Q/LB.□XXXXX-XXXXDBXX/TXXXX—2025目次TOC\o"1-1"\h前言 II1范圍 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14方法原理 15試劑與材料 16儀器與設(shè)備 27樣品 28測定步驟 29結(jié)果和計算 510檢測方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度 5附錄A（資料性）標(biāo)準(zhǔn)溶液特征離子質(zhì)量色譜圖 6前言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由湖南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。本文件由湖南省農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本文件起草單位：湖南省水產(chǎn)科學(xué)研究所、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部漁業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗測試中心（長沙）、澧縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心。本文件主要起草人：李小玲、索紋紋、萬譯文、楊霄、尹升福、雷琴、崔先鋒、曾春芳、黃華偉、劉伶俐、陳湘藝、何詠、洪波、謝玉昆水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境(水體、底泥)中丁香酚的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法范圍本文件描述了水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境（水體、底泥）中丁香酚的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本文件適用于水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境（水體、底泥）中丁香酚的測定。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB17378.5海洋監(jiān)測規(guī)范第5部分：沉積物分析SC/T9102.3漁業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測規(guī)范第3部分：淡水術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。方法原理水試樣中的丁香酚經(jīng)固相萃取柱富集和凈化；底泥試樣中的丁香酚經(jīng)正己烷提取，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，固相萃取柱富集和凈化。凈化后的溶液供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，內(nèi)標(biāo)法定量。試劑與材料試劑水：GB/T6682規(guī)定的一級水。甲醇（CH3OH）：色譜純。正己烷（C6H14）：色譜純。溶液配制40%甲醇水溶液：取甲醇40mL，用水稀釋至100mL。50%甲醇水溶液：取甲醇50mL，用水稀釋至100mL。標(biāo)準(zhǔn)品丁香酚（Eugenol，C10H12O2，CAS號：97-53-0），純度大于等于99.0%。氘代丁香酚（Eugenol-D3，C10H9D3O2，CAS號：1335401-17-6），純度大于等于97.0%。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)儲備液（100μg/mL）：取丁香酚標(biāo)準(zhǔn)品約10mg，精密稱定，用甲醇溶解并定容至100mL棕色容量瓶，配制成濃度為100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。-18℃以下避光保存，有效期3個月。內(nèi)標(biāo)儲備液（100μg/mL）：取氘代丁香酚標(biāo)準(zhǔn)品約10mg，精密稱定，用甲醇溶解并定容至100mL棕色容量瓶，配制成濃度為100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。-18℃以下避光保存，有效期3個月。標(biāo)準(zhǔn)工作液（1.0μg/mL）：準(zhǔn)確量取標(biāo)準(zhǔn)儲備液1mL，于100mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制成濃度為1.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。4℃避光保存，有效期1個月。內(nèi)標(biāo)工作液（1.0μg/mL）：準(zhǔn)確量取內(nèi)標(biāo)儲備液1mL，于100mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制成濃度為1.0μg/mL的內(nèi)標(biāo)工作液。4℃避光保存，有效期1個月。材料HLB（二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物）固相萃取柱：200mg/6mL，或相當(dāng)者。玻璃纖維濾膜：0.45μm。尼龍濾膜：0.22μm。儀器與設(shè)備液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源。分析天平：感量0.01g和0.00001g。冷凍干燥機(jī)。渦旋混合器。高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于8000r/min。超聲波清洗器。固相萃取裝置。氮吹儀。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。樣品樣品采集水樣和底泥樣品按照SC/T9102.3規(guī)定的方法進(jìn)行采集。試樣制備水樣采樣量應(yīng)不少于1L，經(jīng)0.45μm玻璃纖維濾膜過濾，置于棕色玻璃瓶中，0℃～4℃避光保存，一周內(nèi)完成分析。底泥樣品采樣量應(yīng)不少于500g，于-20℃預(yù)冷凍24h，經(jīng)冷凍干燥機(jī)（-50℃，真空度小于20Pa，冷凍干燥10h）凍干，剔除石塊和植物體等異物，用研缽研磨后過100目網(wǎng)篩，置于棕色玻璃瓶中，0℃～4℃避光保存，一個月內(nèi)完成分析?？瞻自嚇又苽溥x取不含丁香酚的同類樣品，按照7.2進(jìn)行制備。測定步驟提取水移取50mL試樣（準(zhǔn)確至0.1mL），加入50μL內(nèi)標(biāo)工作液，混合均勻。無需提取，備用。底泥稱取2g（準(zhǔn)確至±0.02g）試樣于50mL離心管中，加入2mL水潤濕，加入50μL內(nèi)標(biāo)工作液，渦旋混勻30s，加入5mL正己烷渦旋混合1min，超聲提取10min，8000r/min離心5min，取上清液并轉(zhuǎn)移至50mL茄形瓶中，殘渣用5mL正己烷重復(fù)提取一次，合并上清液，于35℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用3mL40%甲醇水溶液復(fù)溶，備用。凈化HLB固相萃取柱依次用5mL甲醇、5mL水活化。取備用液過柱，控制流速不超過1.5mL/min。待備用液全部通過小柱后，用3mL40%甲醇水溶液淋洗，減壓抽干，用4mL甲醇洗脫，收集洗脫液，于35℃氮氣吹至少于0.5mL，用50%甲醇水溶液定容至1mL，過0.22μm尼龍濾膜，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。底泥含水率測定按照GB17378.5規(guī)定的方法進(jìn)行測定。標(biāo)準(zhǔn)曲線精密量取標(biāo)準(zhǔn)工作液、內(nèi)標(biāo)工作液適量，用50%甲醇水溶液配制成丁香酚濃度為5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L和200μg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液，其中內(nèi)標(biāo)溶液的濃度均為50μg/L，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。以待測物和內(nèi)標(biāo)物特征離子質(zhì)量色譜峰峰面積比值為縱坐標(biāo)、對應(yīng)的待測物標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程和相關(guān)系數(shù)。測定液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：色譜柱：C18(100mm×2.1mm，粒徑2.6μm)，或相當(dāng)者；流動相：A為甲醇，B為水，梯度洗脫條件見表1；進(jìn)樣量：5μL；流速：0.3mL/min；柱溫：35℃。流動相梯度洗脫條件時間minA%B%050501.050505.09557.0955表1流動相梯度洗脫條件（續(xù)）時間minA%B%7.150509.05050質(zhì)譜參考條件質(zhì)譜參考條件如下：離子源：電噴霧離子源；掃描方式：負(fù)離子掃描；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）噴霧電壓：-4.5kV；離子源溫度：550℃；氣簾氣壓力：0.24MPa；碰撞氣壓力：0.06MPa；噴霧氣壓力：0.34MPa；輔助加熱氣壓力：0.34MPa；多反應(yīng)監(jiān)測母離子、子離子、去簇電壓和碰撞能量見表2。多反應(yīng)監(jiān)測母離子、子離子、去簇電壓和碰撞能量化合物名稱母離子m/z子離子m/z去簇電壓V碰撞能量eV丁香酚163.0148.0a-60-17121.0-32氘代丁香酚166.1147.9-70-18a為定量離子。定性測定在相同測試條件下，試樣溶液中待測物的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測物的保留時間一致，偏差在±2.5%以內(nèi)，且試樣溶液中待測物定性離子的相對豐度與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液對應(yīng)的定性離子的相對豐度一致。其允許偏差應(yīng)符合表3的要求。定性確證時相對離子豐度的允許偏差單位為百分號相對離子豐度＞50＞20～50＞10～20≤10允許偏差±20±25±30±50定量測定按8.5.1和8.5.2設(shè)定儀器條件，取標(biāo)準(zhǔn)工作溶液、試樣溶液、空白試樣溶液等體積進(jìn)樣測定，內(nèi)標(biāo)法定量。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和試樣溶液中目標(biāo)物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測線性范圍內(nèi)。丁香酚標(biāo)準(zhǔn)溶液特征離子質(zhì)量色譜圖參見附錄A。空白實驗按照8.1～8.5相同的測定步驟進(jìn)行空白試樣（見7.3）的測定。結(jié)果和計算水樣中丁香酚含量水樣中丁香酚含量按式（1）計算。計算結(jié)果應(yīng)扣除空白值，保留2位有效數(shù)字。 X1=Ci×VV式中：X1——試樣中待測物的含量，單位為微克每升（μg/L）；Ci——從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的待測物溶液濃度，單位為微克每升（μg/L）；V——試樣最終定容體積，單位為毫升（mL）；V0——試樣體積，單位為毫升（mL）。底泥中丁香酚含量底泥中丁香酚含量按式（2）計算。計算結(jié)果應(yīng)扣除空白值，保留2位有效數(shù)字。 X2=Ci×Vm×(1?w)式中：X2——試樣中待測物的含量，單位為微克每千克（μg/kg）；Ci——從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的待測物溶液濃度，單位為微克每升（μg/L）；V——試樣最終定容體積，單位為毫升（mL）；m試樣質(zhì)量，單位為克（g）；w試樣含水率，單位為質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）。檢測方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度靈敏度本方法在水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境水中丁香酚的檢出限為0.1μg/L，定量限為0.2μg/L；在水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境底泥中丁香酚的檢出限為2μg/kg，定量限為5μg/kg。準(zhǔn)確度本方法水在0.2μg/L～2μg/L添加