ICS13.020.30

CCSC52

GAIA

廣東省分析測(cè)試協(xié)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/XXXX—XXXX

職業(yè)暴露人群血清中多環(huán)芳烴的測(cè)定

高效液相色譜法

DeterminationofPolycyclicAromaticHydrocarbonsintheSerumSamplesof

OccupationallyExposedPopulationbyHighPerformanceLiquidChromatography

（征求意見稿）

（本草案完成時(shí)間：2023/10/30）

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

廣東省分析測(cè)試協(xié)會(huì)發(fā)布

T/XXXX—XXXX

職業(yè)暴露人群血清中多環(huán)芳烴的測(cè)定

高效液相色譜法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了職業(yè)暴露人群血清中15種多環(huán)芳烴的高效液相色譜測(cè)定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于血清中萘、苊、芴、菲、蒽、熒蒽、芘、苯并[a]蒽、屈、苯并[b]熒蒽、苯并[k]熒

蒽、苯并[a]芘、二苯并[a,h]蒽、苯并[g,h,i]苝、茚并[1,2,3-cd]芘15種多環(huán)芳烴的檢測(cè)，可用于內(nèi)

暴露水平監(jiān)測(cè)及職業(yè)暴露人群血清中多環(huán)芳烴檢測(cè)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T16631-2008高效液相色譜法通則

GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4原理

血清樣品經(jīng)乙腈萃取冷凍沉淀蛋白，高速離心后取上清液，用高效液相色譜串聯(lián)熒光檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)

定，外標(biāo)法定量。

5試劑與材料

5.1試劑

5.1.1水：GB/T6682所規(guī)定的一級(jí)水。

5.1.2乙腈（CH3CN）：質(zhì)譜純。

5.2標(biāo)準(zhǔn)品

多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)溶液（含萘、苊、芴、菲、蒽、熒蒽、芘、苯并[a]蒽、屈、苯并[b]熒蒽、苯并[k]

熒蒽、苯并[a]芘、二苯并[a,h]蒽、苯并[g,h,i]苝、茚并[1,2,3-cd]芘）：濃度1000μg/mL，或經(jīng)國

家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)溶液，-18℃下避光保存。標(biāo)準(zhǔn)品信息參見附錄A。

警告——多環(huán)芳烴是已知致癌、致畸、致突變的物質(zhì)，并且致癌性隨著苯環(huán)數(shù)的增加而增加。進(jìn)行

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制等操作時(shí)應(yīng)特別注意安全防護(hù)，應(yīng)在通風(fēng)柜中操作，盡量減少暴露。

5.3標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

5.3.1多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)中間液（10.0μg/mL）：吸取多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000μg/mL）0.10mL于10mL

容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混勻，將溶液轉(zhuǎn)移至棕色玻璃瓶中，-18℃下避光保存，保存期1個(gè)月。

5.3.2多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)使用液（100ng/mL）：吸取多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)中間液（10.0μg/mL）0.10mL于10mL

容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混勻，將溶液轉(zhuǎn)移至棕色玻璃瓶中，-18℃下避光保存，保存期7天。

5.3.3多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：分別吸取多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)使用液（100ng/mL）0.10mL、0.25mL、0.50

mL、1.0mL、1.5mL、2.5mL，用乙腈定容至10mL，得到質(zhì)量濃度為1.0ng/mL、2.5ng/mL、5.0ng/mL、

3

T/XXXX—XXXX

10.0ng/mL、15.0ng/mL、25.0ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，臨用現(xiàn)配。

實(shí)驗(yàn)所需的玻璃儀器均需在450℃煅燒6h，以消除背景干擾。

6儀器和設(shè)備

6.1高效液相色譜儀：配熒光檢測(cè)器。

6.2渦旋混合器：轉(zhuǎn)速不低于3000r/min。

6.3低溫離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于10000r/min。

6.4移液器：量程10μL～100μL和100μL～1000μL。

7試樣的制備與保存

7.1試樣的制備

取適量新鮮或解凍的空白或供試血清，混合均勻。

a)取混勻后的供試樣品，作為供試試樣；

b)取混勻后的空白樣品，作為空白試樣。

在處理樣本時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵從對(duì)潛在生物傳染性樣本處理的相關(guān)規(guī)定，使用時(shí)遵循生物安全規(guī)則，并

根據(jù)規(guī)定對(duì)廢物進(jìn)行處理。

7.2樣本用量

一般用量為0.1mL～1.0mL，為保證取樣的準(zhǔn)確性和操作可行性，最小取樣量不宜低于0.1mL。

7.3試料的保存

-70℃以下保存，不可反復(fù)凍融。

8分析步驟

8.1提取

血清樣品室溫解凍后，用移液槍準(zhǔn)確移取試樣100μL置于1.5mL離心管中，加入300μL乙腈，渦

旋2min，-20℃冷凍2h沉淀蛋白，10000r/min低溫離心5min，取上清液，供高效液相色譜測(cè)定。

8.2測(cè)定

8.2.1液相色譜參考條件

a)色譜柱：PAHC18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），或相當(dāng)者。

b)檢測(cè)器：熒光檢測(cè)器。

c)流動(dòng)相：乙腈和水，梯度洗脫條件見表1。

d)流速：1.2mL/min。

e)檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)見表2。

f)柱溫：27℃。

g)進(jìn)樣量：20μL。

表1液相色譜梯度洗脫條件

時(shí)間（min）水（%）乙腈（%）

040.060.0

25.000.0100.0

38.000.0100.0

40.0040.060.0

50.0040.060.0

4

T/XXXX—XXXX

表2多環(huán)芳烴的激發(fā)波長(zhǎng)、發(fā)射波長(zhǎng)及切換色譜時(shí)間檢測(cè)參數(shù)

時(shí)間（min）激發(fā)波長(zhǎng)（nm）發(fā)射波長(zhǎng)（nm）

0.0280324

9.5254350

12.0254400

14.0280450

16.0305378

19.0275385

23.8275363

26.0290430

29.0290410

33.0290500

8.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入高效液相色譜儀中，測(cè)得相應(yīng)的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的質(zhì)量濃度為橫

坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖參見附錄B。

8.2.3試樣溶液的測(cè)定

將試樣待測(cè)液注入高效液相色譜儀中，以保留時(shí)間定性，測(cè)得相應(yīng)的峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試

樣待測(cè)液中多環(huán)芳烴的質(zhì)量濃度。如果試樣待測(cè)液中被測(cè)物質(zhì)的響應(yīng)值超出儀器檢測(cè)的線性范圍，可適

當(dāng)稀釋后測(cè)定。

8.3空白試驗(yàn)

除不加試樣外，均按照上述測(cè)定步驟進(jìn)行。

9結(jié)果計(jì)算和表述

試料中多環(huán)芳烴的含量Xi按式（1）計(jì)算。

·············································································(1)

式中：

Xi—試樣中多環(huán)芳烴i的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；

Ci—標(biāo)準(zhǔn)曲線求得試樣中多環(huán)芳烴i的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；

V—試樣溶液定容體積，單位為微升（μL）；

Vi—試樣溶液取樣體積，單位為微升（μL）；

注：計(jì)算結(jié)果需扣除空白值。測(cè)定結(jié)果用兩次平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。

10方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度

10.1靈敏度

本方法苊、菲、蒽、苯并[a]蒽、屈、苯并[b]熒蒽、苯并[k]熒蒽、苯并[a]芘、苯并[g,h,i]苝、

茚并[1,2,3-cd]芘檢出限為0.20ng/mL，定量限為0.50ng/mL。萘、芴、熒蒽、芘、二苯并[a,h]蒽檢

出限為0.30ng/mL，定量限為1.00ng/mL。

10.2準(zhǔn)確度

本方法中多環(huán)芳烴在1.0ng/mL～25ng/mL的添加濃度水平時(shí)，回收率為60%～120%。

10.3精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的20%。

5

T/XXXX—XXXX

A

A

附錄A

（資料性）

15種多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)品信息

表A.115種多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)品信息

序號(hào)名稱英文名稱分子式CAS號(hào)

1萘NaphthaleneC10H891-20-3

2苊AcenaphtheneC12H1083-32-9

3芴FluoreneC13H1086-73-7

4菲PhenanthreneC14H1085-01-8

5蒽AnthraceneC14H10120-12-7

6熒蒽FluorantheneC16H10206-44-0

7芘PyreneC16H10129-00-0

8屈ChryseneC18H12218-01-9

9苯并[ａ]蒽Benz[a]anthraceneC18H1256-55-3

10苯并[b]熒蒽Benzo[b]fluorantheneC20H12205-99-2

11苯并[k]熒蒽Benzo[k]fluorantheneC20H12207-08-9

12苯并[a]芘Benzo[a]pyreneC20H1250-32-8

13二苯并[a，h]蒽Dibenz[a,h]anthraceneC22H1453-70-3

14苯并[g,h,i]苝Benzo[g,h,i]peryleneC22H12191-24-2

15茚并[1,2,3-cd]芘Indeno[1,2,3-cd]pyreneC22H12193-39-5

6

T/XXXX—XXXX

B

B

附錄B

（資料性）

多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖

多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)溶液（10.0ng/mL）液相色譜圖見B.1。

160

140

12

120

311

100

13

805

吸光度60210

1

40789

414

6