專題微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用②分類a、按培養(yǎng)基得物理性質(zhì)可以分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。b、按培養(yǎng)基得用途可以分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)物理性質(zhì)液體培養(yǎng)基不加凝固劑固體培養(yǎng)基加凝固劑,如瓊脂用途選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),用來抑制不需要得微生物得生長(zhǎng),促進(jìn)所需要得微生物得生長(zhǎng)培養(yǎng)和分離出特定微生物(如分離酵母菌和霉菌,可以在培養(yǎng)基中加入青霉素)鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物得代謝特點(diǎn),在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品鑒別不同種類得微生物,如用伊紅——美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中就是否含有大腸桿菌(若有,則菌落呈深紫色并帶有金屬光澤)【特別提醒】

選擇培養(yǎng)基一般只生長(zhǎng)具有特定目得得微生物,鑒別培養(yǎng)基可以存在其她微生物,而且能鑒別特定得微生物。③培養(yǎng)基配方及營(yíng)養(yǎng)要素

基本營(yíng)養(yǎng)要素:各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽。此外還要滿足不同微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣得需求。

無菌技術(shù)主要操作要求

a、實(shí)驗(yàn)前應(yīng)對(duì)操作空間、操作人員消毒,對(duì)所用器具和培養(yǎng)基滅菌。

b、實(shí)驗(yàn)進(jìn)行時(shí)需在酒精燈火焰周圍無菌區(qū)操作,另外要避免已滅菌處理材料再次污染。

(2)無菌技術(shù)

(1)消毒和滅菌得區(qū)別用酒精消毒時(shí),70%得酒精殺菌效果最好,

原因就是:濃度過高,使菌體表面蛋白質(zhì)凝固成一層保護(hù)膜,乙醇分子不能滲入其中;濃度過低,殺菌力減弱。

2、純化大腸桿菌以及菌種得保藏

(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基:

計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板?！居亚樘嵝选科桨謇淠?皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠,凝固后得培養(yǎng)基表面得溫度也比較高,將平板倒置,既可以使培養(yǎng)基表面得水分更好地?fù)]發(fā);又可以防止皿蓋上得水珠落入培養(yǎng)基,造成污染。大家學(xué)習(xí)辛苦了，還是要堅(jiān)持繼續(xù)保持安靜(2)純化大腸桿菌

①原理:在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個(gè)細(xì)胞,使其長(zhǎng)成單個(gè)得菌落,這個(gè)菌落就就是一個(gè)純化得細(xì)菌菌落。

(2)純化大腸桿菌

平板劃線法:通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線得操作,將聚集得菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基得表面;

稀釋涂布平板法:將菌液進(jìn)行一系列得梯度稀釋,然后將不同稀釋度得菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基得表面,進(jìn)行培養(yǎng)。(2)接種操作:

第一步:灼燒接種環(huán)就是為了避免接種環(huán)上可能存在得微生物污染培養(yǎng)基;每次劃線前:灼燒接種環(huán)就是為了殺死上次劃線結(jié)束后,接種環(huán)上殘留得菌種,使下一次劃線時(shí),接種環(huán)上得菌種直接來源于上次劃線得末端,從而通過劃線次數(shù)得增加,使每次劃線時(shí)菌種得數(shù)目逐漸減少,以便得到菌落劃線結(jié)束后:灼燒接種環(huán),能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留得菌種,避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。

(3)菌種得保藏

①短期保存:固體斜面培養(yǎng)基上4℃保存,菌種易被污染或產(chǎn)生變異。

②長(zhǎng)期保存:－20℃甘油管在冷凍箱中保藏。

【例1】分析下面培養(yǎng)基得配方:KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂。請(qǐng)回答:(1)在該培養(yǎng)基得配方中,為微生物得生長(zhǎng)提供碳源和氮源得分別就是________和________。(2)想一想這種培養(yǎng)基對(duì)微生物就是否具有選擇作用？如果具有,又就是如何進(jìn)行選擇得？____________________________________________。

(3)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者得雙手、空氣、牛奶所采用得滅菌及消毒方法依次就是(

)①化學(xué)消毒②灼燒滅菌③干熱滅菌④紫外線滅菌⑤高壓蒸汽滅菌⑥巴氏消毒法A、⑤③②①④⑥B、①②③④⑤⑥C、⑥②③④①⑤D、③④②①⑥⑤【答案】

(1)葡萄糖尿素(2)有選擇作用。因?yàn)榇伺浞街心蛩鼐褪俏┮坏?因此,只有能夠利用尿素得微生物才能夠生長(zhǎng)(3)A

二、土壤中分解尿素得細(xì)菌得分離與計(jì)數(shù)

1、分離得原理

土壤中得細(xì)菌能合成脲酶,能把尿素分解成無機(jī)物。2、分離分解尿素得細(xì)菌所使用得特定培養(yǎng)基培養(yǎng)基:選擇培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中得氮源只有尿素,理論上只有能合成脲酶得微生物才能在上面生長(zhǎng)。

KH2PO41、4gNa2HPO42、1gMgSO4·7H2O0、2g

葡萄糖

10、0g

尿素(惟一氮源)1、0g

瓊脂15、0g

將上述物質(zhì)溶解后,用蒸餾水定容到1000mL。3、統(tǒng)計(jì)菌體數(shù)目得方法

(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法

①原理:利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,在顯微鏡下計(jì)算一定容積得樣品中微生物得數(shù)量。②方法:用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。③缺點(diǎn):不能區(qū)分死菌與活菌。

(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)

①原理:當(dāng)樣品得稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)得一個(gè)菌落,來源于樣品稀釋液中得一個(gè)活菌,通過統(tǒng)計(jì)平板上得菌落數(shù),就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。

【例2】可以鑒定出分解尿素得細(xì)菌得方法就是(

)A、以尿素為惟一氮源得培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑B、以尿素為惟一氮源得培養(yǎng)基中加入二苯胺試劑C、以尿素為惟一氮源得培養(yǎng)基中加入蘇丹Ⅲ試劑D、以尿素為惟一氮源得培養(yǎng)基中加入雙縮脲試劑

A

三、分解纖維素得微生物得分離(1)實(shí)驗(yàn)原理

即:可根據(jù)就是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。

(2)實(shí)驗(yàn)流程

土壤取樣:富含