安徽省宿州市泗縣一中2025屆生物高三上期末綜合測試模擬試題注意事項：1．答卷前，考生務必將自己的姓名、準考證號填寫在答題卡上。2．回答選擇題時，選出每小題答案后，用鉛筆把答題卡上對應題目的答案標號涂黑，如需改動，用橡皮擦干凈后，再選涂其它答案標號。回答非選擇題時，將答案寫在答題卡上，寫在本試卷上無效。3．考試結束后，將本試卷和答題卡一并交回。一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1．某同學用適宜濃度的KNO3溶液和用新鮮的紫色洋蔥鱗片葉外表皮細胞制成的臨時裝片進行細胞質壁分離實驗，15分鐘后并未觀察到質壁分離。以下相關敘述不正確的是（）A．該同學未觀察到質壁分離現象極有可能是細胞質壁分離后又出現質壁分離復原B．若實驗中出現質壁分離復原，則該過程中要消耗ATPC．質壁分離的復原實驗既能證明細胞的死活，又能判斷原生質層與細胞壁伸縮性的大小關系D．在質壁分離復原過程中，細胞吸水時開始吸收K+2．細胞膜上協(xié)助離子跨膜運輸的方式有：通過離子通道運輸的被動運輸和通過離子泵運輸的主動運輸等，下列敘述不正確的是（）A．神經元處于靜息狀態(tài)時，鉀離子通過離子通道外流B．缺氧會影響神經元興奮是因為鈉離子通過離子泵內流C．離子通過離子泵的跨膜運輸是逆濃度梯度進行的D．葡萄糖進入紅細胞的方式與離子泵運輸離子的方式不相同3．下列與實驗相關的敘述，正確的是（）A．觀察植物細胞質壁分離時，吸水紙的主要作用是吸除多余液體B．探究土壤微生物的分解作用實驗中，實驗組的土壤要進行滅菌處理C．橙色的重鉻酸鉀溶液在酸性條件下與乙醇發(fā)生化學反應，變成藍綠色D．噬菌體侵染細菌的實驗中，離心的目的是使吸附在細菌上的噬菌體與細菌分離4．鏡檢玉米花粉母細胞時，發(fā)現細胞內正在聯(lián)會的兩對非同源染色體呈異常的“十”字型結構如圖所示（圖中字母為染色體上的基因）。據此可推斷（）A．①和②、③和④是同源染色體B．圖中有一個四分體，四條染色體C．出現“十”字型結構表明染色體間發(fā)生了易位D．該細胞只能產生基因組成為AbH，aBh的配子5．下列有關細胞內物質含量比值的關系，正確的是（）A．細胞內結合水/自由水的比值，種子萌發(fā)時比休眠時高B．人體細胞內O2/CO2的比值，線粒體內比細胞質基質高C．神經纖維膜內K+/Na+的比值，動作電位時比靜息電位時高D．適宜條件下光合作用過程中C5/C3的比值，停止供應CO2后比停止前的高6．為治理蝗災，古代勞動人民想出了很多辦法，如唐人的“利用柴火誘殺成蝗”，宋人的“挖卵滅種”等；當代生態(tài)學家則提出，采取“改治結合”，即通過墾荒、修壩改變蝗蟲的產卵環(huán)境，同時結合化學、生物防治等措施，可獲得良好的治蝗效果。下列有關敘述正確的是（）A．柴火誘殺成蝗是利用行為信息傳遞的作用B．“挖卵滅種”的主要目的是改變蝗蟲種群的性別比例C．“改治結合”治蝗措施的主要目的是降低蝗蟲種群的K值D．生物防治的優(yōu)點之一是導致蝗蟲種群的抗藥基因頻率降低二、綜合題：本大題共4小題7．（9分）為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體的轉運肽基因相連，導入油菜細胞并獲得轉基因油菜品種。（1）研究人員從陸地棉細胞中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉運肽基因，如圖為所示限制酶的識別位點。這樣可以用____________________（填酶）處理兩個基因后，可得到____________端（填圖中字母）相連的融合基因。（2）將上述融合基因插入如圖2所示Ti質粒的T-DNA中。構建充足質粒并導入農桿菌中。將獲得的農桿菌接種在含____________的固體平板上培養(yǎng)得到含融合基因的單菌落，再利用培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉化的浸染液。（3）剪取油菜的葉片放入染液中一段時間，此過程的目的是利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞，經篩選后再將該油菜細胞通過植物組織培養(yǎng)獲得轉獲因油菜。整個過程涉及的原理是____________。8．（10分）近年來，在處理富營養(yǎng)化水體的污水過程中，與化學、物理除氮方法比較，目前認為微生物反硝化去除氮素污染更為經濟有效?？蒲泄ぷ髡卟捎没蚬こ碳夹g構建具有定向高效降解含氮化合物能力的工程菌，進行了相關研究。請回答問題。（1）微生物的反硝化作用，是氮循環(huán)中一個重要的生物過程。亞硝酸鹽還原酶（Nir）是該過程的關鍵酶，是由野生菌株YP4的反硝化基因（nirS）轉錄后，再翻譯出具有___________作用的蛋白質。（1）工程菌的構建①研究者利用NCBI數據庫查到nirS基因的堿基序列，設計引物，利用PCR技術擴增nirS基因。PCR技術利用了___________的原理，使用耐高溫Taq酶而未使用普通DNA聚合酶的主要原因是______________________。②研究者用HindⅢ和BamHI兩種限制酶處理nirS基因與p質粒，在_______________酶的作用下進行體外連接，用連接產物轉化大腸桿菌DH5，在含慶大霉素的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)并提取質粒，如果用HindⅢ和BamHI雙酶切，得到兩個片斷電泳結果分別與_______________電泳結果基本一致，說明獲得重組質粒pYP4S。③將pYP4S轉化到野生菌株YP4中形成工程菌YP4S，培養(yǎng)后進行PCR鑒定。為鑒定篩選出的菌落中是否含有正確插入目的基因的重組質粒，擬設計引物進行PCR鑒定。圖1所示為甲、乙、丙3條引物在正確重組質粒中的相應位置，PCR鑒定時應選擇的最佳一對引物組合是_________。某學生錯選了圖中的另外一對引物組合，擴增出長度為1．1kb的片段，原因是_______________。（3）檢測工程菌YP4S除氮的效能①工程菌株YP4S在已滅菌的模擬污水中培養(yǎng)36h后，檢測結果如圖1。結果表明___________________。②要進一步證明工程菌對含氮污水治理更有效，應___________________________。9．（10分）現有兩個純合果蠅品系：品系A和品系B。這兩個品系都表現出與野生型深紅眼明顯不同的猩紅眼。品系A猩紅眼基因與品系B猩紅眼基因對眼色改變具有相同效應，且獨立遺傳。進行雜交實驗：親本F1F2品系A♂×野生深紅眼♀深紅眼♀深紅眼♂♀全深紅眼♂深紅眼：猩紅眼=1:1回答下列問題：（1）品系A的猩紅眼基因是由野生型深紅眼基因發(fā)生_____________（填“顯性”或“隱性”）突變而來。猩紅眼基因的載體是_____________。讓F2代隨機交配，所得雄蠅后代表現型及比例為_____________。（2）缺失1條Ⅳ號染色體的果蠅仍能正常存活和繁殖，缺失2條則致死。一對都缺失1條Ⅳ號染色體的深紅眼果蠅雜交（雌蠅能產生4種配子），F1中的猩紅眼果蠅占_____________。（3）若讓猩紅眼品系A雄蠅與猩紅眼品系B雌蠅（分別由基因A、a和B、b控制）雜交（記為雜交實驗M）得到F1，F1隨機交配得到F2，寫出F2中猩紅眼雄蠅的基因型________。從F2中選擇合適的果蠅驗證F1雌蠅的基因型，寫出遺傳圖解____________（采用棋盤格法）。（4）若相關眼色的遺傳機制如圖。重復上述雜交實驗M，則F2代會出現與（3）不同的果蠅表現型是____________，占F2代比例是__________。10．（10分）菊花很美，但其害蟲較多，利用基因工程培育抗蟲菊花是害蟲防治的有效手段。胰蛋白酶抑制劑能干擾昆蟲的代謝，引起昆蟲死亡，但對人體無害。科學家將馬鈴薯胰蛋白酶抑制劑基因（Pin﹣Ⅱ）通過農桿菌導入菊花細胞，培育成了抗蟲菊花。圖1表示含目的基因的DNA分子，圖2表示質粒，圖中Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，Neor表示新霉素抗性基因，復制原點是質粒DNA復制的起點，使其能在受體細胞中存在和遺傳。箭頭表示識別序列完全不同的4種限制酶的酶切位點。請回答下列有關問題：（1）上述基因工程中，受體細胞是______________，屬于__________（填“動物”“植物”或“微生物”）基因工程。（2）為使目的基因與質粒高效重組，最好選用_______________（限制酶）作用于含目的基因的DNA和質粒，然后在___________的作用下形成重組質粒。（3）用農桿菌感染時，應優(yōu)先選用菊花___________（填“受傷的”或“完好的”）葉片與含重組質粒的農桿菌共培養(yǎng)，選用這種葉片的理由是_________________________________。成功導入重組質粒的細胞會表現為______________________________。（4）用轉基因菊花葉片喂養(yǎng)某種菊花害蟲，發(fā)現害蟲死亡率顯著增加。試從分子水平寫出轉基因和非轉基因菊花的葉片細胞的不同點：___________________________________。11．（15分）甲磺酸乙酯（EMS）能使鳥嘌呤（G）的N位置上帶有乙基而成為7-乙基鳥嘌呤，這種鳥嘌呤不與胞嘧啶（C）配對而與胸腺嘧啶（T）配對，從而使DNA序列中G—C對轉換成A—T對。育種專家為獲得更多的變異水稻親本類型，常先將水稻種子用EMS溶液浸泡，再在大田種植，通?？色@得株高、穗形、葉色等性狀變異的多種植株。請回答下列問題。（1）由顯性基因突變成隱性基因叫隱性突變，由隱性基因突變成顯性基因叫顯性突變。經過處理后發(fā)現一株某種性狀變異的水稻，其自交后代中出現兩種表現型，說明這種變異為____________（選填“顯性”或“隱性”）突變。（2）用EMS浸泡種子是為了提高____________，某一性狀出現多種變異類型，說明變異具有____________。（3）EMS誘導水稻細胞的DNA發(fā)生變化，而染色體的____________不變。（4）某水稻品種經處理后光反應酶的活性顯著提高，這可能與相關基因突變有關。在葉肉細胞內控制光反應酶的相關基因可能分布于____________（填細胞結構名稱）中。（5）水稻矮桿是一種優(yōu)良性狀．某純種高稈水稻種子經EMS溶液浸泡處理后仍表現為高桿，但其自交后代中出現了一定數量的矮桿植株．請簡述該矮桿植株形成的過程____________。

參考答案一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1、D【解析】

成熟的植物細胞有一大液泡．當細胞液的濃度小于外界溶液的濃度時，細胞液中的水分就透過原生質層進入到外界溶液中，由于原生質層比細胞壁的伸縮性大，當細胞不斷失水時，液泡逐漸縮小，原生質層就會與細胞壁逐漸分離開來，既發(fā)生了質壁分離；當細胞液的濃度大于外界溶液的濃度時，外界溶液中的水分就透過原生質層進入到細胞液中，液泡逐漸變大，整個原生質層就會慢慢地恢復成原來的狀態(tài)，即發(fā)生了質壁分離復原?！驹斀狻緼、由于植物細胞能主動吸收K+和NO3-，因此極有可能是細胞質壁分離后又出現質壁分離復原，A正確；B、植物細胞吸收K+和NO3-是通過主動運輸的方式進行，需要消耗ATP，B正確；C、發(fā)生質壁分離需要具備活細胞以及細胞壁的伸縮性小于原生質層等條件，因此質壁分離的復原實驗既能證明細胞的死活，又能判斷原生質層與細胞壁伸縮性的大小關系，C正確；D、在質壁分離的過程中，細胞就已經在吸收K+，D錯誤。故選D。2、B【解析】

本題考查物質的跨膜運輸方式，要求考生識離子通道和離子泵的結構和功能；識記物質跨膜運輸的方式及其特點，能結合所學的知識準確判斷各選項?！驹斀狻緼、神經元恢復靜息電位時，K＋通過離子通道外流，不消耗能量，形成外正內負的靜息電位，A正確；

B、神經元興奮時Na＋通道打開，Na＋通過離子通道內流，不消耗能量，所以缺氧不會影響神經元興奮時Na＋通過通道內流，B錯誤；

C、離子通過離子泵的跨膜運輸是逆濃度梯度進行的，C正確；

D、葡萄糖進入紅細胞的方式為協(xié)助擴散，需要載體協(xié)助，所以與離子泵運輸離子的方式不相同，D正確。

故選B。

【點睛】3、B【解析】

質壁分離及復原實驗中，吸水紙的主要作用是吸引液體在蓋玻片下移動，使植物細胞完全浸在液體中(引流法)；橙色的重鉻酸鉀溶液在酸性條件下與乙醇發(fā)生化學反應，變成灰綠色；噬菌體侵染細菌的實驗中，離心的目的是使吸附在細菌上的噬菌體外殼（蛋白質）與細菌分離?！驹斀狻緼.觀察植物細胞質壁分離時，吸水紙的主要作用是吸引液體在蓋玻片下移動，使植物細胞完全浸在液體中，A錯誤。B.探究土壤微生物的分解作用實驗中，實驗組的土壤要進行滅菌處理，以保證單一變量原則，B正確。C.橙色的重鉻酸鉀溶液在酸性條件下與乙醇發(fā)生化學反應，變成灰綠色，C錯誤。D.噬菌體侵染細菌的實驗中，離心的目的是使吸附在細菌上的噬菌體外殼（蛋白質）與細菌分離，D錯誤。故選B?！军c睛】噬菌體的物質組成只有DNA和蛋白質，其侵染細菌時，蛋白質會吸附在細菌表面，DNA注入到細菌內。4、C【解析】

分析題圖可知，左邊是一對同源染色體，右邊是一對同源染色體，兩對聯(lián)會的染色體之間出現異常的“十字型結構”，是兩對同源染色體的非同源染色體之間發(fā)生了交叉互換，屬于染色體結構變異中的易位?！驹斀狻緼、根據圖中染色體的著絲點可以看出，①和③、②和④是同源染色體，A錯誤；B、圖中有2個四分體，四條染色體，B錯誤；C、由于染色體聯(lián)會時，染色體的同源區(qū)段聯(lián)會，因此②上a所在區(qū)段與③上的B所在區(qū)段發(fā)生了易位，或①上A所在區(qū)段與④上b所在區(qū)段了生了易位，二者均發(fā)生了易位，C正確；D、由于染色體的配對情況復雜，該細胞減數分裂時，既可形成AbH、aBh配子，也可形成AaH、Bbh配子，D錯誤。故選C?！军c睛】本題考查細胞減數分裂過程的異常情況，意在考查考學生能運用所學知識與觀點，通過比較、分析與綜合等方法對某些生物學問題進行解釋、推理，做出合理的判斷或得出正確的結論的能力。5、D【解析】

A.種子萌發(fā)時細胞代謝旺盛，自由水含量多，細胞內結合水/自由水的比值，比休眠時低，A項錯誤；B.人體細胞在進行有氧呼吸時，每分解1摩爾的葡萄糖，則在線粒體基質中產生6摩爾的CO2，在線粒體內膜上消耗6摩爾的O2，人體細胞在進行無氧呼吸時，既無CO2的產生，也無O2的消耗，B項錯誤；C.神經細胞內K+濃度明顯高于膜外，而Na+濃度比膜外低，靜息電位的產生與維持主要是由于K+外流，動作電位產生的機制是Na+內流，所以K+/Na+的比值，動作電位時比靜息電位時低，C項錯誤；D.光合作用的暗反應階段，首先發(fā)生CO2的固定，即CO2與C5化合物結合生成C3，隨后在光反應產生的ATP提供能量的前提下，C3被光反應的產物[H]還原，所以適宜條件下光合作用過程中C5/C3的比值，停止供應CO2后比停止前的高，D項正確。故選D?！径ㄎ弧考毎麅人c代謝、細胞呼吸、神經調節(jié)中電位的產生和光合作用6、C【解析】

對農業(yè)害蟲的防治主要有三種方式，分別為化學防治、生物防治和機械防治。其中生物防治是最常用的一種防治手段，其優(yōu)點也最明顯。對害蟲防治手段之一是降低害蟲種群K值。【詳解】A、柴火誘殺成蝗主要利用了光這種物理信息，A錯誤；B、殺死蝗蟲的卵并不能針對雄性或雌性，沒有改變種群的性別比例，B錯誤；C、墾荒、修壩改變蝗蟲的產卵環(huán)境可以影響蝗蟲生存的環(huán)境，降低種群的K值，C正確；D、生物防治是利用生物的種間關系來治理害蟲，不會用到殺蟲劑等藥物，因此不會對蝗蟲的抗藥性進行選擇，D錯誤；故選C。二、綜合題：本大題共4小題7、Cla1（限制酶）和DNA連接酶A、D四環(huán)素基因重組和植物細胞的全能性【解析】

（1）研究人員依據基因的已知序列設計引物，采用PCR法從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉運肽基因．在上述引物設計時，分別在引物中加入如圖甲所示酶的識別序列，這樣可以用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個基因后，得到A、D端相連的融合基因；（2）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質粒的T-DNA中，構建表達載體即重組質粒并導入農桿菌中，將獲得的農桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉化的浸染液；（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞，進一步篩選后獲得轉基因油菜細胞，該細胞通過植物組織培養(yǎng)技術，其原理為基因重組和植物細胞具有全能性。8、催化DNA復制PCR過程中DNA在高溫下解鏈，這樣的高溫下，普通的DNA聚合酶的生物活性喪失DNA連接p質粒和插入片段（目的基因）乙和丙目的基因反向連接工程菌株除氮效果優(yōu)于野生菌Ⅰ．工程菌YP4S與野生菌分別處理實際污水36hⅡ．檢測除氮率【解析】

分析題干可知：目前認為微生物反硝化去除氮素污染更為經濟有效，科研工作者采用基因工程技術構建具有定向高效降解含氮化合物能力的工程菌，故需依據基因工程的相關原理進行分析作答?！驹斀狻浚?）亞硝酸鹽還原酶（Nir）是該過程的關鍵酶，酶是經基因的轉錄和翻譯過程形成的有催化作用的蛋白質。（1）①PCR技術依據的原理是DNA分子的復制；因PCR過程中DNA解旋是在在高溫下進行的（90-95℃），這樣的高溫下，普通的DNA聚合酶的生物活性喪失，故在PCR技術中應采用使用耐高溫的Taq酶。②連接兩個DNA片段所用的酶是DNA連接酶；因實驗中nirS基因與p質粒是分別用HindⅢ和BamHI兩種限制酶處理的，故若再用HindⅢ和BamHI雙酶切之后，得到兩個片斷電泳結果分別與p質粒和插入片段（nirS基因）電泳結果基本一致，可說明獲得重組質粒pYP4S。③PCR技術要求兩種引物分別和目的基因的兩條單鏈結合，沿相反方向合成子鏈，結合目的基因的插入位置可知，PCR鑒定時應選擇的最佳一對引物組合是乙和丙；若某學生錯選了圖中的另外一對引物組合（甲和乙），只有反向連接后才能擴增出長度為1．1kb的片段（1＋0.1kb）。（3）①圖1結果表明，無論是總氮還是NH4＋、NO3—的去除率，工程菌株除氮效果優(yōu)于野生菌。②因圖1是工程菌株YP4S在已滅菌的模擬污水中的處理結果，故要進一步證明工程菌對含氮污水治理更有效，應用工程菌YP4S與野生菌分別處理實際污水36h，檢測除氮率?！军c睛】解答本題需要透徹理解基因工程的基本工具、PCR技術的原理，并能讀懂實驗結果的數據分析，進而分析作答。9、隱性染色體（常染色體和X染色體）野生/深紅眼：猩紅眼=3:11/4BBXaYBbXaYbbXAYbbXaYP深紅眼雌蠅猩紅眼雄蠅BbXAXa×bbXaY↓F1雌配子雄配子BXAbXABXabXabXaBbXAXa深紅眼雌蠅bbXAXa猩紅眼雌蠅BbXaXa猩紅眼雌蠅bbXaXa猩紅眼雌蠅bYBbXAY深紅眼雄蠅bbXAY猩紅眼雄蠅BbXaY猩紅眼雄蠅bbXaY猩紅眼雄蠅深紅眼雌蠅：猩紅眼雌蠅：深紅眼雄蠅：猩紅眼雄蠅=1:3:1:3白色眼雄蠅1/16【解析】

根據題意和圖表分析可知：野生型深紅眼（♀）×猩紅眼品系A（♂）的后代都是深紅眼，說明深紅眼對猩紅眼為顯性；又子二代中性狀表現與性別有關，說明相關基因位于染色體上。因此，親本的基因型為XAXA與XaY，F1的基因型為XAXa與XAY，F2的基因型為XAXA、XAXa、XAY、XaY。明確知識點，梳理相關的基礎知識，分析圖表，結合問題的具體提示綜合作答。【詳解】（1）根據親本品系A野生深紅眼雜交后代都是深紅眼，可知深紅眼為顯性，品系A的猩紅眼基因是由野生型深紅眼基因發(fā)生隱性突變。遺傳物質——基因的載體是染色體。據分析可知，親本品系A♂×野生深紅眼♀的基因型是XAXA與XaY（設用字母A/a表示），則子一代為XAXa和XAY，得子二代XAXA、XAXa、XAY和XaY。子二代隨機交配中雌性產生的配子為3/4XA、1/4Xa，因此F2代隨機交配，所得雄蠅后代表現型及比例為深紅眼：猩紅眼=3:1。（2）一對都缺失1條Ⅳ號染色體的深紅眼果蠅雜交，由于雌果蠅為雜合子，所以基因型為XAXa與XAY，雜交后，F1中猩紅眼果蠅占1/4。（3）據題干信息“品系A猩紅眼基因與品系B猩紅眼基因對眼色改變具有相同效應，且獨立遺傳”，可知B/b位于常染色體上，因此純合猩紅眼品系A雄蠅與純合猩紅眼品系B雌蠅的基因型分別是BBXaY和bbXAXA，雜交得F1，基因型為BbXAXa與BbXAY，F1隨機交配得F2，基因型為（3B_：1bb）（1XAXA:1XAXa:1XAY:1XaY），因此F2中猩紅眼雄蠅的基因型是BBXaYBbXaY、bbXAY和bbXaY共四種。要驗證F1雌蠅的基因型最好進行測交，即采用F2中基因型為bbXaY的猩紅眼雄蠅。遺傳圖解為（4）根據相關顏色的遺傳機制可知出現了新的性狀即白色，重復上述雜交實驗M，F2的基因型為（3B_：1bb）（1XAXA:1XAXa:1XAY:1XaY），因此出現與（3）不同的果蠅表現型是bbXaY的白眼雄蠅，占F2代比例是1/16。【點睛】本題考查了基因的自由組合定律在伴性遺傳中的應用，意在考查學生分析表格的能力、判斷遺傳病遺傳方式的能力、從題中獲取有效信息的能力、以及能用數學方式準確地描述生物學方面的內容、以及數據處理能力。10、菊花細胞植物EcoRI和PstIDNA連接酶受傷的葉片傷口處的細胞釋放出大量酚類物質，可吸引農桿菌移向這些細胞不抗氨芐青霉素，抗新霉素比較轉基因和非轉基因兩種菊花的葉片細胞，轉基因菊花細胞中含有胰蛋白酶抑制劑基因、胰蛋白酶抑制劑的mRNA、胰蛋白酶抑制劑【解析】

基因工程技術的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術擴增和人工合成；（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等；（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法；（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！驹斀狻浚?）該基因工程需要將胰蛋白酶抑制劑基因導入菊花細胞，使菊花具有抗蟲性，所以受體細胞是菊花細胞，屬于植物基因工程。（2）目的基因的兩端含有EcoRI、TthIIII、PstI三種限制酶的酶切位點，為了避免目的基因自身環(huán)化，不能只用EcoRI這一種限制酶進行切割，若用EcoRI和TthIIII切割目的基因，相應的在對質粒進行切割時會將復制原點切去，因此、為使目的基因與質粒高效重組，最好選用EcoRI和PstI作用于含目的基因的DNA和質粒，然后在DNA連接酶的作用下形成重組質粒。（3）用農桿菌感染時，應優(yōu)先選用菊花受傷的葉片與含重組質粒的農桿菌共同培養(yǎng)，選用這種葉片的理由是葉片傷口處的細胞釋放出大量酚類物質，可吸引農桿菌移向這些