DB32/TXXXX-XXXXDB32/TXXXX-XXXX前言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由南京師范大學(xué)提出并歸口。本文件起草單位：南京師范大學(xué)、南京倍萜源生物科技有限公司、江蘇靖博生物技術(shù)有限公司。本文件主要起草人：周家宏、陳飛、呂吉、王光勝、湯萌。茅蒼術(shù)工廠化育苗技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了茅蒼術(shù)工廠化育苗生產(chǎn)的組織培養(yǎng)、煉苗和穴盤苗生產(chǎn)、種苗標(biāo)準(zhǔn)、包裝運(yùn)輸、生產(chǎn)檔案等內(nèi)容。本文件適用于茅蒼術(shù)工廠化育苗技術(shù)與管理的全過程。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB3095環(huán)境空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)《中國藥典》2020年版，第一部藥材和飲片，168蒼術(shù)術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。茅蒼術(shù)Atractylodeslancea(Thunb.)DC.菊科蒼術(shù)屬多年生草本植物，根莖是著名的傳統(tǒng)中藥。主要分布于江蘇、湖北和河南等省份，江蘇茅山地區(qū)及其周邊的江蘇西南部丘陵地區(qū)是茅蒼術(shù)道地藥材的產(chǎn)區(qū)。組培苗tissuecultureplantlets是根據(jù)植物細(xì)胞具有全能性的理論，利用外植體，在無菌和適宜的人工條件下，培育的完整植株。煉苗temperingseeding通過控水、減肥、增光、降溫等措施，使植物無菌組培苗逐漸適應(yīng)外界環(huán)境，從而在生理、形態(tài)、組織上發(fā)生相應(yīng)的變化，使之更適合于自然環(huán)境，從而保證組培苗的種植成功。工廠化育苗industrialseedculture以先進(jìn)的育苗設(shè)施和設(shè)備裝備種苗生產(chǎn)車間，將現(xiàn)代生物技術(shù)、環(huán)境調(diào)控技術(shù)、信息管理技術(shù)貫穿于種苗生產(chǎn)過程，從而實(shí)現(xiàn)種苗的規(guī)?；a(chǎn)。無菌組培苗培養(yǎng)外植體處理選擇健壯、無病蟲害的野生或栽培茅蒼術(shù)植株，外植體進(jìn)行表面滅菌處理：取其葉芽，流水沖洗，在超凈臺中將葉芽依次浸泡于75%乙醇、9%次氯酸鈉溶液、75%乙醇，隨后無菌水沖洗3遍。分化培養(yǎng)將沖洗干凈的葉芽轉(zhuǎn)移至含MS無菌分化培養(yǎng)基的組培瓶中。分化培養(yǎng)基組成為：MS培養(yǎng)基+6-芐氨基嘌呤(2mg/L)+1-萘乙酸(0.3mg/L)+蔗糖(30g/L)+瓊脂(10g/L)的固體培養(yǎng)基，每45天轉(zhuǎn)接1次。組培室培條件為：光照強(qiáng)度3400lm/m2；光照時間12h/天，培養(yǎng)溫度28/18℃。生根培養(yǎng)剪取分化培養(yǎng)基上茅蒼術(shù)組培苗的叢生芽，移入生根培養(yǎng)基中。生根培養(yǎng)基的組成為：1/2MS培養(yǎng)基+1-萘乙酸(0.3mg/L)+蔗糖(30g/L)+瓊脂(10g/L)，培養(yǎng)時間為60天。培養(yǎng)的環(huán)境條件同分化培養(yǎng)條件。煉苗與穴盤苗生產(chǎn)煉苗與穴盤培養(yǎng)將組培瓶在溫室中封口放置2~3天，再瓶口半打開放置2~3天，最后瓶口完全打開放置1~2天。取出組培苗，放入水溫為20℃左右的清水中，漂洗去除根部培養(yǎng)基，移栽至穴盤基質(zhì)中并稍壓緊。宜采用72孔育苗穴盤，穴盤的尺寸為54cm×28cm，穴盤基質(zhì)為滅菌后的蛭石和營養(yǎng)土混合基質(zhì)（體積比1:1）。穴盤中施入適量生根培養(yǎng)液，其組成為：1/2MS+1-萘乙酸(0.3mg/L)，每周灑水2~3次，濕潤即可，培養(yǎng)60天。溫室培養(yǎng)條件為：溫度20℃左右，光照強(qiáng)度為18000lm/m2~20000lm/m2，相對濕度50%~70%。病蟲害防治防治對象主要是蚜蟲，以物理防治為主，采用粘蟲板、殺蟲燈誘殺害蟲。種苗檢測外觀葉片≥15片，株高≥10cm，根長≥5cm，無損傷、無爛根、無病害?；钚猿煞謿庀嗌V檢測種苗化學(xué)成分特征，應(yīng)能檢測出蒼術(shù)酮、茅術(shù)醇、β-桉葉油醇和蒼術(shù)素4種成分。具體檢測方法為：安捷倫7890A氣相色譜儀，色譜柱為HP-5毛細(xì)管柱（30m×0.320mm×0.1μm），檢測器為火焰離子檢測器，并按照以下升溫程序進(jìn)行樣品檢測：70℃保持1min，8℃/min升溫至200℃，20℃/min升溫至300℃保持5min，總運(yùn)行時間27.25min。進(jìn)樣口溫度240℃，檢測器溫度350℃，載氣為高純度氮?dú)?，流?.92266mL/min，柱前壓70KPa，進(jìn)樣量為1μL。變異率取種苗植株葉片，CTAB法提取DNA，PCR擴(kuò)增茅蒼術(shù)特異性分子標(biāo)記基因matK序列（擴(kuò)增引物：trnK-3914F:GCTCCAGAAGATGTTGATCG;matK-1541R:GGGGTTGCTAACTCAACGG），比較其與野生或栽培茅蒼術(shù)的序列差異，判斷變異率。包裝、運(yùn)輸穴盤苗應(yīng)裝在與穴盤尺寸相應(yīng)的紙箱內(nèi)，每層穴盤間應(yīng)用紙托盤隔開；箱體應(yīng)帶有透氣孔，在紙箱上貼上標(biāo)簽，注明品種、數(shù)量、規(guī)格、生產(chǎn)單位和日期；裝車時切勿倒置，運(yùn)輸過程避免日曬、雨淋