過____________方法進(jìn)行分子水平的檢測。10．（10分）腸出血性大腸桿菌是能導(dǎo)致人體患病的為數(shù)不多的幾種大腸桿菌中的一種，人體感染該種大腸桿菌后的主要癥狀是出血性腹瀉，感染嚴(yán)重者可出現(xiàn)溶血性尿毒綜合征（HUS），危及生命。該大腸桿菌在血平板（培養(yǎng)基中添加適量血液）上生長時(shí)，可破壞菌落周圍的紅細(xì)胞，使其褪色，從而形成透明圈。下圖為從被腸出血性大腸桿菌污染的食物中分離和提純該大腸桿菌的操作流程示意圖。請回答下列相關(guān)問題：（1）肉湯培養(yǎng)基可為培養(yǎng)的微生物提供的營養(yǎng)成分包括________________________。（2）以上操作中在血平板上的接種方法是________________；第一次接種操作前和整個(gè)接種操作結(jié)束后均需要對接種工具進(jìn)行灼燒滅菌，其目的分別是________和________。（3）為了進(jìn)一步研究該大腸桿菌的抗原性，常利用________法分離其蛋白質(zhì)，若甲蛋白質(zhì)比乙蛋白質(zhì)后洗脫出來，則相對分子質(zhì)量較大的是________。在裝填凝膠柱時(shí)，不得有氣泡產(chǎn)生，是因?yàn)開_______________。11．（15分）科學(xué)家通過導(dǎo)入外源分子使動(dòng)物的某特定基因失活，進(jìn)而培養(yǎng)出有基因缺陷的動(dòng)物來研究相應(yīng)基因的功脂，下圖是流程示意圖。請據(jù)圖回答相關(guān)問題，（1）①過程通常用到________（儀器），②過程所采取的避免雜菌污染措施，除培養(yǎng)液及培養(yǎng)用具滅菌處理外，一般需加入________，還要定期更換培養(yǎng)液。定期更換培養(yǎng)液的理由是_________________。（2）圖示體外受精過程，一般需要在________中完成。（3）為更多地獲得基因剔除小鼠，可對囊胚階段的胚胎進(jìn)行分割移植，在分割時(shí)要注意________。請說明理由________________。（4）胚胎移植能否成功，主要與供體和受體的________有關(guān)。（5）經(jīng)研究知，某基因與乳腺癌細(xì)胞的增殖密切相關(guān)。請簡述基因剔除技術(shù)在乳腺癌治療方面的基本思路：_________________。

參考答案一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個(gè)選項(xiàng)符合題目要求）1、A【解析】

本尼迪特試劑是由甲液（質(zhì)量濃度為0.1g/mL氫氧化鈉溶液）和乙液（質(zhì)量濃度為0.05g/mL硫酸銅溶液）組成，用于鑒定還原糖，使用時(shí)要將甲液和乙液混合均勻后再加入含樣品的試管中，且需水浴加熱；雙縮脲試劑由A液（質(zhì)量濃度為0.1g/mL氫氧化鈉溶液）和B液（質(zhì)量濃度為0.01g/mL硫酸銅溶液）組成，用于鑒定蛋白質(zhì)，使用時(shí)要先加A液后再加入B液?！驹斀狻緼、在制作花生種子徒手切片時(shí)，為便于后續(xù)的操作，需先將花生子葉的一端切出一個(gè)平面，A正確；B、本尼迪試劑在水浴條件下與還原糖產(chǎn)生紅黃色沉淀，B錯(cuò)誤；C、檢測蛋白質(zhì)時(shí)，應(yīng)取2mL樣本上清液加入2mL雙縮脲試劑A，振蕩試管，使樣本與試劑A混合均勻，再加入5滴雙縮脲試劑B，C錯(cuò)誤；D、活動(dòng)中實(shí)驗(yàn)前后的現(xiàn)象形成了前后（自身）對照，D錯(cuò)誤。故選A?！军c(diǎn)睛】本題考查生物組織中化合物的鑒定，對于此類試題，需要考生注意的細(xì)節(jié)較多，如實(shí)驗(yàn)的原理、實(shí)驗(yàn)采用的試劑及試劑的使用方法、實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象等，需要考生在平時(shí)的學(xué)習(xí)過程中注意積累。2、B【解析】四倍體西瓜植株在減數(shù)分裂過程中，由于部分細(xì)胞內(nèi)染色體聯(lián)會紊亂，不能產(chǎn)生正常配子，因此也無法通過受精作用形成種子，導(dǎo)致西瓜少籽，A正確；由于完全無籽西瓜是用萘乙酸（生長素類似物）涂抹在四倍體植株花的雌蕊形成的，而用萘乙酸涂抹在四倍體植株花的雌蕊只會促進(jìn)果實(shí)的發(fā)育而不能改變其染色體及染色體組數(shù)目，因此完全無籽西瓜果肉細(xì)胞中有4個(gè)染色體組，B錯(cuò)誤；萘乙酸（生長素類似物）可以促進(jìn)四倍體西瓜果實(shí)的發(fā)育，但將萘乙酸（生長素類似物）涂抹在四倍體植株花的雌蕊獲得完全無籽西瓜時(shí)，需要對四倍體植株花做去雄套袋處理，否則如果接受了其他四倍體西瓜的花粉，會產(chǎn)生有籽西瓜，C、D正確?！军c(diǎn)睛】本題考查無子西瓜的形成過程。注意與所學(xué)的三倍體無籽西瓜培育方法不同。解答本題需要學(xué)生正確分析所得的四倍體西瓜少籽的原因，還需要注意在用萘乙酸（生長素類似物）獲得無子果實(shí)時(shí)需要去雄處理，且此方法不會改變物種的染色體數(shù)目。3、B【解析】

分析題圖：該圖為植物葉肉細(xì)胞部分結(jié)構(gòu)示意圖，其中①是葉綠體、②是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、③是線粒體、④是液泡。【詳解】A、②是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，能對來自核糖體的蛋白質(zhì)進(jìn)行加工和運(yùn)輸，A正確；B、①葉綠體中含有光合色素，④液泡中含有色素，但不屬于光合色素，B錯(cuò)誤；C、③是線粒體，是細(xì)胞進(jìn)行有氧呼吸的主要場所，C正確；D、①是葉綠體，含有光合色素，是植物進(jìn)行光合作用的場所，D正確。故選B?！军c(diǎn)睛】本題結(jié)合模式圖，考查細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能，要求考生識記細(xì)胞中各種結(jié)構(gòu)的圖象，能準(zhǔn)確判斷圖中各結(jié)構(gòu)的名稱，再根據(jù)題干要求準(zhǔn)確答題。4、A【解析】

有氧呼吸第一階段為葡萄糖酵解，場所是細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)，第二階段為丙酮酸分解形成二氧化碳，場所是線粒體基質(zhì)，第三階段是還原氫和氧結(jié)合形成水，場所是線粒體內(nèi)膜。光反應(yīng)的場所是葉綠體類囊體薄膜，光反應(yīng)的產(chǎn)物是NADPH、ATP和氧氣。【詳解】A、線粒體中催化丙酮酸分解的酶分布在線粒體基質(zhì)中，A錯(cuò)誤；B、溶酶體膜上的蛋白質(zhì)經(jīng)過修飾成為特殊結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，不會被自身水解酶水解，B正確；C、NADPH是光反應(yīng)的產(chǎn)物，形成場所是葉綠體類囊體薄膜，故葉綠體中催化NADPH合成的酶分布在類囊體膜上，C正確；D、生物膜的功能特點(diǎn)是具有選擇透過性，主要與載體蛋白的種類和數(shù)量有關(guān)，也與磷脂雙分子層有關(guān)，D正確。故選A。5、C【解析】

低溫誘導(dǎo)染色體數(shù)目加倍實(shí)驗(yàn)的原理：1、低溫能抑制紡錘體的形成，使子染色體不能移向細(xì)胞兩極，從而引起細(xì)胞內(nèi)染色體數(shù)目加倍。2、該實(shí)驗(yàn)的步驟為選材→固定→解離→漂洗→染色→制片。3、該實(shí)驗(yàn)采用的試劑有卡諾氏液（固定）、改良苯酚品紅染液（染色），體積分?jǐn)?shù)為15%的鹽酸溶液和體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精溶液（解離）?！驹斀狻緼、洋蔥鱗片葉內(nèi)表皮細(xì)胞為成熟的植物細(xì)胞，含有大液泡，可用作觀察細(xì)胞的質(zhì)壁分離與復(fù)原的實(shí)驗(yàn)材料，A正確；B、用顯微鏡觀察低溫誘導(dǎo)的洋蔥細(xì)胞時(shí)，由于低溫能抑制前期紡錘體的形成，進(jìn)而使細(xì)胞中染色體數(shù)加倍，而視野中的細(xì)胞只有少數(shù)處于前期，因此視野中既有二倍體細(xì)胞也有染色體數(shù)目變化的細(xì)胞，B正確；C、使用卡諾氏液浸泡根尖固定細(xì)胞形態(tài)后，要用體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精沖洗2次后才能制作裝片，C錯(cuò)誤；D、洋蔥根尖的分生區(qū)細(xì)胞具有分裂能力，能用來觀察有絲分裂，分生區(qū)細(xì)胞為正方形，有的細(xì)胞正在分裂，所以觀察有絲分裂實(shí)驗(yàn)時(shí)需要在顯微鏡下找到呈正方形、細(xì)胞數(shù)目多的區(qū)域來觀察，D正確。故選C。6、D【解析】

本題應(yīng)選用配子法來計(jì)算基因型概率。在開始審題的時(shí)候看到有兩對等位基因，但是由于親本均為bb，因此只要考慮Aa和AA這一對基因，此時(shí)應(yīng)選擇基因的分離定律解題?！驹斀狻恳阎H本的基因型是Aabb和AAbb，分析基因型可知只要考慮A與a這一對相對性狀個(gè)體間的自由交配（因?yàn)閮蓚€(gè)親本都是bb，后代也全為bb）。據(jù)題意無論雌性或雄性，都有Aa和AA兩種類型，Aa：AA=1：2，這樣親本AA占2/3、Aa占1/3，這樣親本產(chǎn)生的配子中A占1/3×1/2+2/3=5/1，a占1/1．無論雌、雄均有這兩種，均為這樣的比例，因此后代AA的概率為5/1×5/1=25/31，aa的概率為1/1×1/1=1/31，Aa的概率2×5/1×1/1=10/31，因此該種群自由交配產(chǎn)生的子代中能穩(wěn)定遺傳的個(gè)體比例為25/31+1/31=13/18。故選D。二、綜合題：本大題共4小題7、基因的選擇性表達(dá)酶B、酶C質(zhì)粒與目的基因自身環(huán)化；防止同時(shí)破壞質(zhì)粒中的兩個(gè)標(biāo)記基因氨芐青霉素四環(huán)素目的基因的插入破壞了四環(huán)素抗性基因，重組質(zhì)粒上只含有氨芐青霉素抗性基因，而質(zhì)粒上含氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因，在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)菌不能生長，而只導(dǎo)入質(zhì)粒的細(xì)菌能生長基因【解析】

1、基因表達(dá)載體的組成：目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因等。標(biāo)記基因可便于目的基因的鑒定和篩選。2、由于不同限制酶識別的堿基序列不同，所以在切割質(zhì)粒和目的基因時(shí)常用雙酶切，可防止目的基因反向粘連和質(zhì)粒自行環(huán)化?！驹斀狻浚?）細(xì)胞分化的實(shí)質(zhì)是基因選擇性表達(dá)，故在分化誘導(dǎo)因子作用下，正常細(xì)胞可以擺脫抑制、合成干擾素，該過程發(fā)生的實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)。（2）標(biāo)記基因可用于鑒定目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，所以重組質(zhì)粒上至少要保留一個(gè)標(biāo)記基因，由于兩個(gè)標(biāo)記基因上均含有酶A的切點(diǎn)，所以不能用酶A切割，為了防止連接時(shí)目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化，故在構(gòu)建重組載體DNA分子時(shí)，可以選用酶B和酶C兩種限制酶對質(zhì)粒pBR322和干擾素基因進(jìn)行雙酶切。（3）由于質(zhì)粒和重組質(zhì)粒上都含有氨芐青霉素抗性基因，而未導(dǎo)入質(zhì)粒的細(xì)菌不含有該抗性基因，所以將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌中，然后將細(xì)菌涂布到含氨芐青霉素的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，就可得到含質(zhì)粒PBR322或重組質(zhì)粒的細(xì)菌單菌落；由于目的基因的插入破壞了四環(huán)素抗性基因，重組質(zhì)粒上只含有氨芐青霉素抗性基因，而質(zhì)粒上含有氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因，因此再從前面培養(yǎng)基上獲得的每一個(gè)單菌落中挑取部分細(xì)菌轉(zhuǎn)涂到含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，不能生長的絕大部分是含有重組質(zhì)粒的細(xì)菌。（4）蛋白質(zhì)工程是通過基因修飾或基因合成，對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造的一項(xiàng)技術(shù)。【點(diǎn)睛】本題考查基因工程和蛋白質(zhì)工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的操作工具及操作步驟等，掌握各步驟中的相關(guān)細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題，屬于考綱理解和應(yīng)用層次的考查。8、從基因文庫中獲取人工合成目的基因無表達(dá)所需的啟動(dòng)子目的基因無復(fù)制原點(diǎn)（目的基因不能在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在）便于目的蛋白的分離和純化甲醇酵母菌有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體防止目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化、防止目的基因與質(zhì)粒反向連接【解析】

基因工程是狹義的遺傳工程，基因工程的基本原理是讓人們感興趣的基因（即目的基因）在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定高效地表達(dá)。為了實(shí)現(xiàn)基因工程的目標(biāo)，通常要有多種工具酶、目的基因、載體和宿主細(xì)胞等基本要素，并按照一定的程序進(jìn)行操作，它包括目的基因的獲得、重組DNA的形成，重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞也稱（宿主）細(xì)胞、篩選含有目的基因的受體細(xì)胞和目的基因的表達(dá)等幾個(gè)方面?；虮磉_(dá)載體的構(gòu)建（即目的基因與運(yùn)載體結(jié)合）是實(shí)施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。其構(gòu)建目的是使目的基因能在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。【詳解】（1）獲取目的基因是實(shí)施基因工程的第一步，獲取目的基因的方法有從基因文庫中獲取（目的基因序列未知）、人工合成（目的基因序列已知）。（2）單獨(dú)的目的基因容易丟失，且目的基因的表達(dá)需要啟動(dòng)子和終止子，目的基因的復(fù)制需要復(fù)制原點(diǎn)，因此要使膠原蛋白基因在甲醇薛母菌中表達(dá)，需要先構(gòu)建基因表達(dá)載體而不是直接將基因?qū)胧荏w細(xì)胞。（3）甲醇酵母菌可高效表達(dá)外源蛋白質(zhì)并分泌到細(xì)胞外，但自身蛋白質(zhì)分泌到培養(yǎng)基中的很少，這樣分泌到細(xì)胞外的蛋白主要是我們需要的目的蛋白，這一特點(diǎn)的優(yōu)點(diǎn)在于便于目的蛋白的分離和純化。甲醇酵母菌分泌的膠原蛋白的結(jié)構(gòu)與人的幾乎完全相同，從細(xì)胞結(jié)構(gòu)的角度分析，其原因可能是甲醇酵母菌有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，可以對表達(dá)出的蛋白質(zhì)進(jìn)行進(jìn)一步的加工、運(yùn)輸。（4）用一種酶切質(zhì)粒和目的基因，可能會引起質(zhì)?；蚰康幕蜃陨憝h(huán)化。在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，用兩種不同的限制酶分別切割目的基因的兩端和質(zhì)粒，使目的基因和質(zhì)粒獲得不同的黏性末端，其目的是防止目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化、防止目的基因與質(zhì)粒反向連接?！军c(diǎn)睛】本題重點(diǎn)在基因工程的步驟及原理，須在理解的基礎(chǔ)上加強(qiáng)識記。9、PstⅠ和HindⅢ限制酶SmaⅠ酶切位點(diǎn)位于白細(xì)胞介素基因中部，使用它會造成目的基因斷裂反轉(zhuǎn)錄引物農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化T-DNA硫鏈絲菌素抗原—抗體雜交【解析】

分析題圖，圖示表示人的白細(xì)胞介素基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，載體和目的基因都有限制酶PstⅠ和HindⅢ的切割位點(diǎn)，所以切割載體和目的基因時(shí)用限制酶PstⅠ和HindⅢ，再用DNA連接酶連接目的基因和運(yùn)載體形成重組載體。獲取目的基因的方法包括從基因文庫中獲取、cDNA文庫法、供體細(xì)胞的DNA中直接分離基因（鳥槍法）。農(nóng)桿菌通過侵染植物傷口進(jìn)入細(xì)胞后，可將Ti質(zhì)粒的T-DNA插入到植物基因組中?！驹斀狻浚?）載體和目的基因都有限制酶PstⅠ和HindⅢ的切割位點(diǎn)，使用限制酶SmaI則會破壞目的基因；（2）目的基因的獲取可以采用cDNA文庫法（即逆轉(zhuǎn)錄法），指以某生物成熟mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA序列的重組DNA群體，采用PCR技術(shù)大量擴(kuò)增，需提供Taq酶和引物等；（3）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，利用的是Ti質(zhì)粒上的T-DNA；（4）構(gòu)建好的表達(dá)載體含有硫鏈絲菌素的抗性基因，因此可以在培養(yǎng)基中添加硫鏈絲菌素進(jìn)行篩選，為檢測目的基因是否順利表達(dá)，可以通過抗原-抗體雜交技術(shù)?！军c(diǎn)睛】解答本題的關(guān)鍵是分析題圖中的限制酶切割位點(diǎn)，明確目的基因和質(zhì)粒都有PstⅠ和HindⅢ的切割位點(diǎn)，從而可以用于構(gòu)建基因表達(dá)載體，其他的酶切位點(diǎn)則會破壞目的基因或抗性基因。10、碳源、氮源、水、無機(jī)鹽等平板劃線法殺死接種環(huán)上的微生物，避免污染培養(yǎng)基（滅菌）避免污染環(huán)境和感染操作者凝膠色譜乙蛋白質(zhì)氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫順序降低分離效果【解析】

凝膠色譜法（分配色譜法）：①原理：分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動(dòng)快；分子量小的分子穿過多孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程長，流動(dòng)慢。②凝膠材料：多孔性，多糖類化合物，如葡聚糖、瓊脂糖。③分離過程：混合物上柱→洗脫→大分子流動(dòng)快、小分子流動(dòng)慢→收集大分子→收集小分子，洗脫：從色譜柱上端不斷注入緩沖液，促使蛋白質(zhì)分子的差速流動(dòng)。④作用：分離蛋白質(zhì)，測定生物大分子分子量，蛋白質(zhì)的脫鹽等?！驹斀狻浚?）肉湯培養(yǎng)基是天然培養(yǎng)基，可為培養(yǎng)的微生物提供的營養(yǎng)成分包括碳源、氮源、水、無機(jī)鹽等。（2）圖示中用到了接種環(huán)從液體培養(yǎng)基中接種到固體培養(yǎng)基中，因此在血平板上的接種方法是平板劃線法。第一次接種操作前對接種工具進(jìn)行灼燒滅菌，其目的是殺