2/2體外診斷試劑分析特異性研究

2023-04-2808:10體外診斷試劑注冊申報資料的分析性能評估主要包括準確度、精密度、包容性、檢出限、分析特異性、高劑量鉤狀效應、測量區(qū)間及可報告區(qū)間等項目的研究資料。其中分析特異性研究是性能評估中的重要資料，通過模擬產品實際使用過程中各種干擾因素可能對檢測結果產生的影響，為產品有效性提供證據。分析特異性研究主要包括交叉反應和干擾試驗，根據方法學、檢測靶標、樣本類型等不同，分析特異性的要求也存在區(qū)別。

一、交叉反應

交叉反應物主要考慮因素包括：

1）結構類似物，由于反應原理的相似性，結構類似物是交叉反應驗證的重要部分，如具有同源性的抗原結構、具有同源性序列的核酸片段、核酸序列相近或具有同源性的野生型或其他突變類型序列、檢測范圍外的型別、同類藥物中的所有藥物/化合物和藥物代謝物、以及易共存的其他類似物。如CYP2C19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測試劑應對靶標的同源性序列（CYP2C19的其他突變序列、CYP2C9基因序列等）進行交叉反應驗證；EGFR突變基因檢測試劑應對EGFR基因不同序列、HER家族不同基因、不同濃度的野生型人DNA樣本、非人類基因組基因等進行交叉反應驗證。

2）易引起相同或相似的臨床癥狀的其他病原體、相同或相似的臨床癥狀出現時，體內易升高的其他蛋白、采樣部位正常寄生或易并發(fā)的其他微生物（包含近緣微生物）。如冠狀病毒檢測試劑盒應考慮易引起相似臨床癥狀的流感病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒、諾如病毒等；病原體抗體檢測試劑盒需考慮高濃度病原體特異性IgG抗體與特異性IgM抗體的交叉反應；不同采樣部位的正常寄生微生物，如宮頸拭子樣本應選擇在人類泌尿、生殖道寄生微生物或病原體，鼻拭子樣本應選擇呼吸道常見微生物。

3）原材料設計可能引入的其他因素：如原材料為鼠源單抗，則應驗證人抗鼠抗體（HAMA）的交叉反應；如檢測試劑采用基因重組抗原，應增加對重組基因導入微生物特異性抗體的交叉反應評價。

4）交叉反應驗證的樣本，應盡量采用臨床樣本或病原體培養(yǎng)物。根據產品特點選擇潛在的交叉反應物質進行驗證，一般建議選擇高濃度交叉反應物水平進行驗證，細菌或者真菌的最低濃度為106CFU/mL；病毒的最低濃度為105PFU/mL；人野生型DNA至少包含100ng/μL野生核酸樣本。對于交叉反應中病原體的最低濃度，生產商也可根據病原體的具體特性規(guī)定相應濃度及濃度單位，應提供用于所有用于交叉反應驗證的病原體的制備方法、來源、種屬和濃度信息，可選擇已上市產品進行確定，如無已上市產品，也可通過企業(yè)自建的穩(wěn)定合理方法確認。

二、干擾試驗

1）干擾物質類型：干擾物質本身一般不能與試劑產生反應，但能干擾待測分析物在檢測系統(tǒng)中的反應效率，從而影響試驗結果的準確性。干擾因素主要包括內源性干擾和外源性干擾，內源性干擾主要為正常生理和病理狀態(tài)下的人體代謝產物，外源性干擾物主要為常用藥物及其代謝物、患者群體使用的藥物及其代謝物、樣本采集或處理過程中接觸到的物質如抗凝劑、防腐劑等。

2）干擾物質舉例：樣本類型為血清、血漿、全血的檢測試劑盒，常見內源性干擾物主要包括血紅蛋白、脂類、膽紅素、膽固醇、自身抗體、疾病相關蛋白、患者體內異常的生化代謝物等；常見的外源性干擾物質包括血漿/全血樣本抗凝劑、常用藥物等。以鼻拭子為受檢樣本的呼吸道病原體檢測試劑盒，內源性干擾主要包括鼻分泌物或黏液，如粘蛋白、血液，外源性干擾主要包括鼻咽部局部藥物、全身性藥物如抗病毒藥物、抗生素等；尿液樣本干擾物需考慮尿液中常見代謝物、pH等。

3）干擾物質的驗證：一般采用添加干擾物質的樣本進行研究，為避免基質效應，如干擾物質與適用樣本不同，則添加量宜少于總體積的5%。首先對可疑干擾物質采用臨床樣本中的最高濃度（最差情形）進行干擾篩查或驗證，一般采用配對比對的方式，比較添加與未添加高濃度干擾物質的樣本檢測結果的差異。如果差異超出接受范圍或對檢測結果有顯著性影響，可確認該物質為干擾物質，可進一步評估該干擾物質濃度與干擾程度之間的關系；如果差異在接受范圍內或對臨床無顯著性影響，可認為該濃度的物質不產生干擾，在產品說明書中明確不產生干擾的物質濃度上限。干擾實驗建議采用包含弱陽性水平在內，至少兩個