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名詞解釋:分子生物學:(molecularbiology)從分子水平研究生物大分子的結構與功能從而闡明生命現(xiàn)象本質的科學,主要指遺傳的信息。主要指遺傳信息的傳遞(復制)、保持(損傷與修復)、基因的表達與調控。半保留復制:由親代DNA生成子代DNA時,每個形成的子代DNA中的一條鏈來自親代DNA,另一條鏈則是新和成的,所以這種復制方式被稱為DNA的半保留復制。(semiconservativereplication)半不連續(xù)復制:DNA復制時其中一條子鏈的合成是連續(xù)的,而另一條子鏈的合成是不連續(xù)的,故稱半不連續(xù)復制。(semidiscontinuousreplication)C值反常現(xiàn)象:(valueparadox)C值往往與種系的進化的復雜程度不一致的現(xiàn)象,某些低等生物卻有較大的C 值,稱為C值反常現(xiàn)象。(C值是一種生物的單倍體基因DNA的總量。)真核細胞基因組的最大特點是它含有大量的重復序列,而且功能DNA序列大多被不編碼蛋白質的非功能DNA所隔開,這就是著名的“C值反?,F(xiàn)象”。錯配修復mismatchrepairDNA的轉座:或稱移位(transposition),是由可移位因子(transposableelement)介導的遺傳物質重排現(xiàn)象。轉座子:(transposon,Tn)是存在于染色體DNA上可自主復制和移位的基本單位。轉綠的不對稱性:在RNA合成中,DNA的2條鏈可作為轉錄的模板,稱為轉錄的不對稱性。轉錄單元:(transcriptionunit)一段從啟動子開始至終止子結束的DNA序列。轉錄空泡:(transpositionbubble)RNA-pol(核心酶)…DNA…RNA,DNA處于解鏈狀態(tài),且RNA鏈延伸。轉錄前起始復合物:轉錄調控因子的輔助蛋白按照特定順序結合于啟動子上再與RNA聚合酶結合并形成復雜的復合物。翻譯:指將mRNA鏈上的核苷酸從一個特定的起始位點開始,按每三個核苷酸代表一個氨基酸的原則依次合成一條多肽鏈的過程。信號肽:(signalpeptide)在起始密碼子后,有一段編碼疏水性氨基酸序列的RNA區(qū)域,這個氨基酸序列被稱為信號肽。膜結合蛋白:(membrane-bindingproteins)是非肌細胞質膜下方產(chǎn)生收縮的機器。在劇烈活動時,由收縮蛋白作用于質膜產(chǎn)生的力引起質膜向內或向外移動(如吞噬作用和胞質分裂)。這種運動由肌動蛋白纖維直接或間接與質膜相結合后形成的。直接的方式有同膜整合蛋白的結合,間接的方式有同外周蛋白的結合。蛋白質運轉:(proteintranslocation)蛋白質插入或穿過生物膜的過程稱為蛋白質運轉。翻譯-運轉同步:(co-translationaltranslocation)蛋白質的合成和運轉是同時發(fā)生的。翻譯后運轉:(post-translationaltranslocation)蛋白質從核糖體上釋放后才發(fā)生運轉。分子伴侶:結合在一些不完全裝配或不恰當折疊的蛋白質上,幫助他們折疊或防止他們聚集的蛋白質?;虿僮鳎褐饕―NA分子的切割與鏈接,核酸分子雜交,凝膠電泳,細胞轉化,核酸序列分析以及基因的人工合成,定點突變和PCR擴增等。基因工程:指在體外將核酸分子插入病毒質?;蚱渌d體分子,構成遺傳物質的新組合,使之進入新的宿主細胞并獲得持續(xù)穩(wěn)定的增殖能力和表達。(基因工程技術實際上是核酸操作技術的一部分。)載體:(vector)將外源目的DNA導入受體細胞,并能自我復制和增殖的工具。質粒:(plasmid)質粒是細胞染色體或核區(qū)DNA外能夠自主復制的很小的環(huán)狀NA分子。分子雜交:誘導表達:(induction)在特定環(huán)境因素刺激下,基因被激活,從而使基因表達產(chǎn)物增加(可誘導)阻遏表達:(repression)在特定環(huán)境因素刺激下,基因被抑制,從而使基因表達產(chǎn)物減少(可阻遏)協(xié)調表達:(coordiroteexpression)在一定機制控制下,功能上相關的一組基因。核小體(nucleosome):是由DNA鏈纏繞一個組蛋白核(H2A、H2B、H3、H4)*2的八聚體。復制原點:DNA的復制有特定的起始位點,叫復制原點(ori或o)富含A,T的區(qū)段。岡崎片段:在DNA復制過程中,前導鏈能連續(xù)合成,而滯后鏈只能斷續(xù)的合成5’-3’的多個短片段,這些不連續(xù)的小片段稱為岡崎片段。啟動子:指能被RNA聚合酶識別、結合并啟動基因轉錄的一段DNA序列。增強子:在啟動區(qū)存在的能增強或促進轉錄的起始DNA序列,但不是啟動子的一部分。RNA的編輯:是指在轉錄后的RNA在編碼區(qū)發(fā)生堿基的突變、加入或丟失等現(xiàn)象。SD序列:原核生物起始密碼子AUG上游7-12個核苷酸處有一被稱為SD序列的保守區(qū)。mRNA中用于結合元和生物糖體的序列。密碼子的擺動性:在密碼子與反密碼子的配對中,前兩對嚴格遵守擺動配對原則,第三對堿基有一定的自由度,可以擺動,這種現(xiàn)象稱為密碼子的擺動性。cDNA文庫:首先獲得mRNA,反轉錄得cDNA,經(jīng)克隆后形成文庫。弱化子:在操縱區(qū)與結構基因之間的一段可以終止轉錄作用的核苷酸序列,當操縱子被阻遏時,RNA合成被終止,這段核苷酸其終止轉錄信號的作用。結構基因:DNA分子上轉錄出RNA的區(qū)段,稱為結構基因英譯漢:分子生物學:(molecularbiology)核小體(nucleosome)錯配修復(mismatchrepair)transposon:轉座子insertionalsequence,IS:插入序列promoter:啟動子轉錄前起始復合物(preinitiationcomplexPIC)操縱基因(operator)SDsequence:SD序列Cvalueparadox:C值反常attenuator:弱化子SOSrepair:SOS修復引物(Primer)RNAi:RNA干涉操縱子(operon)exon:外顯子Intron:內含子domain:結構域satelliteDNA:衛(wèi)星DNA簡答題論述題:1.DNA是遺傳物質的證明:肺炎鏈球菌體內轉化實驗,體外轉化實驗,同位素標記噬菌體實驗,酶切實驗。2.染色體的四級結構:由DNA與組蛋白包裝成核小體,在組蛋白H1的介導下核小體彼此連接形成直徑約10nm的核小體串珠結構,這是染色質包裝的一級結構。在有組蛋白H1存在的情況下,由直徑10nm的核小體串珠結構螺旋盤繞,每圈6個核小體,形成外徑為30nm,內徑10nm,螺距11nm的螺線管,這是染色質包裝的二級結構。由螺線管進一步螺旋化形成直徑為0.4μm的圓筒狀結構,稱為超螺線管,這是染色質包裝的三級結構。這種超螺線管進一步螺旋折疊,形成長2-10μm的染色單體,即染色質包裝的四級結構。3.DNA的一級結構:指4種脫氧核苷酸的連接及其排列順序。DNA的二級結構:是指兩條多核苷酸鏈反相平行盤繞所生成的雙螺旋結構。DNA的高級結構:指DNA雙螺旋進一步扭曲盤繞所形成的特定空間結構。4.DNA復制的步驟:原料:四條脫氧核苷三磷酸(dATP,dGTP,dCTP,dTTP)模板:以RNA兩條鏈為模板,合成子代DNA引物:DNA合成需要一段RNA鏈作為引物引物合成酶:以DNA為模板合成一段RNA,這段RNA作為合成DNA引物,實質是以DNA為模板的RNA聚合酶DNA聚合酶:(1)以DNA為模板的DNA合成酶;(2)以四種脫氧核苷酸三磷酸為底物;(3)反應需要有模板的指導;(4)反應需要有3¢-OH存在;(5)DNA鏈的合成方向為5¢?3¢過程:雙鏈的解開;RNA引物的合成;DNA鏈的延伸切除;RNA引物,填補缺口,連接相鄰的DNA片段5.半不連續(xù)復制的基本過程:在DNA復制時,合成方向與復制叉移動的方向一致并連續(xù)合成的鏈為前導鏈;合成方向與復制叉移動的方向相反,形成許多不連續(xù)的片段,最后再連成一條完整的DNA鏈為滯后鏈。6.轉錄的基本過程:(1)起始位點的識別:RNA聚合酶與啟動子DNA雙鏈相互作用并與之相結合的過程;(2)RNA鏈上第一個核甘酸鍵的產(chǎn)生;(3)RNA鏈的延伸:s亞基脫落,RNA–pol聚合酶核心酶變構,與模板結合松弛,沿著DNA模板前移;在核心酶作用下,NTP不斷聚合,RNA鏈不斷延長。(4)轉錄終止:終止子引導轉錄的終止7.轉錄起始(initiation)的三個階段:(1)RNA聚合酶全酶對啟動子的識別,聚合酶與啟動子可逆性結合形成封閉復合物,此時DNA仍處于雙鏈狀態(tài)。(2)封閉復合物轉變?yōu)殚_放復合物,DNA序列一小段被解開。(3)開放復合物與最初的兩個NTP相結合并在這兩個核苷酸之間形成磷酸二酯鍵后轉變成包括RNA聚合酶、DNA和新生RNA的三元復合物。終止子的特點:回文結構;富含GC,發(fā)卡結構,3’端含有至少6個寡聚U8.真核生物mRNA的特點和功能:(1)真核生物mRNA的5’端存在帽子結構;(2)多數(shù)真核生物3’端有poly-A尾巴(組蛋白除外);(3)以單順反子形式存在;帽子結構的功能:帽子結構可能使mRNA免遭核酸酶破壞;能被核糖體小亞基識別,促使mRNA與核糖體結合。多聚腺苷酸尾巴功能:提高了mRNA在細胞質中的穩(wěn)定性。9.轉錄后加工:(1)在5’端加帽:5’端的一個核苷酸總是7-甲基鳥核苷三磷酸(m7Gppp);(2)3’端加尾:多聚腺苷酸尾巴;(3)RNA的剪接;(4)RNA的編輯編輯(editing)是指轉錄后的RNA在編碼區(qū)發(fā)生堿基的突變、加入或丟失等現(xiàn)象。10.RNA合成與DNA合成的異同點:(1)相同點:都以DNA鏈作為模板;合成的方向均為5’→3’;聚合反應均是通過核苷酸之間形成的3’,5’-磷酸二酯鍵,使核苷酸鏈延長。不同點:

復制轉錄模板兩條鏈均復制模板鏈轉錄(不對稱轉錄)原料dNTPNTP酶DNA聚合酶RNA聚合酶產(chǎn)物子代雙鏈DNA(半保留復制)mRNA,tRNA,rRNA配對A-T;G-CA-U;T-A;G-C引物RNA引物無11.遺傳密碼的性質:(1)密碼子的連續(xù)性:編碼蛋白質氨基酸序列的各個三聯(lián)體密碼連續(xù)閱讀,密碼間既無間斷也無交叉。(2)密碼子的簡并性:由一種以上密碼子編碼同一個氨基酸的現(xiàn)象稱為簡并(degeneracy),對應于同一氨基酸的密碼子稱為同義密碼子。(3)密碼子的通用性與特殊性:蛋白質生物合成的整套密碼,從原核生物到人類都通用。(4)密碼子與反密碼子的相互作用:擺動性12.CCA序列的作用:接受氨基酸,形成氨酰-tRNAtRNA有兩個關鍵部位:3’端CCA:接受氨基酸,形成氨酰-tRNA。與mRNA結合部位—反密碼子部位13.tRNA的結構:1、二級結構:三葉草形(四環(huán)四臂:D環(huán)、可變環(huán)、反密碼子環(huán)、TψC環(huán);D臂、反密碼臂、TψC臂、多余臂);2、三級結構:“L”形、氫鍵;14.tRNA的種類:1、起始tRNA和延伸tRNA:能特異地識別mRNA模板上起始密碼子的tRNA稱起始tRNA,其他tRNA統(tǒng)稱為延伸tRNA。真核生物:起始密碼子AUG所編碼的氨基酸是Met,起始AA-tRNA為Met-tRNAMet。原核生物:起始密碼子AUG所編碼的氨基酸并不是甲硫氨酸本身,而是甲酰甲硫氨酸,起始AA-tRNA為fMet-tRNAfMet2、同工tRNA:代表同一種氨基酸的tRNA稱為同工tRNA。3、校正tRNA:包括無義突變矯正tRNA和錯義突變矯正tRNA15.蛋白質合成可分四個步驟(1)氨基酸的活化:游離的氨基酸必須經(jīng)過活化以獲得能量才能參與蛋白質合成,由氨酰-tRNA合成酶催化,消耗1分子ATP,形成氨酰-tRNA。(2)翻譯的起始:原核生物中30S小亞基先與mRNA模板結合,再與fMet-tRNAfMet結合,最后與50S大亞基結合形成70SmRNA·fMet-tRNAfMet起始復合物;真核生物中40S小亞基先與模板結合,再與Met-tRNAMet結合,再與模板mRNA結合,最后與60S大亞基結合形成80SmRNA·Met-tRNAMet起始復合物。(3)肽鏈的延伸:后續(xù)AA-tRNA核糖體結合:形成EF-Tu·GTP復合物;肽鍵的生成:由轉肽酶催化下A位點上的AA-tRNA轉移到P位,形成肽鍵;移位:核糖體向mRNA3’端移動一個密碼子。(4)肽鏈的終止:(原核生物終止子:RF1、RF2、RF3;真核生物終止子:eRF)(5)蛋白質前體的加工:1、N端fMet或Met的切除;2、二硫鍵的形成;3、特定氨基酸的修飾;4、切除新生肽鏈中非功能片段。(6)蛋白質的折疊16.信號肽假說:(1)蛋白質合成起始首先合成信號肽(2)SRP(信號識別蛋白)與信號肽結合,翻譯暫停(3)SRP與SRP受體結合,核糖體與膜結合,翻譯重新開始(4)信號肽進入膜結構(5)蛋白質過膜,信號肽被切除,翻譯繼續(xù)進行(6)蛋白質完全過膜,核糖體解離信號序列特點:(1)一般帶有10-15個疏水氨基酸;(2)在靠近該序列N-端常常有1個或數(shù)個帶正電荷的氨基酸;(3)在其C-末端靠近蛋白酶切割位點處常常帶有數(shù)個極性氨基酸,離切割位點最近的那個氨基酸往往帶有很短的側鏈(丙氨酸或甘氨酸)。17.限制性內切酶特點:限制性內切酶(restrictiveendonucleases),又稱限制酶。是特異性地切斷DNA鏈中磷酸二酯鍵的核酸酶(“分子手術刀”)。(1)限制性內切酶一般識別完全的回文結構(2)識別4-8個相連的核苷酸組成的特定核甘酸序列。(3)切割方式有兩種:①錯位切割,產(chǎn)生互補性的粘性末端。②

沿對稱軸切割,產(chǎn)生平齊末端(4)具有同裂酶(5)具有同尾酶18.組建一個cDNA文庫的步驟:1)分離表達目的基因的組織或細胞2)從組織或細胞中制備總體RNA和mRNA3)第一條cDNA鏈的合成,需要RNA模板,cDNA合成引物,逆轉錄酶,4種脫氧核苷三磷酸以及相應的緩沖液(Mg2+)等。4)第二條cDNA鏈的合成5)cDNA的甲基化和接頭的加入6)雙鏈cDNA與載體的連接19.分子雜交:是通過各種方法將核酸分子固定在固相支持物上,然后用標記的探針與被固定的分子雜交,經(jīng)顯影后顯示出目的分子所處的位置的過程.分子雜交包括:DNA-DNA雜交(原位雜交、點雜交、Southern雜交),DNA-RNA雜交(Northern雜交)及蛋白雜交(Western雜交)等。20.DNA重組基本程序:分—載體和目的基因的分離;切—限制性內切酶的應用;接—載體與目的基因鏈接成重組體;轉—基因序列轉入細胞;篩—目的基因序列克隆的篩選和鑒定;表—目的基因在宿主細胞的篩選和表達。21.什么是正控系統(tǒng)、負控系統(tǒng)、正空誘導系統(tǒng)、正空阻遏系統(tǒng)、負控誘導系統(tǒng)、負控阻遏系統(tǒng)?負控系統(tǒng):(negativeregulation)在沒有調節(jié)蛋白存在時基因是表達的,加入某種調節(jié)蛋白后,基因就被關閉,這樣的控制系統(tǒng)叫做負控系統(tǒng)。正控系統(tǒng):在沒有調節(jié)蛋白存在時基因是關閉的,加入某種調節(jié)蛋白后,基因就被開啟,這樣的控制系統(tǒng)叫做負控系統(tǒng)。22.乳糖操縱子的調控機制?大腸桿菌乳糖操縱子的正調控:無葡萄糖的情況下,cAMP與CAP結合形成cAMP-CAP復合物,可與啟動子區(qū)域的CAP位點結合,激活轉錄開始,形成乳糖代謝酶;有葡萄糖的情況下,cAMP含量很低,不能形成cAMP-CAP復合物,不能起始轉錄。大腸桿菌乳糖操縱子的負調控:沒有乳糖時,阻遏蛋白與操縱子基因結合,組織了RNA聚合酶起始轉錄結構基因;有乳糖時,阻遏蛋白與乳糖結合后,使其空間構型發(fā)生變化,而不與操縱基因結合,此時,RNA聚合酶開始轉錄結構基因,產(chǎn)生乳糖代謝酶。1.包括三個結構基因:Z、Y、A以及啟動子,控制子和阻遏子。轉錄時RNA聚合酶首先與啟動區(qū)結合,通過操縱區(qū)向右轉錄,轉錄從O區(qū)開始,按Z-Y-A方向進行,每次轉錄出來的一條mRNA上都帶有這三個基因,轉錄的調控是在啟動區(qū)和操縱區(qū)進行的。2.Z、Y、A基因的產(chǎn)物為一條多順反子mRNA。LacZ:編碼β-半乳糖苷透性酶,它能將乳糖運送透過細菌的細胞壁。lacA:編碼硫代半乳糖苷乙酰轉移酶,進行乳糖代謝。填空:1.DNA復制的方式:線性DNA雙鏈的復制、環(huán)狀DNA雙鏈的復制(θ型、滾環(huán)型、D環(huán)型)。滾環(huán)型復制不需要引物。2.轉座子分為兩大類:插入序列和復合型轉座子3.轉座可被分為復制型和非復制型4.轉錄的基本過程包括:模板識別、轉錄起始、通過啟動子及轉錄的延伸和終止。5.核心酶:包括兩個α亞基,β亞基,β′亞基和ω亞基6.全酶:核心酶+σ因子7.蛋白質合成的場所是:核糖體;蛋白質合成的模板是:mRNA;模板與氨基酸之間的接合體是:tRNA;蛋白質合成的原料是:20種氨基酸8.核糖體:原核細胞大亞基50S,小亞基30S;真核細胞大亞基60S,小亞基橈40S。64個密碼子編碼蛋白質,6個編碼氨基酸。9.真核生物DNA聚合酶有_DNA聚合酶α、DNA聚合酶β、DNA聚合酶γ、DNA聚合酶δ。其中在DNA復制中起主要作用的是DNA聚合酶α和DNA聚合酶σ。10.在DNA復制過程中,改變DNA螺旋程度的酶叫_拓撲異構酶。11.SSB的中文名稱_單鏈結合蛋白,功能特點是使單鏈保持伸長狀態(tài)。12.DNA生物合成的方向是_5’→3’,岡奇片段合成方向是_5’→3’判斷:1、真核生物所有的mRNA都有polyA結構。(X)組蛋白的mRNA沒有2、由于密碼子存在搖擺性,使得一種tRNA分子常常能夠識別一種以上同一種氨基酸的密碼子。(√)3、大腸桿菌的連接酶以ATP作為能量來源。(X)以NAD作為能量來源4、tRNA只在蛋白質合成中起作用。(X)tRNA還有其它的生物學功能,如可作為逆轉錄酶的引物5、DNA聚合酶和RNA聚合酶的催化反應都需要引物。(X)RNA聚合酶的催化反應不需要引物6、真核生物蛋白質合成的起始氨基酸是甲酰甲硫氨酸(X)真核生物蛋白質合成的起始氨基酸是甲硫氨酸7、質粒不能在宿主細胞中獨立自主地進行復制(X)質粒具有復制起始原點,能在宿主細胞中獨立自主地進行復制8、RNA因為不含有DNA基因組,所以根據(jù)分子遺傳的中心法則,它必須先進行反轉錄,才能復制和增殖。(X)不一定,有的RNA病毒可直接進行RNA復制和翻譯9、細菌的RNA聚合酶全酶由核心酶和ρ因子組成。(X)細菌的RNA聚合酶全酶由核心酶和σ因子組成10、核小體在復制時組蛋白八聚體以全保留的方式傳遞給子代。(√)11、色氨酸操縱子中含有衰減子序列(√)12、SOS框是所有din基因(SOS基因

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