ICS13.020.01CCSD00/09GRM程TechnicalSpecificationforApplicationofDarkSeptateEndophytesExtracellularIT/GRM102—2024前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 3.1深色有隔內(nèi)生真菌darkseptateendophytes 3.2胞外代謝物extracellularmetabolite 3.3植物生長(zhǎng)刺激素plantbiostimulants 3.4生態(tài)修復(fù)ecologicalremediation 3.5水劑aqueousagent 3.6粉劑powder 4技術(shù)要求 24.1產(chǎn)品規(guī)格 24.2技術(shù)原理 24.3施用方式 24.4施用要求 24.5生物性能 35檢驗(yàn)方法 35.1植物根系發(fā)育 35.2植物光合作用 35.3植物生長(zhǎng)能力 35.4微生物檢測(cè) 35.5土壤養(yǎng)分檢測(cè) 36安全與環(huán)保要求 37包裝、標(biāo)識(shí)、運(yùn)輸和貯存 37.1包裝 47.2標(biāo)識(shí) 47.3運(yùn)輸 47.4貯存 4T/GRM102—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。為使我國(guó)礦區(qū)生態(tài)修復(fù)菌劑的應(yīng)用技術(shù)走上科學(xué)化，規(guī)范化軌道，指導(dǎo)礦區(qū)微生物復(fù)墾工程建設(shè)，促進(jìn)礦區(qū)生態(tài)環(huán)境的恢復(fù)與可持續(xù)發(fā)展，特制定《深色有隔內(nèi)生真菌胞外代謝物應(yīng)用技術(shù)規(guī)程》標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)主要規(guī)定了深色有隔內(nèi)生真菌胞外代謝物的范圍、術(shù)語和定義、技術(shù)要求、檢驗(yàn)方法、安全與環(huán)保要求和包裝、標(biāo)識(shí)、運(yùn)輸和貯存。本文件由中關(guān)村綠色礦山產(chǎn)業(yè)聯(lián)盟提出并歸口。本文件起草單位：中國(guó)礦業(yè)大學(xué)（北京）礦山生態(tài)修復(fù)研究院、西安科技大學(xué)西部礦山生態(tài)環(huán)境修復(fù)研究院、天山實(shí)驗(yàn)室、北京合生元生態(tài)環(huán)境工程技術(shù)有限公司。本文件主要起草人：畢銀麗、彭蘇萍、王淑惠、解琳琳、張延旭、王坤、全文智、肖禮、武超、柯增鳴、白雪蕊1T/GRM102—2024深色有隔內(nèi)生真菌胞外代謝物應(yīng)用技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了由深色有隔內(nèi)生胞外代謝物的范圍、術(shù)語和定義、技術(shù)要求、檢驗(yàn)方法、安全與環(huán)保要求和包裝、標(biāo)識(shí)、運(yùn)輸和貯存。本標(biāo)準(zhǔn)適用于礦山廢棄地改良、礦區(qū)復(fù)墾與生態(tài)恢復(fù)、低產(chǎn)田提質(zhì)、鹽堿地改良及其他土壤改良用途。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/Z41358-2022土壤健康綜合表征的生物測(cè)試方法GB/Z41359-2022土壤質(zhì)量呼吸曲線法測(cè)定土壤微生物區(qū)系的豐度和活性GB/T42363-2023土壤質(zhì)量土壤理化分析樣品的預(yù)處理GB/T42487-2023土壤質(zhì)量土壤硝態(tài)氮、亞硝態(tài)氮和銨態(tài)氮的測(cè)定氯化鉀溶液浸提流動(dòng)分析法GB/T42490-2023土壤質(zhì)量土壤與生物樣品中有機(jī)碳含量與碳同位素比值、全氮含量與氮同位素比值的測(cè)定穩(wěn)定同位素比值質(zhì)譜法GB36600-2018土壤環(huán)境質(zhì)量建設(shè)用地土壤污染風(fēng)險(xiǎn)管控標(biāo)準(zhǔn)（試行）GB/T40226-2021環(huán)境微生物宏基因組檢測(cè)高通量測(cè)序法GB/T41727-2022農(nóng)用微生物菌劑功能評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)程GB/T41728-2022微生物肥料質(zhì)量安全評(píng)價(jià)通用準(zhǔn)則3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1深色有隔內(nèi)生真菌darkseptateendophytes一類定殖于宿主植物根表皮、皮層，甚至維管束組織細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞間隙，形成深色有隔菌絲和微菌核特征結(jié)構(gòu)的內(nèi)生真菌。3.2胞外代謝物extracellularmetabolite活菌在代謝過程中產(chǎn)生并分泌到細(xì)胞外的低分子量物質(zhì)。3.3植物生長(zhǎng)刺激素plantbiostimulants一種生物來源的配制產(chǎn)品，它可以提高植物生產(chǎn)力，這是由于成分復(fù)合物的新穎或新興特性，而不是作為已知必需植物營(yíng)養(yǎng)素存在的唯一結(jié)果、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑或植物保護(hù)化合物。3.4生態(tài)修復(fù)ecologicalremediation在生態(tài)學(xué)原理指導(dǎo)下，以生物修復(fù)為基礎(chǔ)，結(jié)合各種物理修復(fù)、化學(xué)修復(fù)以及工程技術(shù)措施，通過優(yōu)化組合，使之達(dá)到最佳效果和最低耗費(fèi)的一種綜合的修復(fù)方法。3.5水劑aqueousagent深色有隔內(nèi)生真菌胞外代謝物與培養(yǎng)液或水均勻混合在一起制成的一種劑型。3.6粉劑powder2T/GRM102—2024深色有隔內(nèi)生真菌胞外代謝物凍干后粉碎制成的一種劑型。4技術(shù)要求4.1產(chǎn)品規(guī)格該產(chǎn)品來自于深色有隔內(nèi)生真菌生長(zhǎng)指數(shù)期的胞外代謝物，濃度為10-20g/L，pH值為4.5-7.0，粘度為100-500cp，生長(zhǎng)素含量10-25mg/L。4.2技術(shù)原理深色有隔內(nèi)生真菌胞外代謝物以氨基酸，肽和類似物為主，還包括有機(jī)氧化合物、脂質(zhì)和類脂質(zhì)分子、有機(jī)雜環(huán)化合物、苯丙烷和聚酮化合物等11種化合物。深色有隔內(nèi)生真菌產(chǎn)生具有生物活性的代謝物有利于提高宿主植物的營(yíng)養(yǎng)有效性。深色有隔內(nèi)生真菌胞外代謝物作為植物生物刺激素，改善植物生理代謝過程和根系形態(tài)，增強(qiáng)植物養(yǎng)分吸收和養(yǎng)分利用率，促進(jìn)植物生長(zhǎng)。深色有隔內(nèi)生真菌胞外代謝物主要影響植物碳水化合物代謝，脂類代謝，還有包括苯丙素類合成、玉米素合成等次級(jí)代謝途徑。在礦區(qū)生態(tài)修復(fù)過程中，利用深色有隔內(nèi)生真菌胞外代謝物促進(jìn)植物生長(zhǎng)發(fā)育具有很大開發(fā)潛力。4.3施用方式4.3.1粉劑拌種將代謝物粉劑和種子充分混勻，必要時(shí)將種子噴濕后混合，即拌即播，拌種后的種子當(dāng)天用完，適用于條播、撒播或大面積機(jī)播。4.3.2水劑拌種將胞外代謝物溶液和種子充分混勻，至種子相互間不粘連為宜，拌種后的種子當(dāng)天用完，適用于條播、撒播或大面積機(jī)播。4.3.3灌根法將胞外代謝物溶液或粉劑直接施于植物根部，促進(jìn)植物根系發(fā)育。這種方法適用于低產(chǎn)田提質(zhì)、灌溉條件較好的礦區(qū)。4.3.4葉面涂抹法將胞外代謝物用刷子，均勻涂抹在植物葉片表面，宜少量多次涂抹，有利于促進(jìn)養(yǎng)分快速吸收。4.3.5葉面噴施法噴施胞外聚合霧滴宜細(xì)小、噴施應(yīng)均勻，,噴灑在植物生長(zhǎng)旺盛的上部葉片和葉的背面，有利于吸收。這種方法適用于地勢(shì)不平地區(qū)，利用無人機(jī)進(jìn)行噴施。4.3.6與內(nèi)生真菌混施法將胞外代謝物與菌根真菌/深色有隔內(nèi)生真菌混拌勻后施入植物根部，為內(nèi)生真菌提供良好生存環(huán)境，便于內(nèi)生真菌與植物根系更好共生，加速生態(tài)快速穩(wěn)定建植與穩(wěn)定生長(zhǎng)發(fā)育。4.3.7與肥料混施法將胞外代謝物與有機(jī)肥或無機(jī)肥混合后施用，利用其保水保肥特性，提高養(yǎng)分利用率和土壤結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。該方法適用于需同步提高肥力的低產(chǎn)田提質(zhì)和礦山廢棄地改良。4.4施用要求4.4.1應(yīng)根據(jù)需要確定深色有隔內(nèi)生真菌胞外代謝物的施用時(shí)期、次數(shù)及數(shù)量參考當(dāng)?shù)匚锖蚱冢蓱?yīng)用于植被種植前的基肥，也可應(yīng)用于植物生長(zhǎng)期的追肥。根據(jù)不同適合的施用方式確定用量。4.4.2應(yīng)避免在高溫或強(qiáng)降雨天施用3T/GRM102—20244.5生物性能4.5.1促進(jìn)植物根系發(fā)育胞外代謝物能夠提高植物根體積和根系活力，改善根系結(jié)構(gòu)和促進(jìn)養(yǎng)分吸收。4.5.2提高植物養(yǎng)分吸收胞外代謝物中的肽類、黃酮類化合物等可以作為化學(xué)信號(hào)調(diào)節(jié)植物的養(yǎng)分吸收過，提高植物養(yǎng)分吸收能力和養(yǎng)分利用效率。4.5.3提高植物光合作用效率胞外代謝物作為葉面肥，有利于提高植物葉片蒸騰速率、凈光合速率、胞間二氧化碳濃度和氣孔導(dǎo)度。4.5.4改善土壤養(yǎng)分循環(huán)胞外代謝物可以作為有機(jī)碳源，提高土壤酶活性，促進(jìn)土壤中營(yíng)養(yǎng)元素的轉(zhuǎn)化與循環(huán)，增加土壤養(yǎng)分的有效性。4.5.5促進(jìn)土壤微生物活性胞外代謝物提供了豐富的碳源，作為微生物的營(yíng)養(yǎng)來源，能夠促進(jìn)土壤中微生物群落的生長(zhǎng)和活性，從而有助于提高土壤的生物學(xué)活性，提升土壤肥力，增加菌群的生物多樣性。5檢驗(yàn)方法5.1植物根系發(fā)育埋設(shè)根管監(jiān)測(cè)植物根系發(fā)育情況，測(cè)定指標(biāo)包括根直徑、根尖數(shù)、細(xì)根長(zhǎng)。5.2植物光合作用測(cè)定植物葉綠素含量，參照GB/T41727-2022農(nóng)用微生物菌劑功能評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)程執(zhí)行；通過植物光合儀監(jiān)測(cè)植物光合作用參數(shù)，包括蒸騰速率、凈光合速率、胞間CO2濃度和氣孔導(dǎo)度。5.3植物生長(zhǎng)能力測(cè)定植物蓋度、植株干重、根干重和根冠比，參照GB/T41727-2022農(nóng)用微生物菌劑功能評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)程執(zhí)行。5.4微生物檢測(cè)測(cè)定土壤有益微生物種群結(jié)構(gòu)與數(shù)量，參照GB/T40226-2021環(huán)境微生物宏基因組檢測(cè)高通量測(cè)序法的規(guī)定執(zhí)行。參照GB/Z41358-2022土壤健康綜合表征的生物測(cè)試方法、GB/Z41359-2022土壤質(zhì)量呼吸曲線法測(cè)定土壤微生物區(qū)系的豐度和活性。5.5土壤養(yǎng)分檢測(cè)參照GB/T42363-2023土壤質(zhì)量土壤理化分析樣品的預(yù)處理，GB/T42487-2023土壤質(zhì)量土壤硝態(tài)氮、亞硝態(tài)氮和銨態(tài)氮的測(cè)定氯化鉀溶液浸提流動(dòng)分析法和GB/T42490-2023土壤質(zhì)量土壤與生物樣品中有機(jī)碳含量與碳同位素比值、全氮含量與氮同位素比值的測(cè)定穩(wěn)定同位素比值質(zhì)譜法。6安全與環(huán)保要求符合環(huán)境保護(hù)相關(guān)法規(guī)要，不含有害病原微生物或重金屬，符合土壤安全標(biāo)準(zhǔn)，參考GB/T41728-2022微生物肥料質(zhì)量安全評(píng)價(jià)通用準(zhǔn)則。7包裝、標(biāo)識(shí)、運(yùn)輸和貯存4T/GRM102—20247.1包裝根據(jù)不同產(chǎn)品劑型選擇適當(dāng)?shù)陌b材料、容器、形式和方法，以滿足菌劑產(chǎn)品包裝的基本要求。產(chǎn)品包裝中應(yīng)有產(chǎn)品使用說明書，在使用說明書中標(biāo)明使用范圍、方法，用量及注意事項(xiàng)等內(nèi)容。液態(tài)菌劑可使用無菌塑料瓶灌裝；粉劑產(chǎn)