團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)中國(guó)動(dòng)物園協(xié)會(huì)發(fā)布I 1 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 4 4 5 6 6 8 9 本文件起草單位：北京動(dòng)物園管理處、杭州動(dòng)物園（杭州少年兒童公園杭州西湖風(fēng)景名勝區(qū)動(dòng)物化驗(yàn)室人員操作的重要參考，但不代表涵蓋所有檢測(cè)1動(dòng)物園獸醫(yī)化驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)操作指南第1部分：血常規(guī)檢測(cè)本文件適用于動(dòng)物園、野生動(dòng)物飼養(yǎng)場(chǎng)等機(jī)構(gòu)開展動(dòng)物血常規(guī)檢SN/T3592實(shí)驗(yàn)室化學(xué)藥品和樣品廢棄物處WS/T225臨床化學(xué)檢驗(yàn)血液標(biāo)本的收集與處理T/CAZG018動(dòng)物園動(dòng)物樣本采集和保存操作常規(guī)檢測(cè)routinetest血常規(guī)檢測(cè)completebloodcou4.1準(zhǔn)確性相應(yīng)的操作方法，按時(shí)完成檢測(cè)；必要時(shí)可將2注：全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀對(duì)多種動(dòng)物園動(dòng)物不適用；若有必要，可先進(jìn)行4.2.2化學(xué)品安全防護(hù)按GB18218規(guī)定辨別危險(xiǎn)化學(xué)品危險(xiǎn)源。儲(chǔ)劑的特性，做好防火、防毒、防爆及其他應(yīng)急準(zhǔn)備，防止事5.1通則5.1.1血常規(guī)檢測(cè)包括檢測(cè)多個(gè)項(xiàng)目的多種檢測(cè)方法，每種方法需要的器材、試劑和標(biāo)本不盡相同一5.2器材和試劑5.2.1器材）：托盤天平：用于離心管配白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)器、計(jì)數(shù)器（加法計(jì)數(shù)器）、計(jì)時(shí)器。振蕩器。2載玻片、蓋玻片、推玻片(可將邊緣光滑的載玻片一端兩個(gè)角分別用鑷3擦鏡紙或擦鏡布。5.2.2試劑3瑞氏-姬姆薩染色液：防止進(jìn)水，密封保存；配套試劑為磷酸鹽緩沖液。香柏油。二甲苯。mL，再加蒸餾水定容至100mL，混合氰化高鐵試劑：將文-齊氏液按說(shuō)明書規(guī)定用蒸餾水5.3標(biāo)本動(dòng)物園動(dòng)物樣本采集和保存參照T/CAZG018。血常規(guī)檢測(cè)所用標(biāo)本通常為抗凝全血，接收標(biāo)本時(shí)禽類和爬行類動(dòng)物血液，宜用肝素作抗凝劑；若在采血現(xiàn)場(chǎng)立即進(jìn)行血液稀釋或血涂片制作6.1.2一份標(biāo)本可用于一個(gè)或多個(gè)項(xiàng)目的檢測(cè)，不同項(xiàng)目檢測(cè)的先后順序可根據(jù)實(shí)際需要調(diào)6.1.3宜采用正文提供的檢測(cè)方法，注意針對(duì)不同種類動(dòng)物標(biāo)本宜采取的改進(jìn)措施；另外一些可選用6.1.4標(biāo)本送檢人員填寫檢驗(yàn)申請(qǐng)單（見圖C.1），填寫內(nèi)容主要包括申請(qǐng)單編號(hào)、動(dòng)物46.1.5對(duì)血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析判定時(shí)，需要對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)，本文件給出了部分動(dòng)物血常規(guī)指標(biāo)參考值（見附錄D）。動(dòng)物血常規(guī)檢測(cè)的結(jié)果受到動(dòng)物個(gè)體生理狀況及生存環(huán)境、檢測(cè)儀器及方法、操作人員6.1.6實(shí)驗(yàn)室宜做好對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)、圖片、影像等資料的記錄、整理和稀釋。禽類和兩棲爬行動(dòng)物血液用生理鹽水稀釋時(shí)如果發(fā)生溶血，可分別用0.75％氯化鈉溶液和0.65％氯化鈉溶液稀釋。凈的血蓋片從血細(xì)胞計(jì)數(shù)板下緣向前平推，蓋在方格（含80個(gè)小方格）內(nèi)的紅細(xì)胞。計(jì)數(shù)時(shí)，若紅細(xì)胞壓在方格邊線上，采用計(jì)上不計(jì)相差不超過均值的±10否則宜重做。若觀察到白細(xì)胞過多，則在高倍e)計(jì)算：紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（每升血液內(nèi)的紅細(xì)胞NR——5個(gè)中方格內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)。部分哺乳動(dòng)物（羚牛等）紅細(xì)胞數(shù)較多，若紅細(xì)胞計(jì)數(shù)超過10.00×1012/L，計(jì)數(shù)時(shí)宜5胞在計(jì)數(shù)池內(nèi)宜為均勻分布，各大方格內(nèi)白細(xì)胞數(shù)相差不超過均值的±10否則宜重做。e)計(jì)算：哺乳動(dòng)物白細(xì)胞計(jì)數(shù)（每升血液內(nèi)的白細(xì)胞W——哺乳動(dòng)物白細(xì)胞計(jì)數(shù)，式中×109為NW——4個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)。a)染色液準(zhǔn)備：將中性紅染色液和結(jié)晶紫染色液分別過濾，并加熱到41℃~42℃。c)計(jì)數(shù)板準(zhǔn)備、充池、計(jì)數(shù)：與哺乳e)計(jì)算：禽類白細(xì)胞計(jì)數(shù)（每升血液內(nèi)的白細(xì)胞×109NWB——4個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)。血紅蛋白測(cè)定方法較多，宜選用氰化高鐵血紅蛋白法，按以下步驟6c)計(jì)算：用分光光度計(jì)測(cè)定時(shí)，血紅蛋白（血紅蛋白濃度）c——血紅蛋白（血紅蛋白濃度單位為克每升（g/LA——吸光度值。紅細(xì)胞比容測(cè)定宜用溫氏法或微量比容法，微量比容法見附錄B.2，溫氏法按以下步驟進(jìn)行操作。胞分別計(jì)數(shù)，其中粒細(xì)胞可按桿狀核粒細(xì)胞和分葉核粒細(xì)胞進(jìn)一步分類計(jì)數(shù)，按以下步驟進(jìn)置于載玻片的一端（起始端）約三分之一處，一手持載玻片，另一手持推玻片，使推片的一端與載玻片尾端上面接觸，向起始端緩慢移動(dòng)觸及血滴后停止，待血液沿推玻片觸端散成一條均勻的直線后，使推玻片與載玻片起始端夾角保持在30o~45o,平穩(wěn)地推向載玻片尾端，制成只有單層細(xì)胞且分布較為均勻的血涂片。手持載玻片在空氣中揮動(dòng)，使血膜迅速充分干燥。血膜干燥后，可在血涂片起始端無(wú)血膜處的背面用記號(hào)筆標(biāo)記動(dòng)物、日期等相關(guān)信息。b)固定：在血涂片上滴無(wú)水甲醇數(shù)滴，固定1min～2min，待甲醇完全揮發(fā)、涂片干燥。若重點(diǎn)觀察嗜堿性粒細(xì)胞，宜延長(zhǎng)固定時(shí)間。c)染色：按每1.5mL磷酸鹽緩沖液（或蒸餾水）中，加入5滴～10滴瑞氏-姬姆薩染色液，配成應(yīng)用液，蓋滿血涂片。染色10min～20min。用清水沖去染色液，沖洗時(shí)，7將血涂片平放，緩緩沖洗掉染料沉淀物，避免先傾去染料再水洗。沖洗后晾干。d)分類計(jì)數(shù)：血涂片分頭、體、尾三部分，先用低倍鏡觀察全片中白細(xì)胞分布的情況，選擇適當(dāng)?shù)挠?jì)數(shù)部位，再用油鏡進(jìn)行分類。計(jì)數(shù)時(shí)可用白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)器，共計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞。宜從血涂片體尾相交處開始，由邊緣、中心迂回移片的順序分類，以防重復(fù)或漏數(shù)。若粒細(xì)胞過于集中于血涂片尾部和兩側(cè)，計(jì)數(shù)范圍宜擴(kuò)展至全片。白細(xì)胞太多者，可計(jì)數(shù)200個(gè)白細(xì)胞。白細(xì)胞太少者，可用2張以上血涂片計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞。計(jì)算出不同白細(xì)胞所占比例。e)結(jié)果報(bào)告：各類白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果以兩位小數(shù)或百分率表示，例如淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)值為0.33，亦可表示為33％。鏡檢中若發(fā)現(xiàn)異常紅細(xì)胞、異常白細(xì)胞及寄生蟲等特殊情況，一并寫入報(bào)告；若分類結(jié)果過于異常，則進(jìn)行復(fù)檢。裂、細(xì)胞核變形、胞漿內(nèi)形成空泡等影響細(xì)胞識(shí)別的情況。涂片檢查時(shí)，染色效果可能有所不同。宜通過試驗(yàn)確定緩沖液和染色液的比例以及染色時(shí)長(zhǎng)。有保存價(jià)值的血涂片可用二甲苯和擦鏡紙擦拭干凈后保存。如有新的效果良好的細(xì)胞染色技術(shù)或方8檢測(cè)原理A.1紅細(xì)胞計(jì)數(shù)原理胞總數(shù)比例較低，誤將白細(xì)胞計(jì)入后影響很小。如果A.2哺乳動(dòng)物白細(xì)胞計(jì)數(shù)原理A.3禽類白細(xì)胞計(jì)數(shù)原理A.4血紅蛋白測(cè)定原理血紅蛋白被高鐵氰化鉀氧化為高鐵血紅蛋白（Hi再與氰離子反將血液制成分布均勻的薄膜涂片，采用瑞-姬氏染色法或其他細(xì)胞染色方法，使各類血細(xì)胞著色不9b)在顯微鏡下觀察全片，了解白細(xì)胞的分布情況。乘以0.01；結(jié)果以兩位小數(shù)表示，單位為升每升（L/L亦可以用百不同品牌的微量比容測(cè)定離心機(jī)所用方法可能有所不同，按儀器說(shuō)明書中提供的表D.1給出了部分動(dòng)物血常規(guī)指標(biāo)參考值，表中數(shù)據(jù)來(lái)自不同研究資料，受影響×1012/L豹×1012/L豺-×1012/L貂貉×1012/L