ICS65.080CCSB15TBDTechnicaloperationprocedureofliquidfermentationequipmentIT/TBD001—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由河北神威環(huán)境治理有限公司提出。本文件由保定市肥料協(xié)會(huì)歸口。本文件起草單位：河北神威環(huán)境治理有限公司、保定市肥料協(xié)會(huì)、保定瑞沃斯環(huán)境科技有限公司、綠堯河北生物科技有限公司、河北健地寶生物科技有限公司、河北科豪生物科技有限公司、河北航農(nóng)農(nóng)業(yè)科技有限公司、河北庫克生物科技有限公司。本文件主要起草人：江洋、孟慶偉、沙瑞光、李高生、戈文贊、劉海研、聶永斌、郭建波。1T/TBD001—2024液體發(fā)酵裝置技術(shù)操作規(guī)程本文件規(guī)定了發(fā)酵企業(yè)在使用發(fā)酵罐的過程中所涉及的操作使用程序等內(nèi)容。本文件適用于發(fā)酵企業(yè)空消、實(shí)消等工作。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1空消在投料前，氣路、料路、發(fā)酵罐等必須用飽和蒸汽進(jìn)行滅菌，消除所有死角的雜菌，保證系統(tǒng)處于無菌狀態(tài)。3.2實(shí)消實(shí)消是當(dāng)罐內(nèi)加入培養(yǎng)基后，用蒸汽對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的過程。4基本要求4.1在發(fā)酵罐開機(jī)使用之前，應(yīng)先檢查電源是否正常，空壓機(jī)、蒸汽發(fā)生器、循環(huán)水系統(tǒng)是否能正常工作。4.2檢查整系統(tǒng)上的閥門、接頭及緊固螺釘是否擰緊。4.3開動(dòng)空壓機(jī)，用0.15MPa壓力，檢查發(fā)酵罐、過濾器、管路、閥門的密封性能是否良好，有無泄漏。4.4溶氧儀、pH儀等應(yīng)根據(jù)使用說明書進(jìn)行檢查、校正。4.5上崗人員對(duì)上述發(fā)酵罐的各項(xiàng)內(nèi)容必須能熟練操作。5方法與步驟5.1空氣過濾系統(tǒng)的空消5.1.1關(guān)閉空氣系統(tǒng)進(jìn)空氣閥門（即空氣預(yù)過濾器后的進(jìn)氣閥門切勿忘掉！防止蒸汽進(jìn)入空氣氣源系統(tǒng)，損壞氣源管路和設(shè)備。2T/TBD001—20245.1.2打開蒸汽過濾器的小排汽閥及進(jìn)口蒸汽閥門，冷凝水排盡后微開此排水閥。5.1.3打開空氣精過濾器下面的小排汽閥，打開其前面的進(jìn)蒸汽的閥門，往空氣管路通入蒸汽。進(jìn)蒸汽首先通過空氣精過濾器下面的排水閥排出，待冷凝水排盡后，微開此排水間，使其達(dá)到并保持0.10一0.11MPa，然后開始人工記時(shí)，保證滅菌時(shí)間持續(xù)20-30分鐘。5.1.4滅菌時(shí)間到后，關(guān)閉空氣精過濾器前面的進(jìn)蒸汽的閥門，在精過濾器上的壓力降到零以前立即打開空氣精過濾器前面的進(jìn)空氣的閥門（如操作不及，可先關(guān)掉過濾器上相關(guān)的排氣閥，待通入空氣后再打開這些閥門通入壓縮空氣。吹空氣過濾系統(tǒng)10一20分鐘，然后將精過濾器后的閥門關(guān)閉及微開過濾器排氣閥，使空氣過濾系統(tǒng)始終保持正壓備用。5.2發(fā)酵罐空消5.2.1打開夾套上口的排空閥以及夾套下口的排污閥，排盡發(fā)酵罐夾套內(nèi)的冷水。同時(shí)打開發(fā)醉罐出料閥，排盡罐內(nèi)的余水，關(guān)好空氣閥門第一閥門。5.2.2打開罐底出料口及罐內(nèi)進(jìn)氣口、視鏡蒸汽吹口、移種取樣口上的進(jìn)蒸汽閥門，使蒸汽通過這些閥門進(jìn)入發(fā)酵罐，并從罐頂排氣口持出。5.2.3微開出料閥、發(fā)酵罐上各排氣口、空氣過濾系統(tǒng)出口閥后的小排氣口（對(duì)發(fā)酵罐還需旋松接種口蓋，使蒸汽從蓋上小孔噴出），這些操作可有效防止出現(xiàn)滅菌死角。5.2.4調(diào)整罐頂排氣閥，使罐壓達(dá)到并保特0.11一0.13MPa，溫度121一123℃,維持時(shí)間40-60分鐘。5.2.5空消結(jié)束，按照"由近而遠(yuǎn)的原則"關(guān)上各蒸汽進(jìn)閥及所有相關(guān)排氣閥、排氣口，但保持罐頂排氣口打開，使罐內(nèi)與大氣相通，防止突然冷卻時(shí)罐內(nèi)產(chǎn)生負(fù)壓，損壞罐體。5.2.6注意事項(xiàng)：空氣過濾器和發(fā)酵罐，滅菌過程中過濾器的表壓應(yīng)在0.11左右，最好不高于0.13MPa，過高可能會(huì)損壞濾芯；滅菌后要用壓縮空氣將介質(zhì)吹干，緩慢通氣；氣流要適當(dāng)，太小吹不干，過大容易將介質(zhì)頂翻，造成空氣走短路而帶菌。5.3實(shí)消5.3.1空消結(jié)束后，按工藝要求配好培養(yǎng)基，一般以罐體全容積的70％左右為宜，泡沫多的培養(yǎng)基需加入少量消泡劑?？紤]到冷凝水和接種量的因素，加水后的容積一般為罐體全容積的60％左右。5.3.2在加入培養(yǎng)基時(shí)，打開罐內(nèi)進(jìn)氣口的進(jìn)空氣閥，往罐內(nèi)通入空氣并打開顯示屏上的機(jī)械攪拌，轉(zhuǎn)速在80rpm左右，使罐內(nèi)物料均勻混合，對(duì)50L發(fā)酵罐物料加好后，旋上接種口。5.3.3緩慢打開夾套上口的蒸汽進(jìn)氣閥門，小開夾套下口的排污閥，預(yù)熱罐內(nèi)培養(yǎng)基，當(dāng)罐內(nèi)溫度升到90一100℃,關(guān)上進(jìn)氣口的進(jìn)空氣閥，關(guān)上夾套進(jìn)蒸汽閥門和排污閥，打開夾套上口排空閥。然后打開罐底出料口及罐內(nèi)進(jìn)氣口上的進(jìn)蒸汽閥門，往罐內(nèi)通入蒸汽，關(guān)小罐項(xiàng)排氣閥。5.3.4當(dāng)罐溫達(dá)到100℃左右時(shí)，最好關(guān)掉攪拌系統(tǒng)，延長機(jī)械密封使用壽命。微開出料閥、發(fā)酵罐上各排氣口、空氣過濾系統(tǒng)出口閥后的小排氣口，對(duì)50L發(fā)酵罐，旋松接種口蓋，使蒸汽從蓋上小孔噴出。3T/TBD001—20245.3.5調(diào)整控制好罐上蒸汽進(jìn)汽和排氣閥的開度，使罐內(nèi)壓力維持在0.11一0.13MPa，溫度控制在121一125℃,推持時(shí)間根據(jù)工藝要求而定，一般滅菌30分鐘左右，點(diǎn)擊屏幕（滅菌30分）。5.3.6滅菌時(shí)間到后，關(guān)閉罐頂除排氣閥以外所有排氣口，然后按照"由近而遠(yuǎn)的原則"關(guān)閉進(jìn)汽閥及管路上的小排氣閥，待罐內(nèi)壓力降到0.05Mpa時(shí)打開罐內(nèi)進(jìn)氣口進(jìn)空氣閥。5.3.7打開夾套上口滅菌冷卻水的排水閥，再打開夾套下口進(jìn)水閥，通入冷卻水點(diǎn)擊屏幕冷水閥，開始降溫）。5.3.8調(diào)節(jié)好空氣進(jìn)、排氣閥門的開度，保持罐壓為0.05Mpa。當(dāng)罐溫降至100度以下時(shí)可關(guān)閉夾套下口進(jìn)水閥，打開自動(dòng)進(jìn)水閥、打開（顯示屏上的自動(dòng)控溫，點(diǎn)按"發(fā)酵啟動(dòng)"按鈕，開始自動(dòng)冷卻并保溫。5.3.9注意事項(xiàng)：夾層升溫