ICS65.020.20

B05

DB41

河南省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB41/T1614—2018

單孢雜交平菇品種選育技術(shù)規(guī)程

2018-06-19發(fā)布2018-09-19實(shí)施

河南省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DB41/T1614—2018

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物營養(yǎng)與資源環(huán)境研究所。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：孔維麗、康源春、張玉亭、袁瑞奇、孔維威、胡素娟、劉芹。

本標(biāo)準(zhǔn)參加起草人：韓玉娥、段亞魁、宋志波、徐柯、崔筱、孟慶濤。

I

DB41/T1614—2018

平菇單孢雜交品種選育技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了單孢雜交平菇品種選育技術(shù)的術(shù)語和定義、親本選擇、單核菌絲的制備、單孢雜交、

新菌株篩選、鑒定和保藏。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于平菇單孢雜交新品種的選育。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T1003—2008普通用途雙向拉伸聚丙烯（BOPP）薄膜

GB/T4456—2008包裝用聚乙烯吹塑薄膜

GB5749—2006生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

GB/T12728—2006食用菌術(shù)語

GB/T21125—2007食用菌品種選育技術(shù)規(guī)程

NY/T119—1989飼料用小麥麩

NY/T528—2010食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

NY/T1844—2010農(nóng)作物品種審定規(guī)范食用菌

NY5099—2002無公害食品食用菌栽培基質(zhì)安全技術(shù)要求

NY5358—2007無公害食品食用菌產(chǎn)地環(huán)境條件

JC/T479—2013建筑生石灰

DB41/T1211—2016平菇發(fā)酵料栽培技術(shù)規(guī)程

DB41/T1186—2015平菇熟料栽培技術(shù)規(guī)程

農(nóng)業(yè)部第62號令《食用菌菌種管理辦法》2006年

3術(shù)語和定義

GB/T12728—2006和GB/T21125—2007界定的術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

擔(dān)孢子

經(jīng)核配和減數(shù)分裂后在外生于擔(dān)子上形成的孢子。

3.2

單孢子分離法

通過分離單個孢子以獲得真菌純培養(yǎng)物的方法。

3.3

菌株

由單一細(xì)胞個體通過無性繁殖形成的純培養(yǎng)物及其后代。

3.4

1

DB41/T1614—2018

品種

人工選育或發(fā)現(xiàn)并改良，具備特異性、一致性、穩(wěn)定性，具有符合《農(nóng)業(yè)植物品種命名規(guī)定》的品

種名稱。

3.5

對照品種

目前生產(chǎn)上常用的主栽品種。

4親本選擇

選擇生物學(xué)性狀優(yōu)勢互補(bǔ)、親緣關(guān)系較遠(yuǎn)、生態(tài)差異大、特異性差異顯著的菌株為親本。

5單核菌絲的制備

5.1孢子收集

挑選第一茬菇顏色均勻、菇型完整，能夠代表親本菌株生物學(xué)特性的8成熟整朵子實(shí)體為種菇，選

取其中1～2片菌蓋為種菇，放置在干燥潔凈與孢子顏色有差異的紙張上，折疊存放，保持環(huán)境溫度

24℃～26℃，濕度55%～65%，放置12h～18h，即可得到孢子印。

5.2單孢分離

5.2.1一步稀釋法

無菌針挑取0.1mm×0.1mm孢子印于滅菌后的400mL無菌水內(nèi)，混合均勻，吸取1mL孢子混合

液移入PDA培養(yǎng)基內(nèi)，旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，使懸浮液鋪滿培養(yǎng)基表面。

5.2.2梯度稀釋法

250mL三角瓶加入100mL純凈水滅菌備用，無菌接入一環(huán)平菇孢子，搖勻。選用4～5支20ml試

管滅菌備用，每支試管內(nèi)加入9mL無菌水，吸取1mL孢子懸浮液加入1號試管內(nèi)搖勻，吸取1mL1

號試管內(nèi)孢子懸浮液加入2號試管內(nèi)，稀釋至10-4～10-6，顯微鏡鏡檢，以視野內(nèi)保留4～5個孢子為

宜，吸取1mL孢子懸液移入PDA培養(yǎng)皿內(nèi)，旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，使懸浮液鋪滿整個皿內(nèi)培養(yǎng)基表面。

5.3單孢鑒定

5.3.1插片培養(yǎng)

將接有孢子懸浮液的培養(yǎng)皿，放置于25℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)5d～6d，肉眼能見孢子萌發(fā)，取滅菌后的

0.5μL～10μL移液槍槍頭，垂直對準(zhǔn)萌發(fā)的孢子，扎取，攜帶培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入新的PDA培養(yǎng)皿內(nèi)，25℃

培養(yǎng)7d。萌發(fā)后的菌絲再轉(zhuǎn)接至新的培養(yǎng)皿內(nèi)，距接種點(diǎn)0.5cm處，插入無菌蓋玻片，25℃培養(yǎng)，

以30～40個培養(yǎng)皿為宜。

5.3.2顯微鏡檢

取潔凈載玻片滴入0.5mL去離子水或棉藍(lán)染色液，取出長至蓋玻片1cm的菌絲，覆蓋至載玻片，

去除多余水分，放置2min后鏡檢。高倍鏡頭下，觀察菌絲是否有鎖狀聯(lián)合，有鎖狀聯(lián)合現(xiàn)象即為雙核

菌絲，保留單核菌絲。

5.4單核菌絲挑選

2

DB41/T1614—2018

觀察平菇單核菌絲長勢，大致分為4種類型，每個類型挑選1～3個單核菌絲，總量以不超過10

個為宜。

6單孢雜交

6.1對峙培養(yǎng)

分別將兩個不同親本的單核菌絲接種于培養(yǎng)皿內(nèi)，兩者相距1cm，25℃培養(yǎng)8d～10d，對峙培養(yǎng)

區(qū)有拮抗線，表明雜交成功。

6.2雜合子培養(yǎng)

拮抗線兩側(cè)1cm處，用接種刀切割成0.5mm2菌塊，挑取4～5塊菌分別轉(zhuǎn)接至新的培養(yǎng)皿培養(yǎng)基

內(nèi)，25℃培養(yǎng)7d～8d。雜交后獲得大量的雜合子，插片培養(yǎng)，顯微鏡檢，保留有鎖狀聯(lián)合的雜合

子。

6.3雜合子鑒定

雜合子與兩個親本、雜合子之間通過拮抗試驗(yàn)，篩選出不同的菌株即為雜交菌株，進(jìn)入初選栽培

試驗(yàn)。

7菌株篩選

7.1初選

7.1.1菌袋制作

培養(yǎng)料配方：棉籽殼98%，石灰2%，采用14×28cm聚丙烯袋，菌袋質(zhì)量應(yīng)符合GB/T1003-2008要

求。一端封口，高壓滅菌，無菌接種，每個菌株10～15袋。23℃～25℃培養(yǎng)，觀察菌絲生長情況。

7.1.2出菇管理

大棚出菇，保持棚內(nèi)溫度10℃～28℃，空氣相對濕度75%～95%，二氧化碳濃度600mg/L以下，自

然光照，一端出菇，記錄出菇時間、子實(shí)體形狀、顏色、出菇整齊度、抗雜性、抗病性、產(chǎn)量等。

7.1.3優(yōu)良菌株篩選

根據(jù)選育目標(biāo)設(shè)定挑選指標(biāo)，初選出顏色適宜、總產(chǎn)量高產(chǎn)、抗性強(qiáng)的雜交菌株，進(jìn)入栽培試

驗(yàn)。

7.2復(fù)篩

復(fù)試采用大棚栽培和設(shè)施化栽培，可平行進(jìn)行，需要2～3個生產(chǎn)周期，每個菌株90～100袋（瓶），

通常以2個親本菌株為對照。

7.2.1大棚栽培

7.2.1.1熟料栽培

適宜周年栽培。按DB41/T1186—2015的規(guī)定執(zhí)行，比較參試菌株之間菌絲長勢、出菇早晚、出菇

溫度、抗病性、抗雜性、產(chǎn)量、生物學(xué)效率、子實(shí)體性狀、出菇率等，篩選出綜合性狀超過親本或與親

3

DB41/T1614—2018

本相當(dāng)?shù)碾s交菌株為優(yōu)良菌株。

7.2.1.2發(fā)酵料栽培

適宜秋冬季栽培。按DB41/T1211—2016的規(guī)定執(zhí)行，比較參試菌株之間菌絲長勢、出菇早晚、出

菇溫度、抗病性、抗雜性、產(chǎn)量、生物學(xué)效率、子實(shí)體性狀、出菇率等，篩選出綜合性狀超過親本或與

親本相當(dāng)?shù)碾s交菌株為優(yōu)良菌株。

7.2.2工廠化栽培

栽培容器采用質(zhì)量符合GB/T1003—2008規(guī)定的1100ml塑料瓶及質(zhì)量符合GB/T1003—2008規(guī)定

折經(jīng)18～20×38×0.005cm聚丙烯袋為宜，栽培原料應(yīng)符合NY5099—2002的規(guī)定，選用適宜的配方，

采用機(jī)械化裝袋（瓶）、高壓滅菌、強(qiáng)制降溫、無菌接種、適溫集中培養(yǎng)、后熟技術(shù)，在可控的溫度、

濕度、光照強(qiáng)度、二氧化碳濃度條件下集中出菇管理，記錄菌絲滿瓶時間、出菇早晚、出菇率、一茬菇

產(chǎn)量、生物學(xué)特性等特征。篩選出一茬菇生物學(xué)效率大于50%并超過親本的菌株為優(yōu)良菌株。

7.3生產(chǎn)篩選

生產(chǎn)篩選試驗(yàn)一般安排1～2生產(chǎn)周期，栽培數(shù)量以500袋為宜，以生產(chǎn)上主栽品種對照品種。

7.3.1大棚栽培

采用熟料、發(fā)酵料發(fā)酵料栽培模式，按7.2.1.1、7.2.1.2的規(guī)定執(zhí)行，比較各個菌株間菌絲長勢、

出菇時間、抗病性、抗雜性、產(chǎn)量、生物學(xué)效率、品質(zhì)等，篩選出產(chǎn)量超過對照菌株或產(chǎn)量相當(dāng)品質(zhì)等

其他性狀優(yōu)于對照的菌株為優(yōu)良菌株。

7.3.2工廠化栽培

以現(xiàn)有高產(chǎn)、親本菌株為對照菌株，按照7.2.2執(zhí)行，篩選出一茬出菇率、一茬菇產(chǎn)量、一茬菇生

物學(xué)效率超過對照菌株即為優(yōu)良菌株。

8品種鑒定與登記

8.1特異性鑒定

送至有檢驗(yàn)檢測資質(zhì)的單位做特異性檢測，具有遺傳特異性的菌株為新菌株。

8.2品種登記

通過申報、審查并獲得植物新品種權(quán)保護(hù)證書。

8.3品種鑒定

通過河南省農(nóng)業(yè)廳種子管理站農(nóng)作物品種鑒定要求，并獲得河南省農(nóng)作物品種鑒定證書。

9菌種保藏

采用短期和長期兩種保藏方式，短期保藏采用低溫斜面保藏法為宜，長期保藏采用液氮冷凍保藏法

為宜。

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DB41/T1614—2018

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物營養(yǎng)與資源環(huán)境研究所。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：孔維麗、康源春、張玉亭、袁瑞奇、孔維威、胡素娟、劉芹。

本標(biāo)準(zhǔn)參加起草人：韓玉娥、段亞魁、宋志波、徐柯、崔筱、孟慶濤。

I

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平菇單孢雜交品種選育技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了單孢雜交平菇品種選育技術(shù)的術(shù)語和定義、親本選擇、單核菌絲的制備、單孢雜交、

新菌株篩選、鑒定和保藏。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于平菇單孢雜交新品種的選育。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T1003—2008普通用途雙向拉伸聚丙烯（BOPP）薄膜

GB/T4456—2008包裝用聚乙烯吹塑薄膜