3/31.2基因工程的基本操作程序【學(xué)習(xí)目標(biāo)】1.通過觀察圖片，閱讀文本，能夠簡述基礎(chǔ)理論研究和技術(shù)進(jìn)步催化了基因工程；2.通過查閱文獻(xiàn)、師生交流，能夠簡述基因工程的原理和基本步驟?！緦W(xué)習(xí)重點】基因工程基本操作程序的四個步驟?！緦W(xué)習(xí)難點】1.從基因文庫中獲取目的基因。2.利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因?！局R要點梳理】一、基因工程的基本操作程序1.目的基因的獲取。2.基因表達(dá)載體的構(gòu)建。3.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞。4.目的基因的檢測與鑒定。二、目的基因的獲取1.目的基因：主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因，也可以是一些具有調(diào)控作用的因子。2.基因文庫（1）基因文庫的含義：將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導(dǎo)入受體菌的群體中儲存，各個受體菌分別含有這種生物的不同的基因，稱為基因文庫。2.3.獲取目的基因的方法（1）從基因文庫中獲取目的基因（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因①PCR的含義：是一項在生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。②過程：目的基因受熱形成單鏈，與引物結(jié)合，在DNA聚合酶的作用下延伸形成DNA。③方式：指數(shù)擴(kuò)增＝2n（n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)）。（3）人工合成法：若基因較小，核苷酸序列已知，可以人工合成。三、基因表達(dá)載體的構(gòu)建1.組成2.功能：（1）使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代；（2）使目的基因表達(dá)和發(fā)揮作用。四、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1.轉(zhuǎn)化：目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。2.導(dǎo)入植物細(xì)胞（1）方法：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法。（2）農(nóng)桿菌特點①易感染雙子葉植物和祼子植物。②Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體DNA上。3.導(dǎo)入動物細(xì)胞（1）常用方法：顯微注射技術(shù)。（2）常用受體細(xì)胞：受精卵。4.導(dǎo)入微生物細(xì)胞（1）原核生物特點：繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對較少等。（2）對受體細(xì)胞的常用處理方法：用Ca2+處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)（這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞）。五、目的基因的檢測與鑒定1.2.個體生物學(xué)水平上的檢測與鑒定：如一個