PAGEPAGE3小鼠還原型谷胱甘肽(GSH)快速檢測試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用產(chǎn)品編號：CSB-E11897m檢測范圍：0.8ng/ml-200ng/ml特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的GSH，且與其他相關蛋白基本無交叉反應。有效期：6個月（2-8℃避光保存）預期應用：ELISA法定量測定小鼠血清，血漿及其它相關生物液體中GSH含量。說明濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。實驗原理采用競爭酶聯(lián)免疫法法檢測GSH含量。首先用一株單抗體包被微孔板，制備成固相抗體，然后加入待測標本及辣根過氧化物酶標記的另一株單抗，使之形成包被抗體-GSH-酶標記抗體的復合物。經(jīng)顯色后在酶標儀測定吸光值（OD值），通過計算機或作圖擬合濃度-吸光度曲線，反算出待測標本中GSH含量。試劑盒組成及試劑配制酶聯(lián)板(Assayplate)：一塊（96孔）。標準品（Standard）：5瓶（凍干品）。標準品為凍干品，使用前分別用0.5ml蒸餾水溶解，溶解后濃度分別為：StandardS1S2S3S4S5Concentration(ng/ml)0.83.112.550200酶結(jié)合物（HRP-conjugatedantibody）：1×6ml/瓶。顯色劑A（SubstrateA）：1×7ml/瓶。顯色劑B（SubstrateB）：1×7ml/瓶。濃洗滌液（WashBuffer）：1×15ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋20倍。終止液（StopSolution）：1×7ml/瓶需要而未提供的試劑和器材標準規(guī)格酶標儀高速離心機電熱恒溫培養(yǎng)箱干凈的試管和Eppendof管系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，最好用多通道移液器6. 蒸餾水，容量瓶等標本的采集及保存血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000xg離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000xg離心15分鐘，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：1000xg離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80注：以上標本置4℃保存應小于1周，-20℃或-80℃均應密封保存，-20℃不應超過1個月，-80℃不應超過2個月；標本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。操作步驟將各種試劑至室溫〔18-25℃〕平衡半小時，取濃縮洗滌液，根據(jù)當批檢測數(shù)量，用蒸餾水上1：20稀釋，混勻后備用。標準品Standard1-Standard5，第一次使用前先用0.5ml蒸餾水溶解，放置混勻后使用。將酶標板取出，設一個空白對照孔、不加任何液體；每個標準點依次各設兩孔，每孔加入相應標準品50ul；其余每個檢測孔直接加待測標本50ul。每孔加入酶結(jié)合物50ul（空白對照孔除外），充分混勻，貼上不干膠封片，置37℃溫育2小時。手工洗板，棄去孔內(nèi)液體。洗滌液注滿各孔，靜置10秒甩干，重復三次后拍干；洗板機洗板，選擇洗滌三次程序，洗板后拍干。每孔加顯色劑A液50μl，顯色劑B液50μl，振蕩混勻后，37℃避光顯色15分鐘，每孔加終止液50μl。用酶標儀讀數(shù)，取波長450nm，先用空白孔調(diào)零點，然后測定各孔OD值。數(shù)據(jù)處理手工作圖：用雙對數(shù)坐標紙，以標準品濃度為橫軸，以對應的0D值為縱軸，畫出平滑曲線或直線，在曲線上按照待測血清OD值找到對應的濃度值。計算機：使用線性擬合功能，應將標準品S1-S5的濃度取對數(shù)（Log(濃度)）作為X，將對應的OD值減去空白對照孔OD值后取對數(shù)（Log(OD值-NSB)）作為Y，進行線性擬合。再從擬合線上計算出待測血清濃度。注意事項從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及所需預包被板條應置室溫（18-25℃）平衡30分鐘后方可使用，余者應及時封好口，放回2-8℃中避光保存，以備后用。使用前試劑應搖勻。結(jié)果判斷須在反應終止后10