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T/CVMA168—2024雞傳染性支氣管炎病毒QX型熒光RT-PCR檢測方法Real-timeRT-PCRfordetectionofinfectiousbronchitisvirusgenotypeQX2024-7-4發(fā)布2024-7-4實(shí)施中國獸醫(yī)協(xié)會發(fā)布I疫病預(yù)防控制中心、四川省動物疫病預(yù)防控制中心、北京市動物疫病預(yù)1本文件適用于雞咽喉拭子及氣管、肺臟、腎臟、輸卵管等組織中雞傳染性支氣管炎病毒QX型的核2規(guī)范性引用文件IBV：雞傳染性支氣管炎（InfectiouPBS：磷酸鹽緩沖液（PhosphateBufferSolution）PCR：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseCRNA：核糖核酸（RibonucleicAcid）I熒光染料。當(dāng)它與DNA雙鏈結(jié)合時，發(fā)出熒光，從DNA雙鏈上釋放出來時，熒光信號急劇減弱。2除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，實(shí)驗用水應(yīng)符合高速冷凍離心機(jī)、電子天平、熒光定量PCR儀、-20℃8樣品的采集處理及儲存8.1.1樣品的采集8.1.1.1咽喉拭子8.1.1.2組織樣品8.1.2樣品的處理8.1.2.1咽喉拭子的處理將裝有棉拭子的離心管反復(fù)振蕩，使用高速冷凍離心機(jī)3000r/min離心15min，取上清液待檢。8.1.2.2組織樣品的處理樣品注明采樣點(diǎn)名稱、樣品名稱、編號及樣品數(shù)量置于-80℃超低溫冰箱9RNA的提取39.1若選用Trizol裂解法提取病毒RNA，參照以下步驟進(jìn)行：9.2若使用RNA試劑盒提取病毒RNA，則按試劑盒說明書進(jìn)行操作。11.1實(shí)驗前20min從-20℃低），12.2蓋緊PCR反應(yīng)管蓋，瞬時離心30s。轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。4s，共40個循環(huán)，在每次循環(huán)進(jìn)入退火時收集熒光。檢測結(jié)束后，根據(jù)擴(kuò)增曲線和Ct值判定結(jié)果。熒5引物序列根據(jù)已報道的QX型雞傳染性支氣管炎病毒的S1基因物信息與基因片段大小如表A.1所示。6陽性對照制備方法：人工合成QX型IBVS1pMD19-T-QX，使用無核酸

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