2024屆新高考生物必刷題12基因工程（共50題）

（原卷版）

必刷題12基因工程

包高頻考點回顧廣

高頻考點1重組DNA技術(shù)

高頻考點2基因工程的操作

高頻考點3基因工程的應(yīng)用

高考真題必刷

1.（2023?遼寧?統(tǒng)考高考真題）CD163蛋白是PRRSV病毒感染家畜的受體。

為實時監(jiān)控CD163蛋白的表達和轉(zhuǎn)運過程，將紅色熒光蛋白RFP基因與

CD163基因拼接在一起（如下圖），使其表達成一條多肽。該拼接過程的

關(guān)鍵步驟是除去（）

啟動子CD163RFP終止子

雙鏈DNA

A.CD163基因中編碼起始密碼子的序列

B.CD163基因中編碼終止密碼子的序列

c.RFP基因中編碼起始密碼子的序列

D.RFP基因中編碼終止密碼子的序列

2.（2023?江蘇?統(tǒng)考高考真題）某生物社團利用洋蔥進行實驗。下列相關(guān)

敘述正確的是（）

A.洋蔥鱗片川內(nèi)表皮可代替半透膜探究質(zhì)膜的透性

B.洋蔥勻漿中加入新配制的斐林試劑，溶液即呈磚紅色

C.制作根尖有絲分裂裝片時，解離、漂洗、按壓蓋玻片都能更好地將細

胞分散開

D.粗提取的DNA溶于2moi/LNaCl溶液中，加入二苯胺試劑后顯藍

色

3.（2023?浙江?統(tǒng)考高考真題）紫外線引發(fā)的DNA損傷，可通過“核甘酸

切除修復(fù)（NER）”方式修復(fù)，機制如圖所示。著色性干皮癥（XP）患者的

NER酶系統(tǒng)存在缺陷，受陽光照射后，皮膚法現(xiàn)炎癥等癥狀?；颊哂啄臧l(fā)

病，20歲后開始發(fā)展成皮膚癌。下列敘述錯誤的是（）

紫外線

5'i~?""ri—?~?-ri~?~~?~~?~?~o3，

...............................................................

......................?，損傷一

5'T~]"I_IIIIII-IIi3,

”......................I1I1II」5,

切口3切口X國

5'TTT~r-rvIITTT13*

....................IlIII11115，

I

5,rnr缺口3-

3”111111111115-

修.完成........

5*ii1I111II1~liil3*

3，lIII1IIIIII11」5,

A.修復(fù)過程需要限制酶和DNA聚合酶

B.填補缺口時，新鏈合成以5到3的方向進行

C.DNA有害損傷發(fā)生后，在細胞增殖后進行修復(fù)，對細胞最有利

D.隨年齡增長，XP患者幾乎都會發(fā)生皮膚癌的原因，可用突變累積解

釋

4.（2023?天津?統(tǒng)考高考真題）根據(jù)下圖，正確的是（）

試管動物

動物細胞培養(yǎng)提供子宮

-胚胎移植f克隆動物

動物細胞核移植受體動物2―?

A.子代動物遺傳性狀和受體動物完全一致

B.過程1需要Mil期去核卵母細胞

C.過程2可以大幅改良動物性狀

D.過程2為過程3提供了量產(chǎn)方式，過程3為過程1、2提供了改良性

狀的方式

5.（2023?湖南?統(tǒng)考高考真題）鹽堿脅迫下植物應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生的H2O2對細

胞有毒害作用。禾本科農(nóng)作物ATI蛋白通過調(diào)節(jié)細胞膜上PIP2s蛋白磷酸

化水平，影響電。2的跨膜轉(zhuǎn)運，如圖所示。下列敘述錯誤的是（）

MMIVWAWAWWWA

膜內(nèi)小抑制

I??一H2O

'AB缺陷?

抗氧化脅迫能力弱，細胞死亡抗氧化脅迫，高成活率

注：。磷酸化

A.細胞膜上PIP2s蛋白高磷酸化水平是其亮高H2O2外排能力所必需的

B.PIP2s蛋白磷酸化被抑制，促進H2O2外排，從而減輕其對細胞的毒

害

C.敲除ATI基因或降低其表達可提高禾本科農(nóng)作物的耐鹽堿能力

D.從特殊物種中發(fā)掘逆境脅迫相關(guān)基因是改良農(nóng)作物抗逆性的有效途徑

6.（2023?湖北?統(tǒng)考高考真題）用氨節(jié)青霉素抗性基因（AmpR）、四環(huán)素

抗性基因（TetR）作為標(biāo)記基因構(gòu)建的質(zhì)粒如圖所示。用含有目的基因的

DNA片段和用不同限制酶酶切后的質(zhì)粒，構(gòu)建基因表達載體（重組質(zhì)粒），

并轉(zhuǎn)化到受體菌中。下列敘述錯誤的是（）

A.若用HindHI酶切，目的基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物可能不同

B.若用Pvul酶切，在含Tet（四環(huán)素）培養(yǎng)基中的菌落，不一定含有

目的基因

C.若用Sphl酶切，可通過DNA凝膠電泳技術(shù)鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功

與否

D.若用SphI酶切，攜帶目的基因的受體菌在含Amp（氨茉青霉素）和

Tet的培養(yǎng)基中能形成菌落

7.（2023?浙江?統(tǒng)考高考真題）某研究小組利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將綠色熒光

蛋白基因（GFP）整合到野生型小鼠基因一端，如圖甲所示。實驗得

到能正常表達兩種蛋白質(zhì)的雜合子雌雄小鼠各1只，交配以期獲得

基因純合子小鼠。為了鑒定交配獲得的4只新生小鼠的基因型，

設(shè)計了引物1和引物2用于PCR擴增，PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖乙所示。

Gata3

?，啟動子區(qū)L編碼區(qū)—［非編碼區(qū)，，

插入前--------r---------Ij,

Gata3m?物［GFP

啟動子區(qū)!_編碼區(qū)膽］，編碼區(qū)?非編碼區(qū).

插入后3,____!_________|_j；

圖甲

下列敘述正確的是（）

A.G〃/〃3基因的啟動子無法控制GFP基因的表達

B.翻譯時先合成Gata3蛋白，再合成GFP蛋白

C.2號條帶的小鼠是野生型，4號條帶的小鼠是G“a3-G尸尸基因純合子

D.若用引物1和引物3進行PCR,能更好地區(qū)分雜合子和純合子

8.（2023?廣東?統(tǒng)考高考真題）“DNA粗提取與鑒定”實驗的基本過程是：

裂解一分離一沉淀一鑒定。下列敘述錯誤的是（）

A.裂解：使細胞破裂釋放出DNA等物質(zhì)

B.分離：可去除混合物中的多糖、蛋白質(zhì)等

C.沉淀：可反復(fù)多次以提高DNA的純度

D.鑒定：加入二苯胺試劑后即呈現(xiàn)藍色

9.（2023?廣東?統(tǒng)考高考真題）中外科學(xué)家經(jīng)多年合作研究，發(fā)現(xiàn)circDNMTl

（一種RNA分子）通過與抑癌基因〃53表達的蛋白結(jié)合誘發(fā)乳腺癌，為解

決乳腺癌這一威脅全球女性健康的重大問題提供了新思路。下列敘述錯誤

的是（）

A.〃53基因突變可能引起細胞癌變

B.p53蛋白能夠調(diào)控細胞的生長和增殖

c.circDNMTl高表達會使乳腺癌細胞增殖變慢

D.circDNMTl的基因編輯可用于乳腺癌的基礎(chǔ)研究

10.（2023?山西?統(tǒng)考高考真題）某同學(xué)擬用限制酶（酶1、醐2、酶3和

酶4）、DNA連接酶為工具，將目的基因（兩端含相應(yīng)限制酶的識別序列

和切割位點）和質(zhì)粒進行切割、連接，以構(gòu)建重組表達載體。限制酶的切

割位點如圖所示。

酶4

5'—GAATTC——3'5'——GGATCC——3'5'_CCCGGG——3'5'——AGATCT—3'

3'—CTTAAG—5'3'—CCTAGp_5'3'——GGGCCC——5'3'—TCTAGA—5r

tTtt

酶1酶2酶3酶4

下列重組表達載體構(gòu)建方案合理且效率最高的是（）

A.質(zhì)粒和目的基因都用酶3切割，用￡co〃DNA連接酶連接

B.質(zhì)粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4DNA連接酶連接

C.質(zhì)粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4DNA連接酶連接

D.質(zhì)粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E.co〃DNA連接酶連接

高考模擬題必刷

11.（2023?廣西北海?統(tǒng)考一模）研究發(fā)現(xiàn)，夜班工作引起的晝夜節(jié)律紊亂

可以改變腫瘤相關(guān)基因的表達，引起細胞癌變，對人體自身DNA修復(fù)也會

產(chǎn)生負面影響。下列敘述正確的是（）

A.原癌基因在表達時，轉(zhuǎn)錄和翻譯過程中堿基互補配對原則完全相同

B.熬夜可能會使細胞分裂過程中出現(xiàn)突變進而導(dǎo)致患癌癥的風(fēng)險增加

C.與正常細胞相比，癌變細胞細胞膜上的糖蛋白增多，細胞之間的黏

著性顯著增強

D.在DNA修復(fù)過程中，需限制酶剪切錯誤片段中的氫鍵，需DNA聚

合酶催化DNA片段的修復(fù)

12.（2023?浙江寧波?鎮(zhèn)海中學(xué)校聯(lián)考一模）科研人員將目的基因J與質(zhì)粒

構(gòu)建重組表達載體，該質(zhì)粒的部分結(jié)構(gòu)如圖所示，下列敘述錯誤的是（）

啟動子J基因V5編碼序列終止子

注：Fi、F2、Ri、R2表示引1物^號巨野社區(qū)

A.除圖中標(biāo)出的結(jié)構(gòu)外，質(zhì)粒還需具備的結(jié)構(gòu)有復(fù)制原點、標(biāo)記基因、

限制酶切位點等

B.與圖中啟動子結(jié)合的酶是RNA聚合酶

C.用PCR檢測J基因連接到質(zhì)粒中且方向正確可選用的一對引物是Fi

和R2

D.若J基因轉(zhuǎn)錄的鏈位于b鏈，可知引物R與基因J的b鏈相應(yīng)部分

序列相同

13.（2023?全國?校聯(lián)考模擬預(yù)測）生物興趣小組開展人類遺傳病發(fā)病率和

遺傳方式的調(diào)查活動，發(fā)現(xiàn)某家系同時有甲遺傳?。ɑ驗锳、a）和乙遺

傳?。ɑ驗镽、h）患者，系譜如圖1：對那分家庭成員是否攜帶甲病基

因進行核酸分子檢測，結(jié)果如圖2,己知乙病為常染色體遺傳病，且在人群

中的發(fā)病率為l/lOOOOo上述基因均不位于Y染色體上，下列敘述錯誤的是

（）

限制附切點I,|IIL

7124o

正?；?/p>

突變基因

探針位置限制能酶切基因片

■兩病兼患男口。正常男女段與探針雜交顯示

的電泳帶圖譜

野社區(qū)

圖1

A.甲病屬于常染色體隱性遺傳病

B.HL是患病男孩的概率是11/27

C.117同時攜帶兩種致病基因的概率是4/9

D.117與另一健康男子再婚，生一個患乙病孩子的概率約為1/303

14.（2023?海南?統(tǒng)考二模）載體是基因工程中攜帶外源DNA片段（目的

基因）進入受體細胞的重要運載工具，常見的載體類型主要有基因克隆載

體和基因表達載體。下圖是利用細菌生產(chǎn)人胰島素的基本流程示意圖，下

列相關(guān)敘述正確的是（）

平板篩選、鑒定分析

A.重組載體A、重組載體B分別是基因表達載體和基因克隆載體

B.載體A和載體B都必須含有限制酶切割位點、復(fù)制原點和標(biāo)記基因

C.必須把目的基因插入重組載體A的啟動子和終止子之間

D.培養(yǎng)細菌A和細菌B的培養(yǎng)基在營養(yǎng)成分和功能上沒有明顯差異

15.（2023?全國?校聯(lián)考模擬預(yù)測）"嵌合體''是指同一個體或器官，其不同

成熟體細胞的核基因組成不同。下列情況一般不會出現(xiàn)“俄合體''的是

（）

A.經(jīng)外源基因轉(zhuǎn)入受精卵后正常發(fā)育的幼鼠

B.經(jīng)造血干細胞移植的血友病患者

C.經(jīng)X射線處理種子后發(fā)育成的小麥幼畝

D.經(jīng)秋水仙素處理的單倍體幼苗

16.（2023?全國?校聯(lián)考模擬預(yù)測）M細胞由小鼠胚胎干細胞定向誘導(dǎo)分化

而來，將其移植到糖尿病模型小鼠（胰島細胞被特定藥物破壞的小鼠）體

內(nèi)，測定小鼠的血糖濃度如圖所示。用胰島素基因片段制成探針，對小鼠

胚胎干細胞和M細胭進行檢測，并將結(jié)果記錄在表中。下列敘述正確的是

（）

血

糖

濃未移植組

度

平

移植組

移植后的時間

用探針檢測細胞的DNA用探針檢測細胞的RNA

胚胎干細胞M細胞胚胎干細胞M細胞

+①②③

注：“+”表示能檢測到，“一”表示不能檢測到

A.可用胃蛋白酶處理小鼠的早期囊胚以獲得胚胎干細胞

B.圖中結(jié)果表明M細胞己具備胰島。細胞的功能

C.表中①②③處的結(jié)果分別為“+、?、?“

D.實驗需用到動物細胞培養(yǎng)、胚胎移植、核酸分子雜交等技術(shù)

17.（2023?云南大理?統(tǒng)考模擬預(yù)測）微生物是難以用肉眼觀察到的微小生

物的統(tǒng)稱，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和科學(xué)研究等方面都有重要用途。下列敘述正確的

是（）

①硝化細菌和藍細菌均不含葉綠體，但二者均是能進行光合作用的自養(yǎng)生

物②有莢膜的S型肺炎鏈球菌可抵抗吞噬細胞的吞噬，有利于其在宿主體

內(nèi)生活并繁殖③T2噬菌體專門寄生在大腸桿菌體內(nèi)與其遺傳物質(zhì)的特異性

有關(guān)④腌制泡菜的過程中，泡菜壇只能裝八成滿是為了防止乳酸菌產(chǎn)生C02

使發(fā)酵液溢出⑤通過發(fā)酵工程可以從微生物細胞中提取單細胞蛋白用于制

成微生物飼料⑥農(nóng)桿菌可以在自然條件下侵染雙子葉植物，將目的基因轉(zhuǎn)

移到受體細胞中

A.①②④B.①④⑤C.②③⑥D(zhuǎn).③⑤⑥

18.（2023?遼寧?統(tǒng)考高考真題）天然0淀粉酶大多耐熱性差，不利于工業(yè)

化應(yīng)用。我國學(xué)者借助PCR改造0-淀粉酶基因，并將改造的基因與pLN23

質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌，最終獲得耐高溫的0-淀粉酶?；卮鹣铝袉栴}：

（1）上述過程屬于—工程。

（2）PCR中使用的聚合酶屬于（填寫編號）,

①以DNA為模板的RNA聚合酶②以RNA為模板的RNA聚合酶

③以DNA為模板的DNA聚合酶④以RNA為模板的DNA聚合酶

（3）某天然淀粉酶由484個氨基酸構(gòu)成，研究發(fā)現(xiàn)，將該酶第476位

天冬氨酸替換為天冬酰胺，耐熱性明顯提升。在圖1所示的淀粉酶基因

改造方案中，含已替換堿基的引物是_（填寫編號）。

B?淀粉酶的編碼序列

轉(zhuǎn)錄的模板鏈一1

（4）為了使上述改造后的基因能在大腸桿菌中高效表達，由圖2所示的

PLN23質(zhì)粒構(gòu)建得到基因表達載體。除圖示信息外，基因表達載體中還應(yīng)該

有目的基因（即改造后的基因）和

啟動子BamHI終止子

EcoRI

pLN23

4.2kb1kb=1000堿基對

第制原點

圖2

（5）目的基因（不含EcoRI酶切位點）全長為1.5kb,將其插入BamHI

位點。用EcoRI酶切來自于不同大腸桿菌菌落的質(zhì)粒DNA,經(jīng)瓊脂糖凝膠

電泳確定DNA片段長度，這一操作的目的是正確連接的基因表達載體

被EcoRI酶切后長度為—kbo

（6）采用PCR還能在分子水平上確定目的基因是否轉(zhuǎn)錄，根據(jù)中心法貝h

可通過—反應(yīng)獲得PCR的模板。

19.（2023.江蘇.統(tǒng)考高考真題）為了將某納米抗體和綠色熒光蛋白基因融

合表達，運用重組酶技術(shù)構(gòu)建履粒，如圖1所示。請回答下列問題：

擬構(gòu)建的720bp390bp注：EGFP熒光蛋白

基因結(jié)構(gòu)_AnBl納米抗體

AnBl

F2片段

PCR弓|物及目

Fl片技

的產(chǎn)物片段

一線性質(zhì)粒

基因重組載體

克隆流程

物片段與

PCR產(chǎn)重

線性載體混合組酶

注：一表示PCR引物;

轉(zhuǎn)化相同背景方框表示

同源序列

圖1

(1)分別進行PCR擴增片段F1與片段F2時，配制的兩個反應(yīng)體系中不同

的有一，擴增程序中最主要的不同是一。

(2)有關(guān)基因序列如圖2.引物F2-F、F1-R應(yīng)在下列選項中選用_______。

EGFP基因序列：5'ATGGTGAGCAAGGGC-----------GACGAGCTGTACAAG3'

AnBl基因序列:5CATGTCCAGCTGCAG--------CCAAA.A.CCACAACCA3'

A.ATGGTG——CAACCA

B.TGGTTG-----CACCAT

C.GACGAG——CTGCAG

D.CTGCAG——CTCGTC

(3)將PCR產(chǎn)物片段與線性質(zhì)粒載體混合后，在重組酶作用下可形成環(huán)化

質(zhì)粒，直接用于轉(zhuǎn)化細菌。這一過程與傳統(tǒng)重組質(zhì)粒構(gòu)建過程相比，無需

使用的酶主要有—。

（4）轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌需采用含有抗生素的培養(yǎng)基篩選，下列敘述錯誤的

有O

A.稀釋涂布平板需控制每個平板30?300個菌落

B.抗性平板上未長出菌落的原因一般是培養(yǎng)基溫度太高

C.抗性平板上常常會出現(xiàn)大量雜菌形成的菌落

D.抗性平板上長出的單菌落無需進一步劃線純化

（5）為了驗證平板上菌落中的質(zhì)粒是否符合設(shè)計，用不同菌落的質(zhì)粒為模

板，用引物F1-F和F2-R進行了PCR擴增，質(zhì)粒PrP4的擴增產(chǎn)物電泳結(jié)

果如圖3.根據(jù)圖中結(jié)果判斷，可以舍棄的質(zhì)粒有一。

LMPlP2P3P4

3000—

2000-

1000-—一

500——

250—

50一

圖3

（6）對于PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果符合預(yù)期的質(zhì)粒，通常需進一步通過基因測序

確認，原因是O

20.（2023?北京?統(tǒng)考高考真題）變胖過程中，胰島B細胞會增加。增加的

B細胞可能源于自身分裂（途徑I）,也可能來自胰島中干細胞的增殖、分

化（途徑11）?？茖W(xué)家采用胸腺喀嚏類似物標(biāo)記的方法，研究了L基因缺

失導(dǎo)致肥胖的模型小鼠IK中新增B細胞的來源。

（DEdU和BrdU都是胸腺喀咤類似物，能很快進入細胞并摻入正在復(fù)制的

DNA中，摻入DNA的EdU和BrdU均能與______互補配對，并可以被分別

檢測。未摻入的EdU和BrdU短時間內(nèi)即被降解。

（2）將處于細胞周期不同階段的細胞混合培養(yǎng)于多孔培養(yǎng)板中，各孔同時

加入EdU,隨后每隔一定時間向一組培養(yǎng)孔加入BrdU,再培養(yǎng)I幾分鐘后

收集該組孔內(nèi)全部細胞，檢測雙標(biāo)記細胞占EdU標(biāo)記細胞的百分比（如圖）。

圖中反映DNA復(fù)制所需時長的是從點到點。

雙

標(biāo)

細

記

胞

細

的

胞

百

占

分2

比U

標(biāo)

記

時間

（3）為研究變胖過程中B細胞的增殖，需使用一批同時變胖的小鼠。為此，

本實驗使用誘導(dǎo)型基因敲除小鼠，即飼喂誘導(dǎo)物后小鼠的L基因才會被敲

除，形成小鼠IK?？茖W(xué)家利用以下實驗材料制備小鼠IK：

①純合小鼠Lx：小鼠L基因兩側(cè)已插入特異DNA序列（x）,但L的功能正

常；②Cc酶基因：源自噬菌體，其編碼的酶進入細胞核后作用于x,導(dǎo)致

兩個x間的DNA片段丟失；③Er基因：編碼的Er蛋白位于細胞質(zhì)，與Er

蛋白相連的物質(zhì)的定位由Er蛋白決定；④口服藥T：小分子化合物，可誘

導(dǎo)Er蛋白進入細胞核。請完善制備小鼠IK的技術(shù)路線：一連

接到表達載體一轉(zhuǎn)入小鼠Lx—篩選目標(biāo)小鼠T-獲得小鼠

IKo

（4）各種細胞DNA復(fù)制所需時間基本相同，但途徑I的細胞周期時長（口）

是途徑II細胞周期時長（12）的三倍以上。據(jù)此，科學(xué)家先用EdU飼喂小鼠

IK,t2時間后換用BrdU飼喂，再過t2時間后檢測B細胞被標(biāo)記的情況，研

究表明，變胖過程中增加的B細胞大多數(shù)來源于自身分裂，與之相應(yīng)的檢

測結(jié)果應(yīng)是—。

21.（2023?北京?統(tǒng)考高考真題）二十大報告提出“種業(yè)振興行動:油菜是

重要的油料作物，篩選具有優(yōu)良性狀的育種材料并探究相應(yīng)遺傳機制，對

創(chuàng)制高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)新品種意義重大。

（1）我國科學(xué)家用誘變劑處理野生型油菜（綠葉），獲得了新生葉黃化突

變體（黃化葉）。突變體與野生型雜交，結(jié)果如圖甲，其中隱性性狀是______o

P野生型X黃化葉

耳野生型

I0

F,野生型黃化葉

■980346

唧眾號.巨野社區(qū)

（2）科學(xué)家克隆出導(dǎo)致新生葉黃化的基因，與野生型相比，它在DNA序列

上有一個堿基對改變，導(dǎo)致突變基因上出現(xiàn)了一個限制酶B的酸切位點（如

圖乙）。據(jù)此，檢測F2基因型的實驗步驟為：提取基因組DNA-PCR一回收

擴增產(chǎn)物一-電泳。F2中雜合子電泳條帶數(shù)目應(yīng)為條。

酶B的酶切位點

弓?物〉J

下

^4公眾號?巨野2

（3）油菜雄性不育品系A(chǔ)作為母本與可育品系R雜交，獲得雜交油菜種子

S（雜合子），使雜交油菜的大規(guī)模種植成為可能。品系A(chǔ)1育性正常，其

他性狀與A相同，A與A1雜交，子一代仍為品系A(chǔ),由此可大量繁殖A.在

大量繁殖A的過程中，會因其他品系花粉的污染而導(dǎo)致A不純，進而影響

種子S的純度，導(dǎo)致油菜籽減產(chǎn)。油菜新生葉黃化表型易辨識，且對產(chǎn)量

沒有顯著影響?？茖W(xué)家設(shè)想利用新生葉黃化性狀來提高種子S的純度。育

種過程中首先通過一系列操作，獲得了新生葉黃化的A1,利用黃化A1生產(chǎn)

種子S的育種流程見圖丙。

黃化Al黃化Al黃化Al黃化AlR

J授粉，授粉［授粉J授粉I授粉

A植株=>綠葉鱉黃化—>黃化=黃化邈養(yǎng)怛"

雄性不育植株A植株人A植株人A植株（供生廣;種植）

777

試驗肓種階段大田生產(chǎn)種子大田生產(chǎn)種子

（無花粉污染）階段一階段二

國加I_、帖在粉工辦姑（存在花粉污染）

圖例：=>收獲種子、種植

丙

①圖丙中，A植株的綠葉雄性不育子代與黃化A1雜交，篩選出的黃化A植

株占子一代總數(shù)的比例約為0

②為減少因花粉污染導(dǎo)致的種子S純度下降，簡單易行的田間操作

用0

22.（2023.海南.高考真題）基因遞送是植物遺傳改良的重要技術(shù)之一，我

國多個實驗室合作開發(fā)了一種新型基因遞送系統(tǒng)（切一浸一生芽

Cut-Dip-Budding,簡稱CDB法）。圖1與圖2分別是利用常規(guī)轉(zhuǎn)化法和

CDB法在某植物中遞送基因的示意圖。

圖1圖2野社區(qū)

回答下列問題。

（1）圖1中，從外植體轉(zhuǎn)變成愈傷組織的過程屬于從愈傷組織到幼苗

的培養(yǎng)過程需要的激素有生長素和該過程還需要光照，其作用是

（2）圖1中的愈傷組織，若不經(jīng)過共培養(yǎng)環(huán)節(jié)，直接誘導(dǎo)培養(yǎng)得到的植株

可以保持植株A的—。圖1中，含有外源基因的轉(zhuǎn)化植株A若用于生產(chǎn)種

子，其包裝需標(biāo)注

（3）圖1與圖2中，農(nóng)桿菌侵染植物細胞時，可將外源基因遞送到植物細

胞中的原因是一。

（4）己知某酶（PDS）缺失會導(dǎo)致植株白化。某團隊構(gòu)建了用于敲除PDS

基因的CRISPR/Cas9基因編輯載體（含有綠色熒光蛋白標(biāo)記基因），利用

圖2中的CDB法將該重組載體導(dǎo)入植株B,長出毛狀根，成功獲得轉(zhuǎn)化植株

B.據(jù)此分析，從毛狀根中獲得陽性毛狀根段的方法是圖2中，鑒定導(dǎo)

入幼苗中的基因編輯載體是否成功發(fā)揮作用的方法是依據(jù)是

（5）與常規(guī)轉(zhuǎn)化法相比，采用CDB法進行基因遞送的優(yōu)點是_（答出2

點即可）。

23.（2023?浙江?統(tǒng)考高考真題）賴氨酸是人體不能合成的必需氨基酸，而

人類主要食物中的賴氨酸含量很低，利用牛物技術(shù)可提高食物中賴氨酯含

量?；卮鹣铝袉栴}：

（1）植物細胞合成的賴氨酸達到一定濃度時，能抑制合成過程中兩種關(guān)鍵

酶的活性，導(dǎo)致賴氨酸含量維持在一定濃度水平，這種調(diào)節(jié)方式屬于—o

根據(jù)這種調(diào)節(jié)方式，在培養(yǎng)基中添加—，用于篩選經(jīng)人工誘變的植物懸浮

細胞，可得到抗賴氨酸類似物的細胞突變體，通過培養(yǎng)獲得再生植株。

（2）隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)與動物細胞工程結(jié)合和發(fā)展，2011年我國首次利用轉(zhuǎn)

基因和體細胞核移植技術(shù)成功培育了高產(chǎn)賴氨酸轉(zhuǎn)基因克隆奶牛。其基本

流程為：

①構(gòu)建乳腺專一表達載體。隨著測序技術(shù)的發(fā)展，為獲取富含賴氨酸的酪

蛋白基因（目的基因），可通過檢索—獲取其編碼序列，用化學(xué)合成法制

備得到。再將獲得的目的基因與含有乳腺特異性啟動子的相應(yīng)載體連接，

構(gòu)建出乳腺專一表達載體。

②表達載體轉(zhuǎn)入牛胚始成纖維細胞（BEF）。將表達載體包裹到磷脂等構(gòu)成

的脂質(zhì)體內(nèi)，與BEF謨發(fā)生一，表達載體最終進入細胞核，發(fā)生轉(zhuǎn)化。

③核移植。將轉(zhuǎn)基因為BEF作為核供體細胞，從牛卵巢獲取卵母細胞，經(jīng)

體外培養(yǎng)及去核后作為—o將兩種細胞進行電融合，電融合的作用除了促

進細胞融合，同時起到了一重組細胞發(fā)育的作用。

④重組細胞的體外培養(yǎng)及胚胎移植。重組細胞體外培養(yǎng)至一，植入代孕母

牛子宮角，直至小牛出生。

⑤檢測。DNA水平檢測：利用PCR技術(shù)，以非轉(zhuǎn)基因牛耳組織細胞作為陰性

對照，以—為陽性對照，檢測到轉(zhuǎn)基因牛耳組織細胞中存在目的基因。RNA

水平檢測：從非轉(zhuǎn)基因牛乳汁中的脫落細胞、轉(zhuǎn)基因牛乳汁中的脫落細胞

和轉(zhuǎn)基因牛耳組織細胞，提取總RNA,對總RNA進行—處理，以去除DNA

污染，再經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA,并以此為—,利用特定引物擴增目的基因片

段。結(jié)果顯示目的基因在轉(zhuǎn)基因牛乳汁中的脫落細胞內(nèi)表達，而不在牛耳

組織細胞內(nèi)表達，原因是什么？—0

24.（2023?天津?統(tǒng)考高考真題）基因工程：制備新型酵母菌

（1）已知酵母菌不能吸收淀粉，若想使新型酵母菌可以直接利用淀粉發(fā)酵，

則應(yīng)導(dǎo)入多步分解淀粉所需的多種酶，推測這些酶生效的場所應(yīng)該是_（填

“細胞內(nèi)”和“細胞外”）

（2）同源切割是一種代替限制酶、DNA連接酶將目的基因?qū)牖虮磉_我

體的方法。當(dāng)目的基因兩側(cè)的小段序列與基因表達載體上某序列相同時，

就可以發(fā)生同源切割，將目的基因直接插入。研究人員，運用同源切割的

方式，在目的基因兩端加上一組同源序列A.B,已知酵母菌體內(nèi)DNA有許

多A-B序列位點可以同源切割插入。構(gòu)建完成的目的基因結(jié)構(gòu)如圖，則應(yīng)

選擇圖中的引物—對目的基因進行PCR。

fPi

>P2

->P3

A目的基因B

P4<—

P5<-

P6<——

(3)己知酵母菌不能合成尿喀咤，因此尿喀嚏合成基因(UGA)常用作標(biāo)

記基因，又知尿喘咤可以使5-氟乳清酸轉(zhuǎn)化為對酵母菌有毒物質(zhì)。

(D導(dǎo)入目的基因的酵母菌應(yīng)在—的培養(yǎng)基上篩選培養(yǎng)。由于需要導(dǎo)入多

種酶基因，需要多次篩選，因此在導(dǎo)入一種目的基因后，要切除UGA基因，

再重新導(dǎo)入。研究人員在UGA基因序列兩端加上酵母菌DNA中不存在的同

源C.C序列，以便對UGA基因進行切除。C.C的序列方向?qū)⒂绊懬懈顣r同

源序列的配對方式，進而決定DNA片段在切割后是否可以順利重連，如圖，

則應(yīng)選擇方式—進行連接。

(ii)切去UGA基因為酵母菌應(yīng)在—的培養(yǎng)基上篩選培養(yǎng)。

(4)綜上，目的基因、標(biāo)記基因和同源序列在導(dǎo)入酵母菌的基因表達載體

上的排列方式應(yīng)該如紐

C，

圖3

25.（2023.天津.統(tǒng)考高考真題）某植物四號染色體上面的A基因可以指導(dǎo)

植酸合成，不能合成植酸的該種植物會死亡?，F(xiàn)有A3-和A25-兩種分別由A

基因缺失3個和25個堿基對產(chǎn)生的基因，已知前者不影響植酸合成，后者

效果未知。

（1）現(xiàn)有基因型為AA25-的植物，這兩個基因是—基因。該植物自交后代

進行PCR,正向引物與A25-缺失的堿基配對，反向引物在其下游0.5kb處,

PCR后進行電泳，發(fā)現(xiàn)植物全部后代PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果均具有明亮條帶，原

因是_，其中明亮條帶分為較明亮和較暗兩種，其中較明亮條帶代表基因

型為—的植物，比例為

（2）將一個A基因?qū)牖蛐蜑锳3925-的植物的6號染色體，構(gòu)成基因型

為A3-A25-A的植物、該植物自交子代中含有A25-A25-的比例是

（3）在某逆境中，基因型為A3-A3?的植物生存具有優(yōu)勢，現(xiàn)有某基因型為

A3-A的植物，若該種植物嚴格自交，且基因型為A3-A3-的植物每代數(shù)量增加

10%,補齊下面的表格中，子一代基因頻率數(shù)據(jù)（保留一位小數(shù)）：

代親代子一代子二代

A基因頻率50%_%46.9%

A3-基因頻率50%—%53.1%

基因頻率改變，是—的結(jié)果。

26.（2023?山東?高考真題）科研人員構(gòu)建了可表達J-V5融合蛋白的重組

質(zhì)粒并進行了檢測，該質(zhì)粒的部分結(jié)構(gòu)如圖甲所示，其中V5編碼序列表達

標(biāo)簽短肽V5o

啟動子J基因V5編碼序列終止子

二,j-常就條帶?

RlR2—_

注：Fl、F2、Rl、R2表示引物抗J蛋白抗體抗V5抗體

圖甲修公.圖片野社區(qū)

（1）與圖甲中啟動子結(jié)合的酶是。除圖甲中標(biāo)出的結(jié)構(gòu)外，作為載

體，質(zhì)粒還需具備的結(jié)構(gòu)有（答出2個結(jié)構(gòu)即可）。

（2）構(gòu)建重組質(zhì)粒后，為了確定j基因連接到質(zhì)粒中且插入方向正確，需

進行PCR檢測，若僅用一對引物，應(yīng)選擇圖甲中的引物。已知J基因

轉(zhuǎn)錄的模板鏈位于b鏈，由此可知引物F1與圖甲中J基因的（填

“a鏈”或“b鏈”）相應(yīng)部分的序列相同。

（3）重組質(zhì)粒在受體細胞內(nèi)正確表達后，用抗J蛋白抗體和抗V5抗體分

別檢測相應(yīng)蛋白是否表達以及表達水平，結(jié)果如圖乙所示。其中，出現(xiàn)條

帶1證明細胞內(nèi)表達了，條帶2所檢出的蛋白（填“是”或

“不是”）由重組質(zhì)粒上的J基因表達的。

27.（2023?湖南?統(tǒng)考高考真題）基因檢測是診斷和預(yù)防遺傳病的有效手段。

研究人員采集到一遺傳病家系樣本，測序后發(fā)現(xiàn)此家系甲和乙兩個基因存

在突變：甲突變可致先天性耳聾；乙基因位于常染色體上，編碼產(chǎn)物可將

葉酸轉(zhuǎn)化為N5-甲基四氫葉酸，乙突變與胎兒神經(jīng)管缺陷（NTDs）相關(guān)；

甲和乙位于非同源染色體上一家系患病情況及基因檢測結(jié)果如圖所示。不

考慮染色體互換，回答下列問題：

D-pO

12

甲+/-+/-

乙+/-+/-

4昌

nQ

D

24

甲

乙-/--/-

+/-+/-

+未突變

Y￥目男性耳聾口正常男性

甲十三女性耳聾。正常女性

乙+/-。性別未知

（1）此家系先天性耳聾的遺傳方式是o1-1和12生育一個甲和乙突

變基因雙純合體女兒的概率是。

（2）此家系中甲基因突變?nèi)缦聢D所示：

正?；騿捂溒?'-ATTCCAGATC……（293個堿基）……CCAT基因AG-3'

突變基因單鏈片段5'-ATTCCATATC...突93個堿基）...CCATGCCCAG-3,

研究人員擬用PCR擴增目的基因片段，再用某限制酶（識別序列及切割位

點為。-篇氏］）酶切檢測甲基因突變情況，設(shè)計了一條引物為5，

、［…

-GGCATG-3',另一條引物為（寫出6個堿基即可）。用上述引物擴增

出家系成員IIT的目的基因片段后，其酶切產(chǎn)物長度應(yīng)為bp（注：該

醒切位點在目的基因片段中唯一）。

（3）女性的乙基因純合突變會增加胎兒NTDs風(fēng)險。葉酸在人體內(nèi)不能合

成，孕婦服用葉酸補充劑可降低NTDs的發(fā)生風(fēng)險。建議從可能妊娠或孕前

至少1個月開始補充葉酸，一般人群補充有效且安全劑量為0.4?l.Omg.d-',

NTDs生育史女性補充4mg.dL經(jīng)基因檢測胎兒（山-2）的乙基因型為-/-，

據(jù)此推薦該孕婦（II-1）葉酸補充劑量為—mg.d'o

28.（2023?湖北?統(tǒng)考高考真題）某病毒對動物養(yǎng)殖業(yè)危害十分嚴重。我國

學(xué)者擬以該病毒外殼蛋白A為抗原來制備單克隆抗體，以期快速檢測該病

毒，其主要技術(shù)路線如圖所示。

［轉(zhuǎn)基因|

基因A------?

回答下列問題:

（1）與小鼠骨髓瘤細胞融合前，已免疫的脾細胞（含漿細胞）—（填“需

要”或“不需要”）通過原代培養(yǎng)擴大細胞數(shù)量；添加脂溶性物質(zhì)PEG可

促進細胞融合，該過程中PEG對細胞膜的作用是—o

（2）在雜交瘤細胞篩選過程中，常使用特定的選擇培養(yǎng)基（如HAT培養(yǎng)基），

該培養(yǎng)基對—和—生長具有抑制作用。

（3）單克隆抗體篩選中，將抗體與該病毒外殼蛋白進行雜交，其目的是_____

（4）構(gòu)建重組質(zhì)粒需要使用DNA連接酶。下列屬于DNA連接酶底物的是

OHOHPP

5'丁川1”II口I3,5，Tri\iiiiiiii3,

,1IIIIIl|JIIII

35,3/jiiiiiiiiii15/

OHOHPP

①②

POHOHP

n

5'TT1lI□□Il|3'5'Ehrm口i13,

/lIIIIIIIIIIl/

353；IIIIIIIIIIII5/

OHPPOH

③松眾號?巨野社區(qū)

29.（2023?全國?統(tǒng)考高考真題）GFP是水母體內(nèi)存在的能發(fā)綠色熒光的一

種蛋白?？蒲腥藛T以GFP基因為材料，利用基因工程技術(shù)獲得了能發(fā)其他

顏色熒光的蛋白，豐富了熒光蛋白的顏色種類?；卮鹣铝袉栴}。

（1）構(gòu)建突變基因文庫，科研人員將GFP基因的不同突變基因分別插入載

體，并轉(zhuǎn)入大腸桿菌制備出GFP基因的突變基因文庫。通常，基因文庫是

指O

（2）構(gòu)建目的基因表達載體?？蒲腥藛T從構(gòu)建的GFP突變基因文庫中提取

目的基因（均為突變基因）構(gòu)建表達載體，其模式圖如下所示（箭頭為GFP

突變基因的轉(zhuǎn)錄方向）。圖中①為一；②為一，其作用是一；圖中氨

葦青霉素抗性基因是一種標(biāo)記基因，其作用是—o

復(fù)制原點

（3）目的基因的表達?？蒲腥藛T將構(gòu)建好的表達載體導(dǎo)入大腸桿菌中進行

表達，發(fā)現(xiàn)大腸桿菌有的發(fā)綠色熒光，有的發(fā)黃色熒光，有的不發(fā)熒光。

請從密碼子特點的角度分析，發(fā)綠色熒光的可能原因是—（答出1點即可）。

（4）新蛋白與突變基因的關(guān)聯(lián)性分析。將上述發(fā)黃色熒光的大腸桿菌分離

純化后，對其所含的GFP突變基因進行測序，發(fā)現(xiàn)其堿基序列與GFP基因

的不同，將該GFP突變基因命名為YFP基因（黃色熒光蛋白基因）。若要

通過基因工程的方法探究YFP基因能否在真核細胞中表達，實驗思路是—

30.（2023?全國?統(tǒng)考高考真題）接種疫苗是預(yù)防傳染病的一項重要措施，

乙肝疫苗的使用可有效阻止乙肝病毒的傳播，降低乙型肝炎發(fā)病率。乙肝

病毒是一種DNA病毒。重組乙肝疫苗的主要成分是利用基因工程技術(shù)獲得

的乙肝病毒表面抗原（一種病毒蛋白）。回答下列問題。

（1）接種上述重組乙肝疫苗不會在人體中產(chǎn)生乙肝病毒，原因是

（2）制備重組乙肝疫苗時，需要利用重組表達載體將乙肝病毒表面抗原基

因（目的基因）導(dǎo)入酵母細胞中表達。重組表達載體中通常含有抗生素抗

性基因，抗生素抗性基因的作用是能識別載體中的啟動子并驅(qū)動目的

基因轉(zhuǎn)錄的酶是

（3）目的基因?qū)虢湍讣毎?，若要檢測目的基因是否插入染色體中，需

要從酵母細胞中提取—進行DNA分子雜交，D\A分子雜交時應(yīng)使用的探針

是一。

（4）若要通過實驗檢測目的基因在酵母細胞中是否表達出目的蛋白，請簡

要寫出實驗思路。_

31.（2023?浙江?統(tǒng)考高考真題）甲植物細胞核基因具有耐鹽堿效應(yīng)，乙植

物細胞質(zhì)基因具有高產(chǎn)效應(yīng)。某研究小組用甲、乙兩種植物細胞進行體細

胞雜交相關(guān)研究，基本過程包括獲取原生質(zhì)體、誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合、篩選

融合細胞、雜種植株再生和鑒定，最終獲得高產(chǎn)耐鹽堿再生植株?；卮鹣?/p>

列問題：

（1）根據(jù)研究目標(biāo)，在甲、乙兩種植物細胞進行體細胞雜交前，應(yīng)檢驗兩

種植物的原生質(zhì)體是否具備的能力。為了便于觀察細胞融合的狀況,

通常用不同顏色的原生質(zhì)體進行融合，若甲植物原生質(zhì)體采用幼苗的根為

外植體，則乙植物可用幼苗的為外植體.

（2）植物細胞壁的主要成分為和果膠，在獲取原生質(zhì)體時，常采用

相應(yīng)的酶進行去壁處理。在原生質(zhì)體融合前，需對原生質(zhì)體進行處理，分

別使甲原生質(zhì)體和乙原生質(zhì)體的失活。對處理后的原生質(zhì)體在顯微鏡

下用計數(shù)，確定原生質(zhì)體密度。兩種原生質(zhì)體1:1混合后，通過添

加適宜濃度的PEG進行融合；一