《中藥材中黃曲霉毒素的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》編制說明一、編制背景黃曲霉毒素具有強烈的毒性和致癌性，對人體健康的危害性極大。近年來中藥材黃曲霉毒素污染的現(xiàn)象層出不窮，從中藥材種植/養(yǎng)殖、采收到加工、儲藏、運輸?shù)拳h(huán)節(jié)，若溫度、濕度等環(huán)境條件控制不當，極易產(chǎn)生黃曲霉毒素。世界衛(wèi)生組織規(guī)定食品黃曲霉毒素B1最大限量為15.00μg/kg，嬰兒相關食品不能檢出黃曲霉毒素B1；歐盟規(guī)定了其在水果中的限量標準?！吨袊幍洹芬?guī)定柏子仁等藥材及飲片黃曲霉毒素B1不得高于5μg/kg、黃曲霉毒素總量不得高于10μg/kg。目前國內(nèi)外尚無中藥材中黃曲霉毒素測定相關的標準。本標準規(guī)定中藥材中黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2的檢測方法的適用范圍、原理、試劑、材料、儀器設備、試樣處理、測定、計算與結(jié)果表述。本標準適用于柏子仁、決明子、陳皮、蓮子、薏苡仁、地龍、螟蚣、馬錢子、蟬蛻、松香、當歸等動植物類中藥材及飲片中黃曲霉素B1、B2、G1、G2的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定。本標準規(guī)定的中藥材中黃曲霉毒素檢測方法具有快速靈敏準確簡便的特點，檢測成本低，定量限（0.1μg/kg）滿足國家標準限量定量檢驗的要求，應用于中藥材收購、倉儲、生產(chǎn)、流通、質(zhì)量控制、市場監(jiān)督等領域，能夠通過快速檢測發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素污染，對于保障中藥材的質(zhì)量安全，保護人體健康，具有重要意義。為了幫助中藥材收購、倉儲、生產(chǎn)、流通、質(zhì)量控制、市場監(jiān)督等領域，能夠通過快速檢測發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素污染，快速靈敏準確簡便地檢測中藥材中黃曲霉毒素的含量，降低檢測成本，滿足國家標準限量定量檢驗的要求，保障中藥材的質(zhì)量安全，保護人體健康。南京江北新區(qū)生物醫(yī)藥公共服務平臺收集相關資料，進行實際調(diào)研，借鑒《中國藥典》和SN/T4604-2016《進出口中藥材中真菌毒素的測定》等國內(nèi)外標準對中藥材中黃曲霉毒素含量測定的要求，聯(lián)合江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院、吉林省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗院等各相關單位研究制定該團體標準。二、任務來源根據(jù)中國食品藥品企業(yè)質(zhì)量安全促進會2025年1月發(fā)布的關于《中成藥中大米源性成分定性檢測方法PCR法》等兩項團體標準立項的公告，由南京江北新區(qū)生物醫(yī)藥公共服務平臺有限公司作為團體標準《中藥材中黃曲霉毒素含量測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》的牽頭起草單位，負責組織該團體標準的編制工作。三、標準的編制（一）標準主要起草單位、起草人及其所做的工作1.項目負責人呂興祥：主要負責標準總體策劃和協(xié)調(diào)；龔玉霞：負責標準的技術(shù)內(nèi)容統(tǒng)籌；徐文君、李桂杰負責標準的查新、資料和實際調(diào)研，標準文本的起草和修改及標準的送審及報批；項偉、孟鵬、盧清瑤、徐曉嵐等負責對標準文本提出補充和修改意見。2.項目主要起草人：本標準由呂興祥、龔玉霞、徐文君、李豐勇、李桂杰、楊曉莉、項偉、孟鵬、張嬋、盧清瑤、徐曉嵐、韓峰、李義梅、席海明、徐東等專家共同起草。3.標準主要起草單位本標準由南京江北新區(qū)生物醫(yī)藥公共服務平臺有限公司、江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院、吉林省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗院、青島市華測檢測技術(shù)有限公司、內(nèi)蒙古自治區(qū)藥品檢驗研究院、延安市藥品檢驗所、淄博高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)生物醫(yī)藥研究院（山東大學淄博生物醫(yī)藥研究院）等單位共同起草。4.標準起草組成員主要對標準涉及的相關技術(shù)問題，通過現(xiàn)場調(diào)研、問卷咨詢、網(wǎng)絡檢索等工作，對國外和國內(nèi)標準相關區(qū)情況進行了深入的研究。同時召開研討會議對關鍵性的問題征集行業(yè)專家的意見和建議。（二）標準編制的原則和主要工作過程1.編制原則（1）科學性原則本標準按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定進行編寫和表述，力求做到“統(tǒng)一性、協(xié)調(diào)性、適用性、一致性、規(guī)范性”。（2）先進性原則本標準為新制定標準，標準內(nèi)容符合檢驗檢測行業(yè)現(xiàn)行相關法律、法規(guī)及標準要求，符合國內(nèi)企事業(yè)單位和檢測機構(gòu)的實際情況，兼顧方法的適用性和可操作性。既能適應實際生產(chǎn)和檢測需要，又能保證方法的推廣應用。填補了中藥材中黃曲霉毒素含量測定的行業(yè)空白。（3）適用性原則確定了標準的適用范圍，本標準適用于柏子仁、決明子、陳皮、蓮子、薏苡仁、地龍、螟蚣、馬錢子、蟬蛻、松香、當歸等動植物類中藥材及飲片中黃曲霉素B1、B2、G1、G2的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定。2.主要工作過程為了確保標準內(nèi)容的準確性、實用性，保證標準內(nèi)容科學、合理、協(xié)調(diào)、可行，南京江北新區(qū)生物醫(yī)藥公共服務平臺有限公司、江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院、吉林省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗院組成制定小組，針對中藥材中黃曲霉毒素含量測定國內(nèi)外標準制修訂情況進行了調(diào)研。2024年9-11月，進行資料和實際調(diào)研，選定標準方向和基本內(nèi)容框架，并編制標準草稿；2024年12月，提出立項申請；2025年1月，本標準項目通過立項；2025年1月，編制組形成對外征求意見稿；2025年1-2月，擬對外公開征求意見，通過中國食品藥品企業(yè)質(zhì)量安全促進會網(wǎng)站及公眾號、一對一郵件等多種方式進行。（三）標準的主要內(nèi)容及論據(jù)本標準根據(jù)新版GB/T1.1的要求編制，對多項標準文件、研究成果進行梳理，并依據(jù)中藥材中需要檢測的黃曲霉毒素情況，結(jié)合實驗情況，確定了本方法。標準制定的主要內(nèi)容及其依據(jù)簡要介紹如下：1.范圍本標準規(guī)定了中黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2（以下簡稱AFTB1、AFTB2、AFTG1和AFTG2）的測定方法。本標準適用于柏子仁、決明子、陳皮、蓮子、薏苡仁、地龍、螟蚣、馬錢子、蟬蛻、松香、當歸等動植物類中藥材及飲片中AFTB1、AFTB2、AFTG1和AFTG2的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定。2.規(guī)范性引用文件GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和實驗方法3.術(shù)語和定義GB/T1.1-2009《標準化工作導則第1部分:標準的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則》和GB/T20001.4-2009《標準編寫規(guī)則第4部分:化學分析方法》界定的術(shù)語和定義適用于本標準。4.標準主要技術(shù)內(nèi)容（1）原理用甲醇-水溶液提取中藥材試樣中的AFTB1、AFTB2、AFTG1和AFTG2，固相凈化柱法或免疫磁珠法凈化，凈化液濃縮、定容和過濾后經(jīng)液相色譜分離，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測，同位素內(nèi)標法定量。（2）樣品制備的要求中藥材樣品顆粒的大小與樣品的均勻性與黃曲霉毒素的提取效率有關，當樣品細度不足20目時，黃曲霉毒素的提取效率較低，因此本方法要求取出具有代表性的樣品適量，用高速粉碎機粉碎至全部過篩網(wǎng)，使其粒徑小于850μm，充分混合均勻，儲存于潔凈的樣品袋中密封保存，供檢測用。（3）前處理方法的選擇由于中藥材的基質(zhì)形式、成分復雜，其中黃曲霉毒素含量較低且受基質(zhì)效應影響較大，無法直接進行中藥材中黃曲霉毒素的檢測，必須先對試樣進行前處理。本方法采用免疫磁珠法凈化和固相凈化柱法凈化，融合和兩者凈化優(yōu)勢，提高了凈化效率。試劑用量少、效率高、黃曲霉毒素損失少。因此，本文件對不同類型的中藥材給出了免疫磁珠法凈化和固相凈化柱法兩種前處理方法。（4）線性范圍和檢出限按測試方法所述實驗步驟，分析系列濃度梯度的黃曲霉毒素標準溶液，利用響應強度對分析物的質(zhì)量濃度（μg/kg）進行線性回歸，黃曲霉毒素均呈現(xiàn)良好的線性關系。以10倍信噪比(S/N=10)確定方法定量限。結(jié)果表明，黃曲霉毒素濃度與響應值有較好的線性關系，線性相關系數(shù)在0.9921～0.9938之間。AFTB1、AFTB2、AFTG1和AFTG2的檢出限為0.04μg/kg，AFTB1、AFTB2、AFTG1和AFTG2定量限為0.1μg/kg。本方法測定低限較低，可以很好地滿足日常測試工作的需求。（5）實驗室內(nèi)回收率與精密度分別準確稱取各類陰性試樣，分別進行加標試驗，利用本方法測定的回收率和精密度結(jié)果。結(jié)果表明，黃曲霉毒素在不同加標水平下的加標回收滿足要求。四、與有關的現(xiàn)行法律、法規(guī)和強制性國家標準的關系本標準的內(nèi)容與現(xiàn)行法律、法規(guī)和強制性國家標準協(xié)調(diào)一致。五