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文檔簡介
組培中常見問題及解決辦法——污染問題污染：培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基或培養(yǎng)材料上滋生細(xì)菌、真菌等微生物，使培養(yǎng)材料不能正常生長導(dǎo)致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象。從病原菌方面受到污染表現(xiàn)出兩種狀況：細(xì)菌污染：接種后1-2天可見-----在培養(yǎng)基表面，不離開培養(yǎng)基----一般為接觸性污染；培養(yǎng)基某一位置或培養(yǎng)材料周圍出現(xiàn)黏液狀或渾濁水漬狀痕跡，有時呈現(xiàn)發(fā)酵泡沫狀。真菌污染：接種后3-5天或10天。培養(yǎng)基污染部位發(fā)霉長菌絲，顏色豐富顏色黑、白、黃等，污染時間過長會長孢子，形成孢子層，使污染更嚴(yán)重-------接觸性及非接觸性（真菌孢子竄入培養(yǎng)基）污染來源
植物材料方面：植物表面消毒不徹底或者植物內(nèi)生菌材料帶入培養(yǎng)過程，形成污染
環(huán)境方面：空間環(huán)境接種室，培養(yǎng)室環(huán)境不清潔，或者超凈臺空間有雜菌竄入培養(yǎng)基
操作過程不規(guī)范：接種工具刀鑷子及培養(yǎng)基滅菌不徹底、操作不規(guī)范導(dǎo)致的如叉動作過多，手觸及外植體或過濾紙、蓋子倒扣放置，刀鑷子擺放不正確或不及時滅菌引起交叉感染、或者操作過程越界到有菌范疇。
污染如何防治（1）植物材料：幼材料嫩剛長出來接觸外界環(huán)境時間短的）、溫室材料（通過特殊環(huán)境）、清潔材料、久晴陽光午后（借助強(qiáng)光，紫外線）（2）滅菌嚴(yán)格：難滅菌的外植體多次滅菌、植物材料內(nèi)生菌可以添加抗生素培養(yǎng)基、工具包滅菌徹底（3）合理安排繁殖程序：獲得的無菌培養(yǎng)物一部分保存起來，分批繁殖或者擴(kuò)繁過程中挑出污染復(fù)檢后大規(guī)模生存（一部分繁殖，一部分留起來以后再繁殖，避免一批全部污染造成大量損失）（4）操作規(guī)范：嚴(yán)格按照操作規(guī)范、清潔密閉、殺菌.
1、污染菌類零星分散在培養(yǎng)基中是人為引起的污染。
外植體菌類從材料培養(yǎng)基以上部分長起，且發(fā)生在5天以后，則說明是材料帶的內(nèi)生菌。
若從培養(yǎng)基以下開始長菌，發(fā)生時間較早，且有從里向外的趨勢，則說明是切口引起的污染。2、真菌污染后，如果已形成孢子，則必須經(jīng)高壓滅菌后扔掉。但若是細(xì)菌污染，只要及時發(fā)現(xiàn)，將材料上部未感菌的部分剪下轉(zhuǎn)接，材料仍可以用
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